基于原子转移自由基聚合反应的高灵敏度蛋白质印迹方法研究

目的探索基于金纳米颗粒(AuNPs)和原子转移自由基聚合反应(ATRP)的蛋白质印迹高灵敏度检测方法。方法将AuNPs通过ATRP附着到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上,通过PVDF膜对小分子的吸附作用,提高检测灵敏度。结果改进后的PVDF膜(PVDF-ATRP-AuNPs)对目标小分子的截留效率提高了80%左右,检测限显著降低。结论改进后的方法具有良好的稳定性、优异的灵敏度,能对超低浓度小分子待测物进行有效检测。

RNF181与Hippo/YAP对脑胶质瘤SHG44细胞恶性程度的影响及其可能机制

目的探讨环指蛋白RNF181与Hippo/YAP对脑胶质瘤SHG44细胞恶性程度的影响及其可能机制。方法选取人脑胶质瘤细胞系SHG44细胞体外培养,腺病毒表达载体转染过表达RNF181,对比分析RNF181过表达对肿瘤细胞生长增殖能力、细胞干性和体外侵袭及转移能力;通过RT-PCR和Western blot实验检测RNF181及Hippo/YAP的表达,明确RNF181与Hippo/YAP的关系;最后通过免疫荧光共定位分析RNF181和YAP在SHG44细胞表达情况。结果转染后SHG44中RNF181 mRNA及蛋白相对表达量1.95±0.06、0.39±0.06,明显高于对照组1.05±0.03、0.23±0.06和Negative组1.03±0.04、0.24±0.07;YAP mRNA及蛋白相对表达量2.63±0.12、0.71±0.06,与对照组1.02±0.04、0.29±0.05和Negative组1.03±0.05、0.31±0.07比较,表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。MTT、免疫荧光和Transwell实验证实,RNF181过表达组细胞数、细胞增值率及SHG-44穿膜细胞数明显高于对照组和Negative组,差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光共定位检测表明RNF181和YAP在SHG44细胞核内共表达。结论RNF181过表达增加胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力,可能是通过Hippo/YAP信号途径实现的。