当归芍药散防治非酒精性脂肪肝作用与肠道微生态的相关性研究

目的:研究探讨当归芍药散防治非酒精性脂肪肝(NAFLD)的作用与肠道微生态的相关性。方法:60只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组以及当归芍药散低、中、高剂量组,每组10只。通过喂饲高脂饲料复制NAFLD大鼠模型,造模同时给予相应药物治疗,8周后,采集血清、肝组织和大鼠粪便,检测血清中胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和肝组织中TC、TG及游离脂肪酸(FFA)的含量或活性;苏木精-伊红(HE)染色法观察肝脏病理形态学变化;16sRNA测序法分析粪便肠道菌群组成结构。结果:模型组大鼠肝细胞内出现大量脂滴空泡积聚和气球样变,血清中TC、TG、ALT、AST以及肝组织中TC、TG、FFA的含量或活性均显著升高(P<0.01),Simpon指数、厚壁菌门相对丰度和厚壁菌门/拟杆菌门的数值显著升高(P<0.01),Chao1、Ace、Shannon指数、拟杆菌门相对丰度均显著降低(P<0.01)。与模型组相比,当归芍药散各剂量组大鼠肝细胞内脂滴空泡积聚和气球样病变均明显改善,血清中TC、TG、ALT、AST和肝组织中TC、TG、FFA的含量或活性均明显降低(P<0.05或P<0.01),Chao1、Ace、Shannon指数、拟杆菌门相对丰度均明显升高(P<0.01),Simpon指数、厚壁菌门相对丰度和厚壁菌门/拟杆菌门的数值均显著降低(P<0.01)。相关性分析结果表明,厚壁菌门、拟杆菌门分别与血脂含量呈正、负相关。结论:当归芍药散可能通过改善肠道菌群紊乱进行脂质代谢的调节,进而发挥降脂护肝的作用。

当归芍药散对非酒精性脂肪性肝病大鼠肠黏膜机械屏障保护机制研究

目的探讨当归芍药散对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肠黏膜机械屏障的保护机制。方法60只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、易善复组和当归芍药散低、中、高剂量组,每组10只。通过喂饲高脂饲料制备NAFLD大鼠模型,造模同时予相应药物干预,连续8周。半自动生化分析仪检测大鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)及肝组织TC、TG含量;手动生化法检测肝组织游离脂肪酸(FFA)含量;ELISA检测血清脂多糖(LPS)含量;HE染色观察肝脏、回肠和结肠病理形态,测量小肠绒毛高度和宽度;油红O染色观察肝脏脂质蓄积;免疫组化检测回肠和结肠组织闭合蛋白(occludin)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)表达。结果与正常组比较,模型组大鼠血清TC、TG、ALT、AST、LPS和肝组织TC、TG、FFA含量明显增加(P<0.01),肝脏脂肪变性明显,回肠和结肠黏膜上皮细胞出现水肿,小肠绒毛高度、宽度及回肠、结肠组织occludin、ZO-1蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,当归芍药散各剂量组大鼠血清TC、TG、ALT、AST、LPS和肝组织TC、TG、FFA含量明显减少(P<0.05,P<0.01),肝脏脂肪变性和肠道病理损伤均减轻,小肠绒毛高度、宽度及回肠、结肠组织occludin、ZO-1蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论当归芍药散对NAFLD大鼠具有较好的治疗作用,其机制可能与保护肠黏膜机械屏障、降低肠道通透性有关。

丹参、泽泻对NAFLD大鼠脂代谢及PPARα基因表达的影响

目的:探究丹参、泽泻对非酒精性脂肪肝(NAFLD)的可能作用机制。方法:将60只Wista大鼠随机分为6组:正常组、模型组、东宝甘泰组和丹参水煎剂组、泽泻水煎剂组、丹参-泽泻(丹泽)水煎剂组。通过喂饲高脂饲料建立NAFLD模型,同时给予相应药物治疗。8周后,检测各组大鼠血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)、谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)水平及过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)mRNA表达,HE法观察大鼠肝组织病理形态学改变。结果:各用药组均能明显改善血脂和肝功能(P<0.01),升高肝组织PPARαmRNA的表达(P<0.01),尤以丹泽组降脂作用更为明显。结论:丹参、泽泻和丹泽水煎剂能显著改善NAFLD大鼠脂代谢紊乱,改善肝功能,其机制可能与增强肝组织中PPARαmRNA表达有关。

丹参、泽泻对非酒精性脂肪肝大鼠氧化应激和血管内皮的影响

目的:观察丹参、泽泻对非酒精性脂肪肝大鼠血管内皮功能的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为6组,正常组、模型组、丹参组、泽泻组、丹泽组和东宝甘泰对照组,采用喂饲高脂饲料方法复制非酒精性脂肪肝模型,除正常组和模型组灌胃给予蒸馏水外,其余各给药组分别灌胃给予丹参水煎剂、泽泻水煎剂、丹参配伍泽泻水煎剂及东宝甘泰片治疗,连续8周,观察血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA),内皮素(ET-1)、6-酮-前列腺素F1α6-Keto-PGF1α、血栓烷B2(TXB2)的含量或活性。结果:丹参、泽泻和丹参配伍泽泻水煎剂均能显著降低血清TC、TG、FFA、MDA、ALT、AST、SOD、ET、TXB2的含量或活性(P<0.01),同时升高6-Keto-PGF1α的含量(P<0.01)。结论:丹参、泽泻及丹参配伍泽泻水煎剂对非酒精性脂肪肝的防治作用,可能是通过改善氧化应激水平和血管内皮功能而实现。

车前子对腹泻大鼠小肠组织AQP3基因及蛋白表达的影响

目的:观察车前子对腹泻大鼠小肠组织水通道蛋白3 (AQP3)基因和蛋白表达的影响,探讨其治疗腹泻的作用机制。方法:采用番泻叶灌胃法复制大鼠腹泻模型。将60只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、氢氯噻嗪组和车前子低、中、高剂量组。除正常组外,其余各组均于每天上午灌胃番泻叶药液,正常组灌胃等量蒸馏水;每天下午各治疗组灌服相应药物,正常组和模型组灌服等量蒸馏水,给药期间观察大鼠的排便情况,连续14 d。实验结束后,根据粪便性状和大便次数,统计对比各组大鼠的稀便率、平均稀便级和腹泻指数。麻醉状态下,剖取2份小肠组织,1份置于冻存管,液氮冻存,用于qRT-PCR法和免疫组化法检测小肠组织AQP3基因和蛋白的表达,1份置于4%多聚甲醛液中固定,苏木精-伊红(HE)染色法观察小肠黏膜病理形态学变化。结果:模型组稀便率、平均稀便级和腹泻指数明显增加(P<0.01);小肠绒毛表皮细胞明显凋亡坏死,固有层毛细血管扩张充血明显,间质有少量中性粒细胞浸润;小肠组织中AQP3基因蛋白的表达水平均下降(P<0.01)。与模型组比较,车前子各剂量组大鼠的稀便率、平均稀便级和腹泻指数均降低(P<0.01);小肠绒毛表皮细胞凋亡、坏死和毛细血管扩张充血现象均减轻,间质有少量中性粒细胞浸润,中、高剂量组可见上皮细胞增生;小肠组织中AQP3基因和蛋白的表达水平均显著高于模型组(P<0.01)。结论:车前子具有止泻作用,其机制与减轻小肠黏膜炎性损伤,上调AQP3基因蛋白的表达水平,增加小肠对水的吸收、调节水液代谢有关。

车前子对腹泻大鼠炎性因子和结肠组织 AQP8蛋白表达的影响

为了观察车前子对番泻叶诱导的腹泻大鼠血清中炎性因子和结肠组织中水通道蛋白8(AQP8)蛋白表达的调控作用,实验将60只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、氢氯噻嗪组(9 mg/kg)和车前子高、中、低剂量组(3.8、1.9、0.95 g生药/kg),每组10只。除正常组外,其余各组均于每日上午灌胃番泻叶药液(20 mL/kg),正常组灌胃等量的蒸馏水;每日下午各治疗组灌服相应药物,正常组和模型组灌服等量的蒸馏水,连续14天。实验期间每天观察大鼠排便情况,实验结束后,收集血清、结肠组织标本检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和C反应蛋白(CRP)的含量;苏木精-伊红(HE)染色法观察病理形态学变化;免疫组化法和Western blot法检测结肠组织中AQP8蛋白表达情况。结果显示车前子各剂量组均能改变大鼠粪便性状,大便基本成形;降低血清中TNF-α、IL-6和CRP的含量;减轻结肠黏膜的病理损害;上调AQP8蛋白的表达。上述研究结果表明,车前子能防治番泻叶所致的腹泻,其作用机制可能与抑制炎症反应、修复结肠黏膜病理损伤,上调AQP8蛋白表达,促进水液代谢有关。

锦灯笼对对乙酰氨基酚所致药物性肝损伤大鼠JNK/c-jun/c-fos信号通路的影响

目的:通过检测大鼠血清肝功能指标和肝组织磷酸化的c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、原癌基因(c-jun)、即早基因(c-fos)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)蛋白的表达,观察锦灯笼对对乙酰氨基酚(APAP)所致药物性肝损伤(DILI)大鼠的干预作用及机制。方法:将50只wistar大鼠称重后随机分5组,正常组、模型组、阳性药(水飞蓟宾)对照组以及锦灯笼高、低剂量组。给予各用药组相应药液灌胃给药同时,正常组与模型组则灌饲蒸馏水,共计30 d。实验结束时,用生化分析仪检测血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活性;用Western-Blot技术检测肝组织中p-JNK的蛋白表达情况;用免疫组化法观察c-jun、c-fos、HMGB1蛋白表达。结果:锦灯笼高、低2个剂量组皆能明显地降低模型大鼠的AST、ALT活性及DBIL、TBIL的含量(P<0.05,P<0.01),不同程度下调c-jun、c-fos、HMGB1、p-JNK蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论:锦灯笼各剂量组对DILI大鼠有明显的保护作用,其作用机制可能与抑制c-fos、c-jun、HMGB1及p-JNK蛋白的表达有关,对APAP所致肝损伤起到保护作用。

车前子对腹泻大鼠结肠组织AQP3基因蛋白表达的影响

目的观察车前子对腹泻大鼠结肠组织AQP3基因蛋白表达的影响,探讨其治疗腹泻的作用机制。方法采用番泻叶灌胃复制腹泻大鼠模型。将60只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性药(氢氯噻嗪)对照组和车前子低、中、高剂量组。除正常组外,其余各组均于每日上午灌胃番泻叶药液,正常组灌胃等量蒸馏水;每日下午各治疗组灌服相应药物,正常组和模型组灌服等量的蒸馏水,连续14 d。实验结束后,根据粪便性状和大便次数,统计对比各组大鼠的稀便率、平均稀便级和腹泻指数,采集结肠组织,苏木精-伊红(HE)染色法观察结肠黏膜病理形态学变化,免疫荧光法检测结肠中AQP3蛋白表达情况,qRT-PCR法和Western blot法检测结肠组织AQP3基因和蛋白的表达水平。结果模型组大鼠稀便率、平均稀便级和腹泻指数均明显增加(P<0.01);结肠黏膜表皮细胞出现凋亡坏死,固有层毛细血管扩张充血,少量中性粒细胞浸润;AQP3基因和蛋白表达水平均明显下降(P<0.01)。与模型组比,车前子各剂量组大鼠的稀便率、平均稀便级和腹泻指数均明显降低(P<0.01);车前子各剂量组结肠黏膜表皮细胞凋亡坏死、毛细血管扩张充血和中性粒细胞浸润现象均有改善,以高剂量组改善较为显著;AQP3基因和蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。结论车前子具有较好的止泻作用,其作用机制可能与改善结肠黏膜炎性损伤,上调AQP3基因蛋白的表达,提高结肠对水的吸收能力有关。

车前子对腹泻大鼠炎性因子和结肠组织AQP4 mRNA和蛋白表达的影响

目的:观察车前子对腹泻大鼠血清中炎性因子和结肠组织水通道蛋白4(AQP4)mRNA和蛋白表达的影响,探讨其治疗腹泻的作用机制。方法:采用番泻叶药液灌胃法复制大鼠腹泻模型。将60只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、氢氯噻嗪组(9 mg·kg^-1)和车前子低、中、高剂量组(0.95,1.9,3.8 g·kg^-1)。除正常组外,其余各组均于每日上午灌胃番泻叶药液(20 mL·kg^-1),正常组灌胃等量的蒸馏水;每日下午各治疗组灌服相应药物,正常组和模型组灌服等量蒸馏水,连续14 d。实验结束后,根据粪便性状和大便次数,统计对比各组大鼠的稀便率、平均稀便级和腹泻指数,采集血清和结肠组织标本,检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)和C反应蛋白(CRP)的含量;苏木素-伊红(HE)染色观察结肠黏膜病理形态学变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中AQP4 mRNA和蛋白的表达情况。结果:与正常组比较,模型组稀便率、平均稀便级和腹泻指数显著升高(P<0.01),结肠黏膜表皮细胞出现凋亡坏死,固有层毛细血管扩张充血明显,少量中性粒细胞浸润,血清中TNF-α,IL-6和CRP的含量明显升高(P<0.05,P<0.01),AQP4 mRNA和蛋白的表达均明显下降(P<0.01);与模型组比较,车前子各剂量组大鼠的稀便率、平均稀便级和腹泻指数均显著降低(P<0.01),结肠黏膜表皮细胞凋亡坏死、毛细血管扩张充血和中性粒细胞浸润现象明显改善,血清中TNF-α和CRP的含量降低(P<0.05,P<0.01),AQP4 mRNA和蛋白的表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:车前子具有较好的止泻作用,其机制可能是抑制炎症反应、修复结肠黏膜病理损伤,上调AQP4的表达,调节水液代谢。

当归芍药散对非酒精性脂肪肝大鼠TLR4/MyD88/JNK信号通路的影响

目的:探讨当归芍药散对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠的治疗作用及其机制。方法:60只清洁级SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、易善复组(0.144 g·kg^(-1))及当归芍药散低、中、高剂量组(2.44,4.88,9.76 g·kg^(-1))。通过喂饲高脂饲料复制NAFLD大鼠模型,造模同时给予相应药物治疗,8周后,采集血清和肝组织标本,检测血清中胆固醇(TC),甘油三酯(TG),丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-10(IL^(-1)0)的含量或活性变化及肝脏TC,TG,游离脂肪酸(FFA)的含量变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏中Toll样受体4(TLR4),髓样分化因子88(MyD88),c-Jun氨基末端激酶(JNK)的基因和蛋白表达及l磷酸化JNK(p-JNK)的蛋白表达情况;苏木素-伊红(HE)染色和油红O染色观察肝脏病理形态学变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清中TC,TG,ALT,AST,TNF-α以及肝组织中TC,TG,FFA的含量或活性、肝脏中TLR4,MyD88和JNK的mRNA和蛋白表达及p-JNK的蛋白表达水平显著升高(P<0.01),IL^(-1)0的含量均显著降低(P<0.01);与模型组比较,当归芍药散各剂量组大鼠血清中TC,TG,ALT,AST,TNF-α和肝组织中TC,TG,FFA的含量或活性、肝脏中TLR4,MyD88,JNK的mRNA和蛋白表达及p-JNK的蛋白表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01),IL^(-1)0的含量均明显升高(P<0.05,P<0.01),HE染色和油红O染色结果提示其能明显减轻肝脏脂肪变性程度。结论:当归芍药散可能通过抑制TLR4/MyD88/JNK信号通路,减轻炎症反应来治疗NAFLD。

当归芍药散对非酒精性脂肪肝大鼠Keap1/Nrf2信号通路的调节作用

目的:研究当归芍药散对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠的防治作用及其机制。方法:60只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、易善复0.144 g/kg组以及当归芍药散2.44、4.88、9.76 g/kg组。通过喂饲高脂饲料复制NAFLD大鼠模型,造模同时给予相应药物治疗,1次/d,连续8 w,检测血清中胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)以及肝组织中TC、TG、游离脂肪酸(FFA)、SOD、GSH和MDA的含量或活性变化;苏木素-伊红(HE)染色和油红O染色法观察肝脏病理形态学变化;荧光实时定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测肝脏中Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、核因子E2相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、谷胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)和谷胱氨酸连接酶调节亚基(GCLM)的mRNA和蛋白表达情况。结果:与正常对照组相比,模型对照组大鼠血清中TC、TG、ALT、AST、MDA和肝组织中TC、TG、FFA、MDA的含量或活性均显著升高(P<0.01),血清和肝组织中SOD、GSH的活性以及肝组织中Keap1、Nrf2、Ho1、Gclc和Gclm的mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.01),肝细胞内有大量的脂滴空泡积聚和较多的气球样病变;与模型对照组比,当归芍药散各剂量组均能明显降低血清中TC、TG、ALT、AST、MDA和肝组织中TC、TG、FFA、MDA的含量或活性(P<0.05或P<0.01),升高血清和肝组织中SOD、GSH的活性以及肝脏中Keap1、Nrf2、Ho1、Gclc和Gclm的mRNA和蛋白表达(P<0.05或P<0.01),减轻肝脏脂肪变性程度。结论:当归芍药散可能通过调节Keap1/Nrf2信号通路,抵抗氧化损伤来防治NAFLD。

解毒护肝汤对药物性肝损伤大鼠MIP-2和MIP-1β蛋白表达的影响

目的:通过检测大鼠血清肝功能、血清生物标志物,炎性因子以及巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2),巨噬细胞炎性蛋白-1β(MIP-1β)的表达,观察解毒护肝汤对药物性肝损伤大鼠的干预作用及机制。方法:采用灌服对乙酰氨基酚方法复制药物性肝损伤大鼠模型,将Wistar大鼠按体质量随机分为正常组,模型组,水飞蓟宾组(44. 1 mg·kg-1),解毒护肝汤高、中、低剂量组(63,31. 5,15. 75 g·kg-1),正常组和模型组给予生理盐水灌胃,其余各组给予相应药液灌胃,连续给药30 d。实验结束后,腹主动脉取血分离血清检测天门冬氨酸氨基转移酶(AST),丙氨酸氨基转移酶(ALT),总胆红素(TBIL),直接胆红素(DBIL),苹果酸脱氢酶(MDH),对氧磷酶1(PON1),谷氨酸脱氢酶(GLDH),精氨酸(ARG),嘌呤核苷酸磷酸化酶(PNP),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)的含量;苏木素-伊红(HE)染色法观察肝组织病理形态改变;免疫组化法观察MIP-1β的蛋白表达情况;用单荧光免疫组化观察MIP-2的蛋白表达情况;用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肝组织匀浆中TNF-α和IL-6的含量。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清AST,ALT,DBIL,PON1,ARG,GLDH,MDH,PNP,TNF-α含量均明显升高(P <0. 05,P <0. 01),肝组织MIP-2,MIP-1β蛋白阳性表达增多;与模型组比较,解毒护肝汤中、低剂量组能明显降低转氨酶活性及胆红素含量(P <0. 05,P <0. 01),解毒护肝汤高剂量组能明显降低肝损伤大鼠血清PON1,MDH和TNF-α的含量(P <0. 05),解毒护肝汤中剂量组明显降低ARG,MDH的含量(P <0. 05),解毒护肝汤高、中剂量组均能明显降低肝组织MIP-2,MIP-1β蛋白的表达,解毒护肝汤中剂量组效果最优,各给药组对肝细胞病理形态均具有不同程度的保护作用。结论:解毒护肝汤中剂量组的护肝效果较优,且其作用机制可能通过降低TNF-α的含量,进而影响趋化因子MIP-2和MIP-1β对中性粒细胞的趋化,抑制炎性因子的释放,从而预防炎症发生。

基于网络药理学及分子对接探讨越鞠丸治疗功能性消化不良分子机制

目的基于网络药理学方法和分子对接技术,探讨越鞠丸治疗功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)的作用机制。方法检索TCMSP筛选出越鞠丸的化学成分及其作用靶点,利用HERB、BATMAN-TCM数据库结合文献对越鞠丸有效成分靶点进行补充。通过GeneCards数据库、OMIM数据库筛选出FD靶点,将二者靶点取交集利用String平台进行蛋白质相互作用分析,构建蛋白相互作用网络。利用Metascape平台进行GO及KEGG通路富集分析,通过Cytoscape 3.7.2软件构建“越鞠丸成分-FD靶点-通路”网络,运用在线作图工具获取越鞠丸与FD及其相关发病机制的交集靶点韦恩图,利用AutoDock软件进行分子对接。结果越鞠丸治疗FD的主要有效成分为槲皮素、汉黄芩素、木犀草素、山柰酚等,主要靶点有AKT1、MAPK1、JUN、RELA、IL6、BCL2、BAX、MAPK8、EGFR、ESR1等,分子对接结果显示靶点与药物活性成分结合能力较好。GO富集分析得到生物学过程2273个,分子功能152个,细胞组成91个条目。KEGG富集分析结果显示有344条通路与FD相关,主要有PI3K-Akt信号通路、AGE-RAGE通路、IL-17信号通路等。结论越鞠丸可能通过AKT1、MAPK1、JUN、RELA、IL6、BCL2、BAX、MAPK8、EGFR、ESR1等靶点,调控PI3K-Akt信号通路、AGE-RAGE信号通路和IL-17信号通路来达到治疗FD的作用。

车前子对腹泻模型大鼠小肠组织水通道蛋白4表达的影响

目的观察车前子对腹泻模型大鼠小肠组织水通道蛋白4(aquaporin4,AQP4)基因及蛋白表达的影响,探讨其作用机制。方法将60只大鼠按体重随机分为正常组、模型组、氢氯噻嗪组和车前子低、中、高剂量组。除正常组外,其余各组大鼠采用番泻叶灌胃法复制腹泻模型。车前子低、中、高剂量组灌胃0.95、1.90、3.80 g/kg车前子配方颗粒溶液,氢氯噻嗪组大鼠灌胃氢氯噻嗪混悬液9 mg/kg,按1 ml/100 g大鼠体重灌胃,连续灌胃14 d。实验结束后,记录各组大鼠粪便性状和大便次数,计算稀便率、平均稀便级和腹泻指数;采集小肠组织,采用HE染色法观察小肠组织病理形态学改变,采用PCR法和Western blot法检测小肠组织中AQP4基因和蛋白表达。结果与模型组比较,车前子低、中、高剂量组大鼠稀便率[(50.89±6.17)%、(41.14±4.48)%、(36.37±4.81)%比(67.45±7.35)%]、平均稀便级[(2.16±0.34)级、(1.73±0.28)级、(1.52±0.25)级比(2.63±0.29)级]、腹泻指数[(1.10±0.19)、(0.71±0.11)、(0.57±0.12)比(1.77±0.24)]降低(P<0.01);小肠黏膜损伤程度、充血和中性粒细胞浸润现象均减轻;小肠组织AQP4 mRNA[(0.48±0.10)、0.69±0.12)、(0.97±0.15)比(0.21±0.03)]、AQP4蛋白[(0.59±0.08)、(0.64±0.09)、(0.78±0.11)比(0.32±0.05)]表达升高(P<0.01)。结论车前子可上调AQP4 mRNA和蛋白表达水平、增加小肠对水的吸收、调节水液代谢,从而发挥止泻作用。

燮理汤对溃疡性结肠炎小鼠炎症因子及肠黏膜屏障损伤的影响

目的:探讨燮理汤对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis, UC)小鼠的保护作用及其作用机制。方法:60只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、柳氮磺吡啶肠溶片0.6 g/kg组和燮理汤1.67、3.34、6.68 g/kg组,以DSS溶液自由饮周期循环的方式复制慢性UC模型小鼠。正常对照组小鼠在整个试验期间自由饮用蒸馏水,其余各组在第1 d~7 d、22 d~28 d和43 d~49 d自由饮用1.5%的DSS溶液,其余时间自由饮用蒸馏水。在试验的第22 d起给予相应药物治疗,连续42 d。试验期间每日记录小鼠的一般状况和体质量,观察疾病活动指数(DAI)评分变化;ELISA法检测血清白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和髓过氧化物酶(MPO)的含量;HE染色观察结肠组织病理形态学以及病理损伤评分变化;免疫荧光法检测结肠组织中闭锁蛋白(Occludin)和闭锁小带蛋白-1(ZO-1)的蛋白表达;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测结肠组织中粘蛋白2(MUC2)、肠三叶因子3(TFF3)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组小鼠一般状况下降,体质量减轻,结肠长度显著缩短(P<0.01),DAI评分、IL-6、TNF-α和MPO含量均显著升高(P<0.01),结肠黏膜结构破坏,炎性细胞严重浸润,病理评分显著升高(P<0.01),结肠组织中ZO-1、Occludin、MUC2和TFF3蛋白表达显著下调,HIF-1α蛋白表达明显上调(P<0.01);与模型对照组比较,燮理汤各剂量组小鼠状况明显好转,体质量增加,结肠长度显著增加(P<0.01),DAI评分以及IL-6、TNF-α和MPO含量均显著降低(P<0.01),结肠黏膜病理损伤明显减轻,病理评分显著降低(P<0.01),结肠组织中ZO-1和Occludin蛋白表达均显著上调(P<0.01),并可不同程度地调控MUC2、TFF3和HIF-1α蛋白表达。结论:燮理汤对UC小鼠有较好的治疗作用,其作用机制可能与减轻炎症反应,保护肠黏膜屏障有关。