异基因半相合CIK细胞治疗晚期非小细胞肺癌临床分析

目的探讨异基因半相合细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cell,CIK)治疗晚期非小细胞肺癌的临床疗效。方法 25例晚期非小细胞肺癌患者接受CIK细胞治疗。采用患者子女的外周血(异基因半相合)分离单个核细胞置于CD3 Mc Ab和Retro-Nectin包被细胞培养瓶后,悬浮细胞用干扰素-γ、白介素-1α(interleukin-1α,IL-1α)、IL-2细胞因子诱导CIK细胞。14天后锥虫蓝染色检测活性,流式细胞仪检测CIK细胞表面标志物。患者回输CIK细胞后,检测患者外周血的细胞表型变化。参照WHO的实体瘤疗效评价标准评估疗效。结果 CIK细胞培养到第14天时为10.7×109个,锥虫蓝染色检测活性为(98.2±1.0)%。流式细胞仪检测到CD56+CD16+CD3+细胞较培养前显著增加[(30.2±1.5)%vs(6.0±2.0)%,P<0.05]。患者回输后外周血CIK细胞第10天、第20天较回输前显著增加(P<0.05)。CIK细胞回输后临床评估CR 10例,PR 8例,NC 5例,PD 2例,总有效率(CR+PR)为72.0%,中位缓解期为10.1月,中位生存期为12.0月,1年生存率为64.0%(16/25)。患者无骨髓抑制、脱发、静脉炎和消化道反应。结论异基因半相合CIK细胞治疗晚期非小细胞肺癌能延长患者生存期,提高生存质量,不良反应轻。

自体NK细胞免疫治疗对亚健康人群生活质量的临床研究

目的观察自体NK细胞免疫治疗对亚健康人群的疲劳、睡眠及生活质量的影响。方法对32例亚健康患者进行自体NK细胞治疗4周期,对比治疗前、2周期后、4周期后及6个月后患者的疲劳、睡眠及生活质量改善情况。结果亚健康人群经自体NK细胞治疗2周期、4周期及6个月后生活质量均较治疗前提高,差异有统计学意义(P<0.05);睡眠质量及疲劳情况同样有改善,但在治疗4周期及6个月后较治疗前差异有统计学意义(P<0.05),治疗2个周期时较治疗前差异无统计学意义(P>0.05)。结论亚健康人群中疲劳、睡眠障碍的发生率较高,通过自体NK细胞免疫治疗可明显改善亚健康人群的疲劳、睡眠及生活质量。

重组人血管生成素-1与肺间质纤维化血管正常化时相的关系

目的探讨重组人血管生成素1（Human Angiopoietin-1,rHuANG-1）对小鼠模型肺间质纤维化微血管正常化的最佳时相及其分子机制。方法将40只C57/BL6小鼠按掷硬币法随机分成对照组和实验组,每组各20只。对照组腹腔注射生理盐水（NS）（0.2ml/d）;实验组腹腔注射rHuANG-1（5mg·kg^-1·d^-1）。每组分别于治疗后的第2、4、6、9天处死5只小鼠留取标本。测量小鼠肺组织羟脯氨酸含量变化。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肺组织中G蛋白调节信号5（regulator of G-protein signaling 5,RGS5）蛋白浓度,苏木精-伊红（HE）染色检测肺组织病理变化,免疫组织化学形态学分析血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的变化。结果1成功建立C57/BL6小鼠肺间质纤维化模型。2实验组接受rHuANG-1注射后,第6天,第9天肺羟脯氨酸含量降低（P〈0.01）。3 ELISA结果显示,实验组肺组织中RGS5的表达在治疗第4天和第6天与对照组比较明显增高（P〈0.05）。4HE染色结果显示,实验组和对照组不同时间点均可见不同程度的肺纤维化。对照组坏死程度高于实验组。其中,实验组第4天和第6天组织修复最明显,而对照组不同时点肺间质纤维化比较明显。5免疫组织化学结果表明,与对照组相比,实验组第4、6天VEGF在肺间质纤维化中的表达率升高明显减少（P〈0.05）。结论rHuANG-1作用于小鼠肺间质纤维化后第4~6天可作为血管正常化时间窗,可能与VEGF相关。

管理人群亚健康状态的症状及原因探讨

目的调查管理人群的亚健康症状,进一步分析主要原因。方法通过发放Delphi方法调查表对212名管理人员进行问卷调查,收回有效问卷206份,进行整理并分析。结果 206名调查者中亚健康状态者占65.05%（134/206）,主要症状表现为疲劳、头痛或头晕、焦虑、多梦休息不好、情绪差及容易患感冒或其他疾病等,年龄主要集中在38~46岁,女性发病比例多于男性。结论管理人群中处于亚健康状态者占1/2以上,需引起重视,并进行及时的干预,预防进一步发展为严重疾病。

自体细胞免疫治疗对亚健康人群疲劳及细胞免疫功能的效果研究

目的观察自体NK细胞输注对亚健康人群的疲劳及细胞免疫功能的影响。方法 32例亚健康患者给予自体NK细胞免疫治疗4个周期,随访6个月,治疗前后进行疲劳评定量表调查及细胞免疫功能检测。结果亚健康患者经自体NK细胞治疗4周期及6个月后外周血CD8+细胞较治疗前下降,CD3+、CD4+及CD4+/CD8+比值较治疗前均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗4周期及6个月后疲劳程度较治疗前明显减轻(P<0.05)。结论自体细胞免疫治疗可缓解亚健康人群的疲劳症状,并增强其细胞免疫功能,提高生活质量。

K652重组表达IL-6基因对NK细胞表型和功能的影响

目的:为了研究表达IL-6的重组K562细胞对自然杀伤细胞(NK)细胞的扩增数量、表型和功能的影响。方法:根据人类IL-6 c DNA的5'端序列,设计PCR引物以K562细胞c DNA文库的DNA为模板进行扩增,表达,转染,在K562细胞上表达IL-6基因,构建重组的K562工程细胞作为刺激细胞,以人外周血单个核细胞(PBMC)为扩增培养对象,使NK细胞在体外培养条件下得到大量的扩增。流式细胞仪分析NK细胞表型。将NK细胞作用到K562细胞,对其杀伤性进行功能分析,51Cr释放实验检测NK细胞对K562细胞杀伤水平的影响。结果:成功构建了表达IL-6的重组K562细胞,和PBMC共同孵育后,培养体系经过21 d的刺激后,IL-6重组K562细胞诱导PBMC扩增,CD56+CD16+CD3-细胞数量比诱导前扩增了(760±18)倍,CD56+CD16+CD3-细胞的纯度从培养前占PBMC的6%±0.4%,扩增后第3组结果比未扩增的多了91%±2%。细胞毒实验表明,在NK效应细胞∶K562靶细胞为5∶1时,扩增的NK细胞的杀伤率达到了92%±2%。结论:本方法以重组K562为刺激细胞,能够实现NK细胞体外的大规模制备,建立了优化的NK细胞体外扩增方法,且扩增的细胞杀伤K562细胞的活性较好。对于NK的大量扩增和应用于临床具有重要的指导意义。

NK细胞对A549细胞的β-catenin信号通路影响

目的:研究NK细胞对肺腺癌细胞系A549的杀伤作用.方法:无菌采集健康人外周血,培养NK细胞,对A549细胞进行杀伤活性的实验,检测NK对A549的杀伤活性,同时用Western blot检测A549细胞中β-catenin的表达.结果:NK对A549的杀伤率为82.64%,β-catenin的条带变浅,蛋白表达量逐渐降低.结论:NK对A549具有杀伤力,同时能够阻断A549细胞中的Wnt/β-catenin信号通路,可成为免疫治疗肺癌的一种新方法.

IL-21对NK细胞表型和功能的影响

目的为了研究表达白细胞介素-21(IL-21)对自然杀伤细胞(NK)细胞的扩增的数量、表型和功能的影响。方法以人外周血单个核细胞(PBMC)为扩增培养对象,实验组加入IL-21,在体外培养条件下使NK细胞大量的扩增。采用流式细胞仪检测NK细胞表型。NK细胞作用到K562细胞,对NK细胞的杀伤性进行功能分析,^(51)Cr释放实验检测NK细胞对K562细胞杀伤水平的影响。结果 IL-21加入到PBMC后,培养体系经过23 d的刺激后,IL-21诱导PBMC扩增,CD56+CD16+CD3-细胞数量比对照组增加了2.6倍,对照组CD56+CD16+CD3-细胞的纯度为26.5%±1.7%,实验组扩增后是73.9%±2.1%。细胞毒实验表明,在NK效应细胞:K562靶细胞为10∶1和20∶1时,实验组明显高于对照组。结论本方法以单纯的添加细胞因子IL-21的方法,能够实现NK细胞体外扩增,建立了更优化的NK细胞体外扩增方法,且扩增的NK细胞对K562细胞的杀伤活性较好。本实验对于NK的大量扩增和临床应用具有一点的指导价值。