HIV-1新型重组毒株近似全长基因组结构鉴定分析

目的对3条人类免疫缺陷病毒(HIV)-1亚型不确定的近似全长基因组序列(NFLG)进行基因镶嵌结构分析。方法用近末端稀释法、系统发育树和基因重组断点分析等方法对3例男男同性恋(MSM)HIV-1感染病例进行HIV-1 NFLG扩增、基因亚型分析和基因重组图谱分析。结果Neighbor-joining进化树分析结果显示,3条HIV-1序列均为单独分支,可能是新型重组毒株。jpHMM在线软件和SimPlot v3.5.1软件综合分析结果显示,NFLG 110和NFLG 171分别为CRF07_BC和CRF01_AE,NFLG 150为CRF01_AE和CRF07_BC二代重组毒株。基因重组断点分析结果显示,NFLG 150的重组模式是以CRF07_BC全长基因组为骨架,在gag区和env区分别插入了1个长度约为60和80 bp的CRF01_AE基因片段。结论在MSM人群中发现1株HIV-1 CRF01_AE/CRF07_BC二代重组毒株,建议持续监测相关性传播,特别是MSM人群HIV-1新型基因重组毒株。

CXCR5、sPD-1、Hcy在AIDS患者治疗过程中的动态变化及临床意义

目的探讨获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者抗逆转录病毒治疗(ART)过程中血清趋化因子受体5(CXCR5)、可溶性程序性细胞死亡受体-1(sPD-1)、同型半胱氨酸(Hcy)的变化及临床意义。方法选取AIDS患者120例(AIDS组),分别在AIDS患者治疗前1 d及治疗后3、6、12个月检测其人类免疫缺陷病毒(HIV)-1载量、CD4+T细胞绝对数及CXCR5、sPD-1、Hcy、血脂[三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)]水平;以体检健康者45名作为正常对照组。采用Pearson相关分析评估各项指标与CD4+T细胞绝对数、HIV-1载量的相关性。结果AIDS组治疗前sPD-1和Hcy水平均显著高于正常对照组(P<0.01),CXCR5、CD4+T细胞绝对数均显著低于正常对照组(P<0.01)。与治疗前比较,随着ART时间的延长,AIDS患者CD4+T细胞绝对数、CXCR5水平均显著升高(P<0.05),在治疗6个月时达到峰值;Hcy、TC、TG、LDL-C在治疗12个月时显著升高(P<0.05);HDL-C无变化;治疗3个月时HIV-1载量开始降低(P<0.05),治疗6个月时降低更为显著(P<0.05);治疗12个月时血清sPD-1水平显著降低(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,CD4+T细胞绝对数与CXCR5、Hcy水平均呈正相关(r值分别为0.192、0.401,P<0.05),与sPD-1呈负相关(r=-0.708,P<0.05);HIV-1载量与CXCR5、Hcy均呈负相关(r值分别为-0.682、-0.318,P<0.05),与sPD-1呈正相关(r=0.368,P<0.05)。结论动态监测AIDS患者ART过程中CD4+T细胞绝对数、HIV-1载量、CXCR5、sPD-1、Hcy和血脂的变化,有助于及时了解HIV感染的进展情况。

HIV-1 感染者抗病毒治疗后耐药突变与影响因素分析

目的对河北地区治疗失败HIV-1感染者体内获得性耐药基因的突变情况进行调查,分析其影响因素。方法收集河北省2019年1—12月抗病毒治疗后病毒载量≥1000 CPs/mL HIV-1感染者的人口社会学信息及血浆标本,通过巢式反转录聚合酶链反应扩增HIV-1 pol基因序列,将测序结果与美国斯坦福大学HIV耐药数据库比对,分析HIV-1感染者耐药基因突变情况及影响因素。结果获得性耐药发生率为76.47%(104/136),其中94.23%(98/104)对非核苷类逆转录酶抑制剂耐药,EFV(依非韦伦)和NVP(奈韦拉平)耐药率高且多呈现高度耐药,主要突变位点为K103N、V106M和Y181C;68.26%(71/104)对核苷类逆转录酶抑制剂耐药,3TC(拉米夫定)和FTC(恩曲他滨)高度耐药最严重,主要突变位点为M184V/I。患者多选择一线药物为治疗方案(68.38%,93/136),非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)和核苷类逆转录酶抑制剂(NRTIs)的耐药差异有统计学意义(P<0.05)。Logistics回归分析显示民族和传播途径是影响耐药发生的独立危险因素,无危险因素进入多因素Logistics回归模型。结论获得性耐药成为治疗失败的主要原因,应尽早对感染者进行耐药监测,有针对性的使用药物,提高治疗效果。

男男同性恋人群治疗前HIV-1流行毒株及其变异研究

目的了解掌握男男同性恋者(men who have sex with men, MSM)人群治疗前人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(human immunodeficiency virus type one, HIV-1)流行毒株与基因变异特点。方法使用In-house方法进行耐药基因型检测,通过系统进化分析和HIV-1耐药数据库比对确定基因型和基因变异情况。结果石家庄市MSM人群中共有5种HIV-1基因型毒株在流行,CRF01AE是最主要流行毒株,占到56.8%(25/44),其次是CRF07BC 29.5%(13/44),URFs 9.1%(4/44),B亚型2.3%(1/44)和CRF5501B 2.3%(1/44)。URFs主要包括CRF01AE/B和CRF01AE/C两种重组模式。χ2检验显示不同基因型毒株在婚姻状况、年龄和首次CD4+ T淋巴细胞中的分布差异均有统计学意义(均有P<0.05)。发现1例MSM在HIV-1 NNRT编码区225位点处发生了耐药基因突变(P225H),原发耐药率为2.3%(1/44),可导致依非韦伦(EFV)和奈韦拉平(NVP)中度耐药。结论加强MSM人群中HIV-1流行和耐药监测研究对控制本市HIV疫情发展具有重要意义。

流动注射化学发光法测定发酵液中的2-酮基-L-古龙酸

在酸性介质中,高锰酸钾氧化罗丹明B产生化学发光信号,当该体系中存在2-酮基-L-古龙酸(2-KLG)时,体系发光信号显著增强。基于这一现象,建立了一种简单快速测定2-KLG的流动注射化学发光新方法,并且对试验条件进行优化。在最优条件下,2-KLG在0.2—60mg.L-1范围内与发光强度呈良好的线性关系,检出限是0.04mg.L-1。对2.0mg.L-1的2-KLG标准溶液平行测定11次,平行测得值的RSD为3.4%。将本法用于发酵液中2-KLG的测定,并与高效液相色谱法进行比较,结果令人满意。

保定市2019-2020年HIV-1感染者治疗前耐药分析

目的了解保定市HIV-1感染者治疗前耐药情况。方法采用In-House方法,对血浆样本进行pol基因区扩增并测序,将拼接好的序列提交至美国斯坦福大学的HIV耐药数据库,分析HIV-1毒株基因亚型和耐药突变位点。结果本研究中60例HIV-1感染者出现基因位点突变,然而只有10例出现低度以上耐药,原发耐药率为5.56%(10/180)。蛋白酶抑制剂(PIs)、核苷类逆转录酶抑制剂(NRTIs)、非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)的原发耐药率分别是0.56%(1/180)、0.56%(1/180)和4.44%(8/180)。HIV-1耐药毒株主要分布在CRF01_AE(50.00%,5/10)、B亚型(20.00%,2/10)、B+C亚型(20.00%,2/10)和A亚型(10.00%,1/10)中。结论保定市HIV感染者原发性耐药率高于WHO中等警戒线水平,应引起警惕,并制定有针对性的预防措施。

保定市HIV/AIDS患者抗逆转录病毒治疗一年病毒学失败率及耐药分析

目的 探讨保定市HIV/AIDS患者一线抗逆转录病毒治疗(ART)一年病毒学失败率,并分析基因型耐药情况及相关影响因素。方法 回顾性分析2018年1月-2020年5月在保定市人民医院接受一年ART的642例HIV/AIDS患者临床资料,对病毒载量(VL)≥1 000 CPs/mL的血浆样本进行HIV基因型和耐药检测。结果 ART一年,642例患者中95.48%(613/642)得到病毒学抑制(VL<1 000 CPs/mL),29例病毒学治疗失败(VL≥1 000 CPs/mL),一年病毒学治疗失败率4.52%(29/642)。病毒学治疗失败的29例患者血浆中获得28条HIV-1pol区基因序列,以CRF01_AE(46.43%)和CRF07_BC(39.29%)基因亚型为主。22例存在耐药突变位点,21例产生耐药,耐药率为72.41%(21/29)。对耐药患者进行了常见抗反转录病毒药物耐药分析,在核苷类逆转录酶抑制剂(NRTIs)中,57.14%(12/21)的患者出现了对拉米夫定(3TC)和恩曲他滨(FTC)的高度耐药,对替诺福韦酯(TDF)的高度耐药率是38.10%(8/21);在非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)中,对依非韦伦(EFV)、奈韦拉平(NVP)的高度耐药率达到了90.48%(19/21)和95.24%(20/21)。结论 保定市HIV/AIDS患者ART一年病毒学治疗失败率低于WHO中等警戒线(5.0%)水平,但失败者中耐药率较高,应加强患者ART过程中耐药检测,及时合理调整抗病毒治疗方案,并加强患者服药依从性教育,从而降低HIV/AIDS耐药性。

保定市男男性行为人群HIV-1基因亚型和传播网络研究

目的了解河北省保定市经男男同性性行为(men who have sex with men,MSM)途径感染HIV-1(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)的患者中,HIV-1亚型分布和分子传播网络情况。方法使用In-house方法扩增HIV-1 pol区目的基因序列,通过系统进化分析和HIV-1耐药数据库比对确定基因型和基因变异情况,并利用TN93模型计算pol序列基因距离,构建HIV-1分子网络。结果CRF01;E是最主要HIV-1毒株亚型,构成比为51.9%(94/181),其次是CRF07;C26.5%(48/181)、B亚型14.4%(26/181)和CRF103;1B2.8%(5/181),其它近年来新鉴定的流行重组毒株占4.4%(8/181);原发耐药率为8.3%(15/181);共有50条序列进入HIV-1分子网络,入网率为27.6%(50/181),共鉴别出17个传播簇,其中最大的一簇是CRF01;E,共有36个节点。结论河北省保定地区通过MSM途径感染HIV-1的人群中HIV-1亚型复杂多样,耐药率处于中等水平,加强耐药监测和防控措施,并对重点传播簇进行干预,对控制该地区疫情发展具有重要意义。