欧前胡素对人前列腺癌PC3细胞增殖凋亡及RhoA/ROCK1信号通路的影响

目的:探讨欧前胡素对人前列腺癌PC3细胞增殖、凋亡及Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(ROCK1)信号通路的影响。方法:设PC3细胞组、5-氟尿嘧啶组(100μg/mL)、欧前胡素低、高剂量组(60μg/mL、120μg/mL),以上各组每孔设6个平行样,培养72h。噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖,Transwell腔室系统测定细胞侵袭迁移水平,流式细胞仪测定细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法及蛋白免疫印迹法测定细胞RhoA、ROCK1 mRNA和蛋白水平。结果:与PC3细胞组比较,5-氟尿嘧啶组、欧前胡素低、高剂量组OD值、存活率、穿膜数、RhoA、ROCK1 mRNA和蛋白表达水平降低,凋亡率升高(P<0.05);与5-氟尿嘧啶组比较,欧前胡素低、高剂量组OD值、存活率、穿膜数、RhoA、ROCK1 mRNA和蛋白表达水平升高,凋亡率降低(P<0.05);与欧前胡素低剂量组比较,欧前胡素高剂量组OD值、存活率、穿膜数、RhoA、ROCK1 mRNA和蛋白表达水平降低,凋亡率升高(P<0.05)。结论:欧前胡素能明显抑制人前列腺癌PC3细胞增殖、侵袭迁移,促进其凋亡,其机制可能与欧前胡素抑制人前列腺癌PC3细胞RhoA、ROCK1 mRNA和蛋白表达进而抑制RhoA/ROCK1信号通路的激活有关。

中等强度游泳运动大鼠非酒精性脂肪性肝病模型血生化指标的变化

目的:观察中等强度游泳运动对大鼠非酒精性脂肪性肝病模型体质量、肝脏质量和血生化指标的影响。方法:实验于2005-03/07在河北省医学科学院实验室进行。取22只雄性SD大鼠单纯随机分为3组:①对照组(n=6):给予普通饮食8周。②模型组(n=8):喂高脂饲料(普通饲料的基础上加10%猪油和2%的胆固醇)8周。③运动组(n=8):喂高脂饲料,并进行中等强度的游泳运动,游泳每周5d,1次/d,90min/次,共8周。8周后测定各组大鼠体质量后处死大鼠,测定肝脏质量(湿),检测血清谷草转氨酶和谷丙转氨酶、三酰甘油、游离脂肪酸水平,并比较各组肝脏组织切片观察肝细胞脂肪变性程度。结果:21只大鼠进入结果分析。①实验8周后模型组体质量和肝脏质量(湿)显著高于对照组和运动组(P<0.05)。②模型组血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶都显著高于对照组[(912.18±252.71),(419.25±74.34)nkat/L;(3.28±0.78),(2.19±0.33)μkat/L,P<0.05],运动组谷丙转氨酶显著低于模型组[(536.94±186.7)nkat/L,P<0.05]。③模型组和运动组三酰甘油水平都高于对照组[(0.96±0.10),(0.68±0.06),(0.57±0.04)mmol/L,P<0.05],但运动组低于模型组(P<0.05)。④各组大鼠游离脂肪酸水平差异无显著性意义(P>0.05)。⑤模型组肝细胞脂肪变性程度显著重于对照组(P<0.05),运动组显著轻于模型组(P<0.05),但仍然显著比对照组严重(P<0.05)。结论:中等强度的游泳运动能降低非酒精性脂肪性肝病模型大鼠血清谷丙转氨酶活性和三酰甘油水平,减轻肝细胞脂肪变性程度,提示中等强度的游泳能在一定程度上预防高脂饮食造成的非酒精性脂肪性肝病。

环孢素A对前列腺癌PC-3细胞紫杉醇耐药的实验研究

目的:研究分析环孢素A对前列腺癌PC-3细胞紫杉醇耐药的作用及机制。方法:采用逐渐增量法建立PC-3耐药细胞株(PC-3R),分为空白对照组(未处理)、多西紫杉醇组(10-5 mol/L)及环孢素A低、中、高剂量组(10-5 mol/L多西紫杉醇+5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL环孢素A),采用MTT法检测不同浓度多西紫杉醇对PC-3、PC-3R细胞株增殖抑制率以及不同剂量环孢素A联合紫杉醇对PC-3R细胞增殖抑制作用;采用流式细胞技术检测环孢素A联合紫杉醇对PC-3R细胞凋亡及细胞周期的影响;Western blotting法检测环孢素A联合紫杉醇对MTDH蛋白表达的影响。结果:随着多西紫杉醇浓度的增加,PC-3以及PC-3R细胞株增殖抑制率明显升高,且同一浓度下PC-3细胞株抑制率明显高于PC-3R(P<0.05)。多西紫杉醇组及环孢素A各剂量组细胞增殖抑制率及凋亡率均高于空白对照组,环孢素A低、中、高剂量组细胞增殖抑制率及凋亡率均高于多西紫杉醇组,并呈剂量依赖性(均P<0.05)。多西紫杉醇组及环孢素A各剂量组细胞G0/G1期比例较空白对照组显著升高,而S期显著降低(P<0.05);随着环孢素A药物浓度的增加,G0/G1期显著升高,S期比例显著降低(P<0.05);环孢素A低、中、高剂量组MTDH蛋白相对表达量较空白对照组及多西紫杉醇组明显降低,并呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:环孢素A可促进前列腺癌耐药细胞株PC-3R化疗敏感性,其作用机制可能与促进细胞凋亡、阻滞细胞周期及下调MTDH蛋白表达有关。

乳腺癌异黏蛋白的表达对紫杉醇药物敏感性的影响

目的观察异黏蛋白（MTDH）基因转染乳腺癌细胞上调和沉默前后对紫杉醇药物敏感性的影响。方法通过RNA干扰（RNAi）的方法使高表达MTDH细胞株人乳腺癌细胞MCF-7／ADRMTDH基因沉默，同时通过脂质体转染法对MTDH低表达细胞株人乳腺癌细胞MDA—MB-231进行MTDH基因转染；实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）和Westernblot验证两种细胞株的沉默及转染效果，噻唑蓝（MTF）比色法绘制两种细胞株转染前后的生长曲线及对紫杉醇药物敏感性的影响，流式细胞术测定紫杉醇作用转染前后乳腺癌细胞的凋亡。结果MTDH一小干扰RNA（siRNA）-2为沉默效果最佳的siRNA；Real—timePCR及Westernblot结果显示，使MCF-7／ADR细胞MTDH基因沉默后MTDHmRNA和蛋白表达水平分别为1．026±0．126、0．227±0．021和1．419±0．012、0．037±0．013（P〈0．05），证明MTDH沉默成功；而转染高表达MTDH质粒进入MDA—MB-231后，MTDHmRNA和蛋白表达水平分别为1．00±0．00、3．25±0．02和0．48±0．07、1．27±0．08（P〈0．05），证明转染成功；噻唑蓝（MTT）显示沉默MTDH后使MCF-7／ADR细胞增殖受到明显抑制，同时沉默前后8mg／L的紫杉醇在24h对MCF-7／ADR的抑制率分别为（40．72±3．11）％和（70．44±3．84）％（P〈0．05），凋亡率分别为（1．36±0．14）％和（17．21±1．35）％（P〈0．05）；MTDH基因转染后对MDA—MB-231细胞增殖起到促进作用，同时转染前后8mgCL的紫杉醇在24h对MDA—MB-231细胞的抑制率分别为（58．00±0．38）％和（40．52±0．03）％（P〈0．05），凋亡率分别为（24．88±0．37）％和（13．97±0．50）％（P〈0．05）。结论MTDH基因对乳腺癌细胞的增殖具有促进作用，MTDH基因高表达可能与降低乳腺癌细胞对紫杉醇药物的敏感性有关。