基于网络药理学和实验验证探究芒果苷钠盐对动脉粥样硬化的作用机制

基于网络药理学、分子对接和细胞实验验证的方法探究芒果苷钠盐(MF-Na)治疗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的作用机制.利用TCMSP、STITCH、SWISS、SEA数据库筛选出MF-Na的作用靶点,利用OMIM、GAD、Genecards数据库筛选出AS疾病作用的相关靶点,分别绘制药物靶点、疾病靶点的相互作用网络图.利用Cytoscape3.6.1软件,绘制“化合物-靶标-通路-疾病”关系网络并进行分析.对筛选出的靶点基因进行GO分析和KEGG分析,采用AutoDock Vina软件进行分子对接,评估筛选靶标.最后采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测了体外TNF-α、NF-κB、IL-6、CCL2和CXCL1的含量,并用免疫细胞化学检测了NF-κB p65和NF-κB p50的表达.筛选出MF-Na相关靶点119个,AS相关靶点433个,药物-疾病共同靶点23个,富集到通路46条.细胞实验证明:MF-Na能显著降低TNF-α、NF-κB、IL-6、CCL2和CXCL1的表达水平,并经过TNF-α/NF-κB/CCL2通路发挥作用.利用网络药理学筛选了MF-Na抗AS的潜在靶点,经实验验证发现MF-Na可能是经过TNF-α/NF-κB/CCL2途径降低炎症因子表达,进而发挥治疗AS的作用.

聚类分析辅助中药寡糖电泳分析鉴定中药

基于中药多糖结构的复杂性和特征性,针对多糖部分降解后的寡糖片段,建立了一种采用毛细管区带电泳法(CZE)分离分析中药寡糖,并利用其特征性电泳谱图信息,结合聚类分析(CA)进行中药鉴定的方法。该方法以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)为寡糖柱前衍生化试剂,对3个科属的6种中药如黄精、玉竹等同时进行鉴定。采用的电泳条件:未涂层熔融石英毛细管柱(49 cm(有效长度40 cm)×50μm),以50 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH2.5)为运行缓冲液,检测波长为245 nm,运行电压为15 kV,虹吸进样10 cm×4 s,柱温为室温。结果表明聚类分析辅助中药寡糖电泳分析法可有效用于3个科属6种中药的鉴定。本方法结果可靠,重现性好,可以作为中药鉴定的一种有效手段。

分子印迹固相萃取技术在动物源食品中药物残留检测中的应用进展

以分子印迹材料作为特效吸附剂的分子印迹固相萃取技术具有从复杂样品中选择性吸附目标分子及其结构类似物的能力,较好地克服了由于样品复杂所带来的内源性干扰问题,因此非常适用于复杂样品的预处理与富集。本文介绍了分子印迹固相萃取技术的原理、最新进展以及相关萃取参数的优化过程,对近几年国内外分子印迹固相萃取技术在动物源食品中药物残留检测方面的应用进行了总结;阐明了分子印迹固相萃取技术在实际应用中存在的不足,并对其未来的发展进行了展望。

胶束电动毛细管色谱法测定硫酸多粘菌素E药物中的多粘菌素E1和E2

采用胶束电动毛细管色谱法(MECC)对硫酸多粘菌素E药物中的主要成分多粘菌素E1和E2进行了分离,并测定了多粘菌素E1、E2的含量。分别考察了电泳电压、表面活性剂种类、Brij-35(月桂醇聚氧乙烯醚)浓度、乙腈含量、磷酸盐缓冲液的pH值、氯化钠浓度等实验参数对实验结果的影响,从而确定了最佳的分离条件:电泳电压为10kV,运行缓冲液为含有30mmol/L Brij-35、5%(体积分数)乙腈、0.167mol/L氯化钠的磷酸二氢钠缓冲液(0.01mol/L,pH4.1)。在优化的实验条件下,E1和E2得到了较好的分离,分离度达到1.94。以多粘菌素E1为例,柱效和峰面积的日间及日内测定的相对标准偏差(RSD)均小于5%。E1和E2在硫酸多粘菌素E药物中的含量分别为67%和32%。该方法简便、快速、准确、重现性好。

蔷薇红液中主要成分的GC-MS分析

采用气相色谱-质谱联用法对蔷薇红液中的主要成分进行定性分析。结果表明,从山楂核馏油提取物中共分离出6种目前尚未见报道的有机化合物。

双嘧达莫嵌段共聚物胶束的制备及体外药物释放

以聚癸二酸酐-聚乙二醇-聚癸二酸酐为载体材料,采用沉淀/溶剂挥发法制备双嘧达莫载药胶束,DLS法测定胶束的粒径,紫外分光光度法测定胶束的载药量、包封率和药物的释放度.结果发现载药胶束的粒径大于空白胶束的粒径;随着共聚物中疏水链段比例的增加,胶束的载药量和包封率都上升,而且药物释放时间延长;调节嵌段共聚物的链段组成,可以调节药物的释放动力学过程.

脑多肽对PCPA诱导的睡眠障碍小鼠5-羟色胺系统和肠道菌群的影响

为探究脑多肽对昆明小鼠睡眠和肠道菌群的影响,通过小鼠神经递质含量和氧化应激水平的变化,分析肠道菌群与睡眠之间的联系.腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)建立睡眠障碍模型,连续灌胃给药7 d,通过戊巴比妥钠睡眠协同实验、悬尾和明暗箱实验以及小鼠神经递质和氧化应激水平的变化,分析脑多肽对睡眠障碍小鼠镇静催眠功能的影响;苏木精-伊红染色法(H&E)和糖原染色法(AB-PAS)观察小鼠海马及结肠组织病理变化;收集粪便,进行16S rRNA基因测序,分析小鼠肠道菌群丰度的变化.结果表明:脑多肽高、低剂量组小鼠睡眠时间显著增加,睡眠潜伏期显著缩短,MDA含量显著降低,5-HT、GABA、MT含量、GSH-Px和SOD酶活均显著升高(P<0.05);小鼠海马CA1区神经元细胞排列整齐,胞核固缩深染现象改善,结肠组织中炎症细胞浸润减少;脑多肽高剂量组拟杆菌门丰度显著升高,乳杆菌属、双歧杆菌属丰度显著升高(P<0.05),拟杆菌属丰度与GSH-Px的变化趋势呈显著正相关,乳杆菌属丰度与5-HT、MT、SOD的变化趋势呈显著正相关(P<0.05).脑多肽通过调节肠道菌群正向调节血清内神经递质和脑组织氧化应激水平,有效治疗PCPA诱导的小鼠睡眠障碍症状,随着剂量增加治疗效果明显提高.

谷氨酸铁螯合物对缺铁性贫血小鼠的补铁效果评价

为评价自制谷氨酸铁(Glu-Fe(Ⅲ))和谷氨酸亚铁(Glu-Fe(Ⅱ))的补铁效果,采用低铁饲料联合放血法建立缺铁性贫血(IDA)小鼠模型,并将IDA小鼠随机分成硫酸亚铁组、市售右旋糖酐铁组、Glu-Fe(Ⅱ)组和Glu-Fe(Ⅲ)组,分别灌胃给予同等铁剂量的不同补铁剂4周,并以IDA小鼠为阴性对照、正常小鼠为空白对照组进行比较.用全自动血液分析仪监测小鼠血中血红蛋白(HGB)、红细胞(RBC)和血细胞比容(HCT)变化,采用血清铁(SI)、总铁结合力(TIBC)和转铁蛋白(TRF)试剂盒测定小鼠体内铁状况并测定小鼠组织(心、肝、脾和肾)铁含量,利用总超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)试剂盒检测各种补铁剂对小鼠体内抗氧化的影响.结果显示:IDA小鼠建模成功,Glu-Fe(Ⅲ)和Glu-Fe(Ⅱ)可提高IDA小鼠的HGB、RBC和HCT值,降低TIBC和TRF水平并提升SI含量,而Glu-Fe(Ⅲ)补铁剂效果更佳.此外,相比硫酸亚铁和右旋糖酐铁,饲喂Glu-Fe(Ⅲ)在改善IDA小鼠内脏器官(心、脾和肾)肿大、促进肝恢复、提升肝脾储铁、清除组织活性氧(ROS)且增强抗氧化活性等方面表现更佳.

荆芥不同部位3种重金属元素含量的比较分析

测定荆芥药材不同药用部位中铅(Pb)、镉(Cd)、镍(Ni)3种重金属元素的含量,比较分析荆芥不同部位的污染状况.对荆芥样品进行湿法消解,采用石墨炉原子吸收光谱法(GFAAS)测定样品中Pb、Cd、Ni含量,以质量分数2%磷酸二氢铵-1.67%硝酸镁作为基体改进剂测定Pb、Cd;以质量分数0.2%硝酸钯-2%磷酸二氢铵作为基体改进剂测定Ni.Pb、Cd、Ni的测定波长分别为283.3、228.8和232.0nm,灯电流分别为10、6和25mA;狭缝分别为0.7、0.7和0.2L.Pb、Cd、Ni元素线性关系分别为Y=0.002 8 X+0.002 7(r=0.998 9)、Y=0.034 8 X+0.005 4(r=0.998 3)和Y=0.002 9 X+0.004 3(r=0.998 4),回收率为98.2%～102.9%;荆芥梗中Pb、Cd和Ni的质量分数测定结果分别为0.55～0.95、0.05～0.11和0.1～1.22mg/kg;荆芥穗质量分数测定结果分别为0.58～1.73、0.03～0.14和0.18～1.42mg/kg.重金属元素Pb、Cd、Ni检测方法可靠,随着采收时间延长,重金属元素易由荆芥梗向荆芥穗中富集,为荆芥重金属限度质量标准制定以及临床用药部位的选择提供参考.

多糖部分降解产物在板蓝根颗粒多糖成分分析中的应用

板蓝根多糖的药理活性与板蓝根的功效一致,其部分降解产物的毛细管区带电泳(CZE)图谱特征性强,可用于板蓝根颗粒中多糖类成分的定性分析.首先采用酶法去除板蓝根颗粒中糊精等辅料的干扰,所得板蓝根多糖在盐酸浓度0.5 mol/L,温度80℃条件下部分降解4 h,以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)为衍生试剂,采用毛细管区带电泳法测定其部分降解产物图谱.电泳条件:未涂层弹性石英毛细管柱(70 cm×50μm,i.d,有效长度61 cm),运行缓冲液为40 mmol/L硼砂缓冲液(pH 10.1),检测波长245 nm,运行电压17 kV,室温下重力进样10 cm×15 s,进而运用聚类分析(CA)对该产物的CZE谱图进一步探讨.结果表明:CZE图谱在低聚糖部分具有差异,而单糖组成相对稳定,均含木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、甘露糖和半乳糖等,结合板蓝根药材相应谱图,从低聚糖和单糖上进行比对可达到鉴别目的,且发现不同厂家产品之间多糖含量存在较大差异.板蓝根颗粒中多糖部分降解产物CZE图谱的建立完善了该药品的质量控制,同时也为其药效物质研究及其他相关中药制剂中多糖的质量控制提供参考.

甘露糖醛酸寡糖增敏环丙沙星抑制大肠埃希菌机制的研究

通过考察大肠埃希菌(Escherichia.coli)体内环丙沙星(ciprofloxacin,CPFX)的含量以及联用不同浓度甘露糖醛酸寡糖(MOS)对CPFX抑制E.coli效果的影响,探讨了MOS增敏CPFX抑制E.coli活性的作用机制.在菌液中加入CPFX和不同质量浓度的MOS,37℃培养150 min,观察抑菌效果,并用HPLC法测定E.coli体内CPFX的含量,同时通过激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)观察E.coli体内CPFX的荧光强度进行验证.还考察了Ca^(2+)对MOS增敏CPFX抑菌效果的影响.结果显示:CPFX与高浓度的MOS联用时,E.coli体内CPFX的含量较低;与较低浓度的MOS联用时,E.coli体内CPFX的含量较高,与其抑菌实验联用MOS高浓度时拮抗,低浓度时增敏的结果一致.Ca^(2+)的加入,在一定程度上逆转了高浓度MOS与CPFX的拮抗作用.该研究可为新型抗菌增效剂的开发和抗耐药菌感染的临床应用提供参考.

谷氨酸铁的制备及表征

将谷氨酸(Glu)与三价铁离子(Fe^(3+))螯合,制备谷氨酸铁螯合物Glu-Fe(Ⅲ),并采用傅里叶变换红外光谱(FT-IR)、差示扫描量热(DSC)和热重(TGA)分析法对其结构进行表征,证实Glu与Fe^(3+)成功发生螯合反应.采用间接碘量法测定Glu-Fe(Ⅲ)中的Fe^(3+)质量分数,并以其为评价指标,通过单因素实验和Box-Benhnken设计(BBD),考察Glu和Fe^(3+)的物质的量比及反应pH、时间、温度4个因素对制备Glu-Fe(Ⅲ)螯合物中Fe^(3+)质量分数的影响.最终在Glu与Fe^(3+)物质的量比为3∶5,反应pH为4.8、温度为50℃和反应时间为3 h的条件下,获得Fe^(3+)质量分数为19.91%的Glu-Fe(Ⅲ)螯合物.制备出的Glu-Fe(Ⅲ)可作为同时补充谷氨酸和铁的营养强化剂.

玉屏风口服液多糖特征降解谱的建立和应用

建立了玉屏风口服液多糖(YPF-P)的特征降解谱,并基于此完善该制剂的质量控制,通过体积分数70%乙醇溶液沉淀得到YPF-P,同时去除口服液中的辅料蔗糖.优化的YPF-P部分降解条件为0.5 mol/L盐酸溶液,温度80℃,时间4 h,随后采用毛细管区带电泳法(CZE)对经过1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生后的YPF-P部分降解产物进行测定.CZE条件为未涂层熔融石英毛细管柱(50 cm×50μm i.d.,有效长度41 cm),运行缓冲液40 mmol/L硼砂缓冲液(pH 10.1),检测波长245 nm,运行电压10 kV,重力进样15 cm×20 s,柱温为室温.根据L 9(34)正交设计组合不同来源的玉屏风处方药材,制备9份玉屏风模拟样品,采用中位数法综合各特征降解谱得到YPF-P特征降解谱对照谱图,并对不同批次样品YPF-P特征降解谱进行聚类分析.结果表明:不同来源和组合的YPF-P特征降解谱差异显著,证明多糖特征降解谱可用于YPF-P成分的分析,也可为其他中药复方制剂多糖成分质量控制的深入研究提供参考.

微芯片电泳技术鉴定金银花和山银花

目的利用微芯片电泳技术对金银花和不同基原山银花进行鉴定。方法根据忍冬科植物的基因序列变异位点分别设计出金银花和山银花的特异性聚合酶链式反应(PCR)引物,运用等位基因特异聚合酶链式反应(AS-PCR),对各药材的DNA进行特异性扩增,并应用全自动微芯片电泳技术对扩增产物进行分析。结果使用金银花PCR引物时,金银花可扩增出约468 bp的特征性DNA片段,而不同基原的山银花几乎没有该片段;使用山银花PCR引物时,不同基原的山银花均扩增出约331 bp的特征性DNA片段,而金银花几乎没有该片段。结论本方法可对金银花和不同基原的山银花进行快速准确的鉴定,为中药DNA分子鉴定技术的拓展应用提供参考。

1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生中药寡糖的毛细管区带电泳分离

建立了一种可用于中药寡糖分离的毛细管区带电泳(CZE)分析方法。分离条件:未涂层熔融石英毛细管柱(48 cm×50μm,有效长度38 cm),紫外检测波长245 nm,采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)为寡糖衍生试剂,50 mmol/L磷酸盐溶液(pH 2.5)为运行缓冲液,电压15 kV,重力进样10 cm×2 s。针对中药寡糖实际样品的复杂性,通过添加多种常见单糖进行方法的实用性验证,并且将方法用于板蓝根多糖的控制降解产物的分离。结果表明,板蓝根寡糖组分可按相对分子质量从小到大的顺序分离,分离效果令人满意。该分离方法操作简单、高效,可用于中药寡糖实际样品分析。另外,还对单糖、寡糖PMP衍生物的电泳迁移行为进行了初步的理论探讨。

茶色素的超声辅助提取及其稳定性研究

采用正交试验设计,探讨超声辅助法提取红茶中茶色素的条件。通过紫外-可见分光光度法,对红茶色素水溶液稳定性进行研究。结果表明:茶色素对时间的稳定性良好,提取和存放温度不宜超过60℃,在较低pH值下稳定,有较好的耐光性,但对金属离子不稳定。

6-F硫色烯并[4,3-c]吡唑啉的体内抗肿瘤活性

用小鼠移植性肿瘤法对6-F硫色烯并[4,3-c]吡唑啉(Ja)进行体内抗肿瘤活性研究.通过检测其对小鼠H22肝癌细胞、S180肿瘤细胞的体内抑瘤作用,计算肿瘤抑制率和生命延长率,并与阳性药顺铂做比较.结果表明,该化合物可抑制H22肝癌细胞皮下移植瘤的生长,在剂量为1,2,4 mg/(kg.d)时,腹腔注射给药抑瘤率分别为13.93%,37.49%,47.45%;而以剂量为5,10,20 mg/(kg.d)灌胃给药时,抑瘤率分别为31.53%,43.77%,50.73%;另外,该化合物可明显延长S180腹水瘤小鼠存活时间,以剂量为5,10,20 mg/(kg.d)灌胃给药时实验测得生命延长率分别为30.4%,64.7%,88.2%.该化合物有较强的体内抗肿瘤活性,对其抗癌作用机制值得进行深入研究.

高效液相色谱法测定维C银翘片溶出度的研究

目的建立维C银翘片(金银花、连翘、维生素C、对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏等)中维生素C、对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏3种西药成分的溶出度测定方法。方法采用桨法,以0.1 mol/L HCl溶液为溶出介质,转速为75 r/min,90 min取样。液相色谱柱为Welchrom-C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为A 0.05 mol/L磷酸二氢钾(含0.5%四丁基溴化铵,磷酸调pH至3.5);B乙腈,梯度洗脱。体积流量为0.8 mL/min,检测波长为260 nm。结果维生素C、对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏分别在19.8～118.8μg/mL、42～252μg/mL、0.42～2.52μg/mL范围内呈良好的线性关系,平均回收率均不低于98%。不同厂家维C银翘片的溶出度差异较大。结论该方法简便快捷、结果准确可靠,可用于维C银翘片中3种西药成分的溶出度测定。

浊点萃取-高效液相色谱法检测牛奶中苯甲酸

建立了基于浊点萃取(CPE)测定牛奶中苯甲酸的高效液相(HPLC)色谱法。以非离子表面活性剂聚氧乙烯山梨糖醇酐单月桂酸酯(Tween-20)为萃取剂,考察了萃取剂的浓度、盐的浓度、加热温度及时间、pH值等因素对浊点萃取效果的影响。CPE方法的优化条件:Tween-20的浓度为3%(V/V)、(NH4)2SO4的浓度300g/L、在pH值为4的条件下90℃萃取10min;色谱条件:色谱柱为VenusilMPC18(4.6mm×150mm,5μm),流动相为乙酸铵水溶液(0.02mol/L)-甲醇(体积比为90:10),流速为1.0mL/min,检测波长230nm。在上述实验条件下,苯甲酸在0.2-2μg/mL时其浓度与检测信号呈线性关系,相关系数为0.9998,检出限为0.025μg/mL;在牛奶样品中加标回收率为98.90%～100.16%,相对标准偏差为1.2%～2.5%。

基于胶体金检测核酸适配子与蛋白相互作用的新方法

基于核酸适配子对靶蛋白的高特异性及胶体金比色法的高度灵敏性,建立了一种分析核酸适配子与靶蛋白亲和力以及简便快速检测蛋白质的新方法.核酸适配子保护的胶体金在高盐条件下可保持稳定,靶蛋白与胶体金竞争结合适配子,使胶体金发生聚沉,呈现颜色变化,可通过检测A520值分析适配子与靶蛋白的亲和力以及蛋白浓度.通过对适配子浓度、靶蛋白浓度、共孵育时间、竞争反应时间和氯化钠浓度等关键因素进行优化,确定了最佳检测条件.