β淀粉样蛋白通过升高ROS水平上调晚期糖基化终末产物受体的表达

目的探讨β淀粉样蛋白（Aβ）调控海马晚期糖基化终产物受体（RAGE）表达及其机制。方法通过脑立体定向仪及微量注射器于大鼠海马内注射Aβ1~40,注射3周后,利用Western blot检测海马组织RAGE、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADPH）氧化酶（gp9lphox及p47phox亚基）、核因子-κb（NF-κB）、NF-κB抑制蛋白（IκB）的表达变化,利用流式细胞仪检测大鼠海马组织活性氧（ROS）的变化。结果海马注射Aβ1~403周后,海马组织的RAGE的表达显著升高（P〈0.01）,同时检测到注射Aβ1~40引起海马组织内ROS水平明显增高（P〈0.01）,gp9lphox、p47phox的表达及p47phox的磷酸化水平均显著升高（P〈0.01）,IκBα的表达显著降低（P〈0.01）,IκBα的磷酸化水平显著增加（P〈0.01）,NF-κB的表达及NF-κB的磷酸化水平均显著升高（P〈0.01）。结论 Aβ可引起海马组织RAGE的表达升高,NADPH氧化酶/ROS/NF-κB信号通路可能在Aβ诱导海马神经元RAGE的表达过程中发挥重要作用。

“二加二”法建立金线莲类原球茎培养新体系

本研究以金线莲组培苗茎段为试材,采用"二加二"法,即"两步诱导"(1.利用暗培养诱导出白化茎段;2.由白化茎段诱导类原球茎)加"两步增殖"(1.新诱导的类原球茎在诱导培养基上培养3周;2.利用L16(45)正交试验优选增殖培养方案)的方法,研究外植体来源、外植体处理方式、暗培养时间、培养基及附加成分对类原球茎诱导的影响,以及培养时间、光照强度、紫外光照射时间对类原球茎增殖的影响,并比较"二加二"法与传统单步法的培养效果。结果表明,适宜白化茎段诱导类原球茎的培养基为MS+2.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+1.0 mg/L S3307。黑暗腋生白化茎段是最佳外植体,最佳处理方式为整个茎段平放,3周暗培养得到的白化茎段能够显著提高类原球茎的诱导率。增殖培养5个因素对结果的影响顺序为:NH_4^+/NO_3^->NAA浓度>6-BA浓度>S3307浓度>蔗糖浓度。最佳配比为MS+0.5 mg/L S3307+4.0 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA+NH_4^+/NO_3^-(15 mmol∶45 mmol)+蔗糖40 g/L,可获得增殖鲜重为246.90 g/L。增殖培养最佳时间6周。光照强度500 lx和253.7 nm紫外光每天照射6 h连续6周适宜类原球茎的增殖和总黄酮的积累。利用"二加二"法建立了金线莲类原球茎高效培养新体系,该体系诱导率、初始材料扩大倍数、增殖倍数均高于传统单步诱导法。92%的类原球茎能够稳定增殖,不发生分化和愈伤组织化。

油葵嫁接及其在离体培养和转基因中的应用

以油葵为试材,用实生苗砧木和接穗进行嫁接试验,比较斜接、插接、劈接和合接4种方法以及不同品种、苗龄的砧木、嫁接后绑缚方法的嫁接效果,并试验离体培养的转基因接穗嫁接效果。结果表明,劈接法最为适宜,砧木选用在1对真叶期和2对真叶期的恢复系嫁接效果较好;嫁接后用棉线绳绑缚,湿报纸包裹,最后用嫁接夹固定,实生嫁接成活率可达80%以上。采用子叶节侵染和去1片子叶侵染2种转基因方法,获得转基因阳性接穗经壮苗培养后嫁接,得到完整植株的成活率可达60%和81.11%,明显高于用生根移栽的方法和直接嫁接的方法,而且嫁接植株能够正常开花结籽。从结果可以看出,劈接法为油葵最适宜的嫁接方法,可显著提高离体培养和转基因研究中获得完整植株的概率,且能够应用于油葵基因工程育种研究中。

1种简单方便的拟南芥发芽诱导新技术

采用2种方法对拟南芥进行发芽诱导,即普通常用的方法和研究的新方法。经过种植培养对比,表明研究的新方法在诱导发芽种植拟南芥方面比普通的方法简便、快捷、易操作。

金线莲类原球茎总黄酮提取条件优化

为有效提取金线莲组织培养类原球茎中的黄酮,利用正交试验设计L9(34)方法,对提取时使用的乙醇浓度、提取时间、料液比三因素进行研究,同时比较了类原球茎6种不同的干燥处理方法。结果表明:乙醇浓度对金线莲类原球茎中黄酮提取得率影响最大,其次的影响因素是提取时间,而料液比对结果的影响不显著。研究所得最佳提取条件为:乙醇浓度95%,提取时间24h,料液比1∶100。采用二次干燥方法干燥效率高,利于保持类原球茎干燥样品的疏松状态,易研磨溶解。适宜干燥条件为:60℃3.0h+80℃1.0h或60℃3.5h+80℃0.5h。

血管紧张素Ⅱ对血管外膜成纤维细胞亚群增殖的影响

血管损伤后发生的管壁结构重塑是血管重建术后再狭窄、动脉粥样硬化等多种心血管疾病发病的共同病理基础。已有研究表明血管外膜并非仅起支撑作用，在血管损伤和高血压中也起重要作用。特别是在某些刺激因子作用下，成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞，表达α-平滑肌肌动蛋白，迁移至内膜下区域和新生内膜中并增殖，同时胶原合成增加，导致血管重构。

大鼠血管外膜成纤维细胞亚群生长特性及功能研究

目的:体外分离培养SD大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞亚群,并对其增殖特性和血管功能进行初步分析。方法:克隆环法进行血管外膜成纤维细胞的单克隆培养,RT-PCR鉴定细胞亚群纯度,MTT检测血管外膜成纤维细胞亚群增殖能力。荧光定量PCR检测血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)及其受体拮抗剂氯沙坦(losartan)和PD-123319对前内皮素原-1(preproET-1)mRNA表达的影响。结果:克隆环法获得血管外膜成纤维细胞2个亚群:圆形细胞亚群和纺锤形细胞亚群。以β-肌动蛋白(β-actin)为内参照,经RT-PCR检测,结果显示无von Wille-brand因子、CD8、结蛋白和肌球蛋白重链的表达,是纯细胞系。2个细胞亚群的增殖情况有所不同,圆形细胞在第2～4 d进入指数分裂期;纺锤形细胞于第3～5 d进入指数分裂期。Ang Ⅱ在0～1 000 nmol/L范围内对纺锤形细胞preproET-1 mRNA的表达无显著影响,而呈浓度依赖性地增加圆形细胞preproET-1 mRNA的表达(P<0.01);losartan阻断了Ang II诱导的圆形细胞preproET-1 mRNA的表达,但对纺锤形细胞preproET-1 mRNA的表达无明显影响。结论:SD大鼠血管外膜成纤维细胞有2个细胞亚群:圆形细胞和纺锤形细胞,其生长特性略有不同。AngII显著促进圆形细胞preproET-1 mRNA的表达,提示这2个细胞亚群可能在血管重建和修复过程中发挥不同作用。

丹酚酸B和丹参酮ⅡA对大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞增殖的影响

目的探讨丹酚酸B(salvianolic acid B,SAB)和丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA,TA)单独用药、二者配伍对SpragueDawley(SD)大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞增殖的影响,以及在血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导下,SAB和TA有效成分配伍对大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞增殖的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazoli-um,MTT)方法检测SAB和TA对大鼠胸主动脉成纤维细胞增殖的影响,流式细胞术检测SAB和TA有效成分配伍对细胞周期的影响。结果 MTT检测结果显示,SAB和TA单独用药均可不同程度抑制成纤维细胞增殖,通过一系列浓度筛选,分别获得3个有效浓度,将其两两组合后比较对细胞生长的抑制作用,结果显示TA(10^(-8)mol·L^(-1))和SAB(10-5mol·L^(-1))组合显示明显的抑制作用(P<0.01)。而且,TA(10^(-8)mol·L^(-1))和SAB(10^(-5)mol·L^(-1))配伍组合亦能对AngⅡ诱导的细胞增殖产生明显的抑制作用,进一步采用流式细胞术观察SAB、TA及二者配伍对细胞周期的影响,结果显示,SAB和TA配伍明显地阻滞细胞在G_0/G_1期。对AngⅡ预刺激的细胞,SAB和TA组合,也明显阻滞细胞在G_0/G_1期;而SAB和TA分别给药,细胞主要被阻滞在S期。结论SAB和TA对成纤维细胞的增殖有明显的抑制作用,对AngⅡ诱导的细胞增殖也有明显的抑制作用,并且这种抑制作用主要是通过将细胞阻滞在G_0/G_1期而发挥作用的。

血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂对血管外膜成纤维细胞亚群增殖和胶原合成的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及其受体拮抗剂氯沙坦(Los)和PD123319对大鼠胸主动脉血管外膜成纤维细胞亚群增殖和胶原生成的影响。方法通过克隆环法获得血管外膜成纤维细胞单克隆,根据细胞表型克隆了两种细胞亚型并分别进行培养,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光染色方法鉴定细胞的纯度;流式细胞术对两细胞亚群的形状和大小进行比较;四甲基偶氮唑盐(MTT)法和Western印迹法检测AngⅡ及其受体拮抗剂Los、PD123319对细胞亚群的增殖活性和Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)合成的影响。结果克隆环法获得血管外膜成纤维细胞两个亚群,经显微镜和流式细胞仪观察根据细胞表型分别命名为:圆形细胞亚群(RC)和纺锤形细胞亚群(SC)。经RT-PCR和免疫荧光染色对第Ⅷ因子(vWF)、CD8、MHC、Desmin进行检测,结果显示无内皮细胞、平滑肌细胞细胞标志物的表达,分别为两种纯系细胞。实验发现AngⅡ对RC亚群的增殖活性及CollagenⅠ的合成能力均有显著影响,既促进RC的增殖又提高Ⅰ型胶原的合成,但经Los预处理后,AngⅡ的促增殖及胶原合成能力被显著性抑制(P<0.05),而SC亚群的增殖活性和胶原合成情况无显著性改变。经PD123319预处理后,对RC亚群和SC亚群增殖和胶原的合成均无明显影响。结论 AngⅡ在促进两细胞亚群的增殖和胶原合成的能力方面有差异,说明血管外膜成纤维细胞两种亚群在表型、功能和作用机制上具有显著性的差异,提示两种细胞亚群在病理生理机制及其血管重构和修复过程中扮演着不同的角色。

芝麻花粉管介导胰岛素基因的遗传转化

为建立芝麻油体表达体系这一新型植物生物反应器,采用花粉管通道法,将含有胰岛素基因的双元表达载体PBI121质粒转入冀黑芝1号芝麻。对转化株后代进行卡那霉素筛选、PCR扩增及PCR-Southern杂交检测。结果显示:胰岛素基因已整合到受体芝麻的基因组DNA中,并获得了T_5转化株,胰岛素基因可以遗传到第5代转化株。说明芝麻花粉管介导胰岛素基因的遗传转化油体表达体系可行。

亚麻愈伤组织诱导和遗传转化体系建立

为了建立高效亚麻愈伤组织诱导体系,对亚麻的无菌苗培养、外植体愈伤组织诱导、愈伤组织继代扩增3个方面进行了研究。同时对农杆菌介导亚麻愈伤组织遗传转化条件进行了初步探索。结果表明,亚麻无菌苗接种培养基为MSB+1 mg/L 6-BA时有利于亚麻愈伤组织出愈,适合亚麻愈伤组织诱导的培养基为MSB+0.1 mg/L NAA+2 mg/L 6-BA,或在此基础上添加1.0 mg/L 2,4-D,2种培养基在愈伤组织诱导阶段差别不大。愈伤组织继代扩增培养基为MSB+0.1 mg/L NAA+2 mg/L 6-BA,在此培养基上,愈伤组织量在25 d时达到顶峰。由抗生素抗性试验得出亚麻愈伤组织卡那霉素抗性临界值为100 mg/L。亚麻愈伤组织转化的方式为浸泡材料15 min后抽真空5 min较好,遗传转化率为3.1%。经PCR分析验证,证明阿朴脂蛋白米兰突变体外源基因已经整合至亚麻抗性愈伤组织基因组中。

航天搭载对油葵的诱变效应

为研究航天搭载对油葵的诱变效应,利用"神舟八号"飞船搭载油葵种子,返回地面后进行种植,并观测种子出苗状况和SP_1、SP_2、SP_3代植株生长特性及结实种子百粒质量的变化。结果表明:航天搭载对油葵种子的发芽状况没有明显影响;通过航天搭载可增加油葵变异幅度,扩大选择范围;诱变效应在航天搭载当代即有所体现,SP_2代变异表现较为明显且出现新的变异,至SP_3代多数变异性状能够保持;经过航天搭载可获得株高变化、叶片大小变化、叶片叶绿素含量变化、花盘变大、花期延长、提早开花、种子百粒质量显著增高等特征的变异。由此可以看出,航天搭载的油葵对已转化的外源基因至少能够保持至SP_3代,经过航天搭载获得的油葵观赏性状的变异也成为观赏向日葵研究不可或缺的宝贵资源。

油葵转化体系建立和重组人胰岛素的初步表达

为建立并研究利用油葵油体表达系统表达重组人胰岛素蛋白的方法,采用PCR技术构建植物种子特异性表达载体,经花粉管通道用重组人胰岛素基因转化油葵。利用PCR法检测目的基因的转化情况,用SDS-PAGE和Western blot对胰岛素蛋白的表达进行鉴定。结果表明,合成了重组人胰岛素与花生油体蛋白融合基因,并获得植物种子特异性表达载体p BINOI。花粉管通道转化油葵的适宜条件为,花柱剪切1/2,质粒浓度为50-100 ng/μl转化效率最高。PCR结果显示,油葵花粉管通道法转胰岛素基因总转化率为3.2%,温室转化率（5.20%）高于大田转化率（1.12%）。获得T1-T5代转基因种子,播种为T1-T5代植株。获得的1号转基因株系T5代植株阳性/阴性植株为11∶1。经SDS-PAGE电泳分析和Western blot检测结果显示,融合蛋白约为23 k Da,重组人胰岛素基因在油葵种子中得到了表达。本实验建立了转基因油葵油体表达系统,且该系统能够成功表达重组人胰岛素。

血管紧张素Ⅱ对血管外膜成纤维细胞亚群转化的影响

目的：探讨血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）对大鼠胸主动脉血管外膜成纤维细胞亚群转化的影响。方法：采用克隆环法进行血管外膜成纤维细胞的单克隆培养,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫荧光染色方法鉴定细胞纯度;随机分为对照组和Ang Ⅱ（10-1 000 nmol/L）组,采用荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）、免疫荧光染色和Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达情况。结果：克隆环法获得血管外膜成纤维细胞2个亚群：圆形细胞亚群和纺锤形细胞亚群。自分型后,从第3代至第8代,纺锤形细胞亚群的α-SMA表达量有减少趋势,而圆形细胞亚群的α-SMA表达量显著增多。在Ang Ⅱ诱导下,纺锤形细胞亚群和圆形细胞亚群的α-SMA表达量均增多,且圆形细胞亚群随Ang Ⅱ浓度（10-1 000 nmol/L）的增加,α-SMA的表达量显著增多（P〈0.01）。Western blot实验结果显示,Ang Ⅱ能刺激圆形细胞亚群更多地转化为肌成纤维细胞。结论：Ang Ⅱ能不同程度地影响外膜成纤维细胞亚群的分化能力,进一步揭示出2个细胞亚群在血管重构过程中扮演不同角色。

丹参酮ⅡA和丹酚酸B对大鼠血管外膜成纤维细胞转化的影响

目的探讨丹参酮ⅡA(TA)和丹酚酸(SA)B联合用药对成纤维细胞转化的影响。方法Transwell小室法检测TA和SAB对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的细胞迁移的影响;Western印迹检测成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白(SMA)的表达;流式细胞术检测活性氧(ROS)水平的变化。结果TA和SAB组合(T8S5)对成纤维细胞的迁移能力有显著性抑制作用(P<0.01);T8S5对AngⅡ诱导的α-SMA的表达有显著抑制作用(P<0.01);T8S5能减少成纤维细胞内ROS的表达(P<0.01)。结论SAB和TA配伍组合能抑制AngⅡ诱导的大鼠血管外膜成纤维细胞的迁移和转化。

芝麻遗传工程的研究进展

芝麻是重要的油料作物之一。因其建立高效的遗传转化再生体系较难,制约了芝麻遗传工程的发展。从消毒剂、激素处理、光周期、蔗糖浓度、外植体、基本培养基、外源激素、AgNO3几个方面综述了影响芝麻的再生体系建立的因素,总结了芝麻的遗传转化方法,并讨论了芝麻基因工程的发展前景及存在的问题。

亚麻外源基因遗传转化研究进展

亚麻作为重要的经济作物,其遗传转化研究对亚麻新品种的选育工作具有重要意义。分析亚麻遗传转化方法、提高转化效率及转化组织筛选等方面,重点从抗除草剂基因、抗病基因、抗重金属逆性基因、改善亚麻纤维质量基因,以及改善亚麻油质量基因方面综述亚麻遗传转化外源基因的研究和应用进展,并讨论亚麻遗传转化过程中存在的问题和解决策略。

油葵转基因方法的比较

利用GUS组织化学染色的方法比较4种油葵转基因方法的效果。结果表明,去1张子叶转化法优于温室子叶节转化法,花粉管通道的柱头滴加法优于子房注射法。借助这4种方法,用含胰岛素基因的农杆菌侵染油葵,PCR结果显示均获得了油葵阳性植株。去1张子叶转化法阳性率为3.17%,转化最佳操作时间为种子萌发后36 h;花粉管通道转化法阳性率为10.83%,花粉管柱头剪切操作最佳时间为人工授粉后5~7 h。综合考虑,优选去1张子叶转化法和花粉管通道转化法为油葵基因转化较适宜的方法。本研究可为优化油葵及向日葵转基因体系提供技术参考。

高等职业教育专业人才培养计划构建模式探究与实践

专业人才培养计划是培养人才的纲领性文件,构建合理的专业人才培养计划有助于提高人才培养质量。制药技术类专业人才培养计划的构建从制药产业一线岗位实际需要出发,探索并实践了"调研、统计、分析、研讨、修订与完善"五个阶段,"校企、校校"二结合的专业人才培养计划构建模式,所制定的专业人才培养计划针对性与实用性更加突出,较好地适应了高素质技能型人才培养的需要。

红景天苷对β淀粉样蛋白诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用研究

目的:探讨红景天苷对β淀粉样蛋白(Aβ)所致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法:通过体外培养SH-SY5Y细胞,采用含Aβ1-40的细胞培养基制备疾病模型,经Aβ1-40作用24h后,不同浓度100和200μmol/L红景天苷干预,MTT法检测各组细胞存活率;流式细胞技术、TUNEL检测细胞内活性氧ROS及凋亡情况;ELISA检测细胞内AGEs含量;Western blot检测细胞内晚期糖基化终末产物受体RAGE、NF-κB(pp65)、Bax和Bcl-2蛋白的表达变化。结果:红景天苷干预可明显改善Aβ1-40损伤后的细胞存活率,抑制Aβ1-40引起的细胞内ROS水平及细胞凋亡率升高;降低RAGE、NF-κB(p-p65)蛋白水平表达,逆转Aβ1-40导致的细胞Bcl-2/Bax蛋白表达的比例下降。结论:红景天苷可以抑制Aβ1-40诱导SH-SY5Y细胞损伤及凋亡,其机制可能与调节RAGE、NF-κB(p-p65)及相关凋亡基因Bax和Bcl-2的蛋白表达有关。