神经肽Y对小神经胶质细胞活化状态和生成TNF-α的影响及其作用机制

目的探讨神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)对原代小神经胶质细胞生物活性及生成肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的影响及其作用机制。方法培养原代大鼠皮层小胶质细胞,将细胞分为Control组、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)组、NPY+LPS组、NPY组和BIBP3226+NPY+LPS组,分别用无血清胶质细胞培养液、含LPS的无血清胶质细胞培养液、含NPY和LPS的无血清胶质细胞培养液、含NPY的无血清胶质细胞培养液和含BIBP3226、NPY和LPS无血清胶质细胞培养孵育细胞6 h。经免疫细胞化学荧光染色后,显微镜下观察小胶质细胞的形态学变化。ELISA方法检测培养液中TNF-α蛋白含量,RT-PCR方法检测小胶质细胞中TNF-αmRNA表达水平。结果 LPS组TNF-α的含量及细胞中TNF-αmRNA表达水平显著高于Control组(P<0.05),小胶质细胞处于活化状态;LPS+NPY组与LPS组相比,TNF-α蛋白和mRNA表达水平明显降低(P<0.05),小胶质细胞活化水平降低;BIBP3226+NPY+LPS组与LPS+NPY组相比,TNF-α蛋白和mRNA表达水平显著增高(P<0.05);LPS组与BIBP3226十NPY+LPS组差异无统计学意义;NPY组与Control组差异无统计学意义。结论 NPY可以降低小神经胶质细胞的生物活性,抑制其生成TNF-α,作用机制可能与NPY Y1受体有关。

小胶质细胞在癫痫中的作用

癫痫是一种慢性、反复发作的以颅内神经元异常同步放电为基础的中枢神经系统疾病,癫痫发作时,患者意识突然丧失会导致跌倒,发生外伤性损害,长期癫痫也会导致精神障碍、智力衰退等严重威胁着人们的健康。持续的癫痫发作还会导致患者死亡。过去人们研究癫痫的重点在神经元,现在发现胶质细胞在癫痫发生中也扮演着重要角色[1]。中枢神经系统中有3种胶质细胞：星形胶质细胞、少突胶质细胞和小胶质细胞。

NPY通过小胶质细胞介导的神经免疫途径对大鼠癫痫发作行为学影响

目的探讨神经肽Y(NPY)以中枢神经系统小胶质细胞为靶点对大鼠癫痫发作的影响。方法培养和纯化原代SD大鼠皮质小胶质细胞,免疫细胞化学染色,鉴定小胶质细胞纯度及观察细胞形态。将小胶质细胞分为对照组、LPS组、NPY+LPS组和BIBP3226+NPY+LPS组。对照组细胞以无血清胶质细胞培养液孵育6h,LPS组细胞以含终浓度为100ng/mLLPS的无血清胶质细胞培养液孵育6h,NPY+LPS组细胞是先以含NPY(终浓度为1μmol/L)的无血清胶质细胞培养液孵育0.5h,然后加入LPS(终浓度为100ng/mL)继续孵育6h。IBP3226+NPY+LPS组细胞先用含NPY Y1受体阻断剂BIBP3226(终浓度为1μmol/L)的无血清胶质细胞培养液孵育0.5h,再加入终浓度为1μmol/L的NPY孵育0.5h,最后加入终浓度100ng/mL的LPS继续孵育6h。20只SD大鼠随机分为对照组、LPS组、NPY+LPS组、BIBP3226+NPY+LPS组,每组5只。将各组小胶质细胞条件培养液离心后注入相应各组大鼠的侧脑室,观察各组大鼠的行为学表现。根据Diehl分级标准对大鼠癫痫发作程度进行评估。结果20min内,LPS组和BIBP3226+NPY+LPS组5只大鼠均出现重度癫痫发作,NPY+LPS组有4只出现轻度癫痫发作,对照组未见癫痫发作。LPS组发作程度显著重于对照组,NPY+LPS组发作程度显著轻于LPS组,BIBP3226+NPY+LPS组发作程度显著重于NPY+LPS组,LPS组和BIBP3226+NPY+LPS组发作程度比较差异均无统计学意义。结论激活后的小胶质细胞可以导致大鼠癫痫发作,这种作用是通过小胶质细胞与神经元之间的非直接接触途径实现的,可能与小胶质细胞分泌到细胞外的生物活性物质有关。NPY可以通过作用于小胶质细胞上NPY Y1受体,抑制大鼠的癫痫发作。

神经肽Y对小神经胶质细胞活化状态和生成TNF-α的影响

目的探讨神经肽Y(NPY)对原代小神经胶质细胞生物活性及生成肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法培养原代大鼠皮质小胶质细胞,经脂多糖(LPS)和NPY处理后行免疫细胞化学荧光染色,显微镜下观察LPS和NPY对小胶质细胞形态学的影响。将小胶质细胞分为对照组、LPS组、NPY+LPS组、NPY组和BIBP3226+NPY+LPS组,每组3个样本,培养各组细胞6 h。ELISA法检测培养液中TNF-α蛋白含量,RT-PCR方法检测小胶质细胞中TNF-αmRNA表达水平。结果 LPS处理后小胶质细胞处于活化状态,NPY处理后的小胶质细胞活化水平降低。LPS组和IBP 3226+NPY+LPS组培养液中TNF-α蛋白含量及细胞中TNF-αmRNA表达水平显著高于对照组(P均<0.05);LPS+NPY组TNF-α蛋白含量和TNF-αmRNA表达水平明显低于LPS组和IBP3226+NPY+LPS组(P均<0.05)。结论 NPY能够降低小神经胶质细胞的生物活性。NPY可能通过激活NPY Y1受体抑制小神经胶质细胞生成TNF-α。