不同浓度七氟醚对大鼠原代皮质神经元的影响

目的评价不同浓度七氟醚对大鼠原代皮质神经元的毒性作用。方法出生24h内的SD大鼠48只,体外培养大鼠皮质神经元并接种于6孔板(2cm)或12孔板(4.5 mm)培养皿,采用随机数字表法分为四组:1%七氟醚处理组(A组)、2%七氟醚处理组(B组)、4%七氟醚处理组(C组)和对照组(D组),每组12只。A、B、C组神经元分别给予1%、2%和4%浓度的七氟醚处理6h,D组神经元正常培养,采用CCK-8法测定细胞存活率,采用乳酸脱氢酶(LDH)法测定细胞死亡率,采用免疫蛋白印迹(Western blot)法测定凋亡蛋白caspase-3 17kDa片段评价细胞凋亡和促凋亡蛋白Bid、Bim和Puma的表达。结果 B、C组神经元的存活率明显低于D组,死亡率明显高于D组,caspase-3的17kDa片段、Bid、Bim和Puma表达明显高于D组(P<0.05);C组神经元的存活率明显低于B组,死亡率明显高于B组,caspase-3的17kDa片段、Bid、Bim和Puma表达明显高于B组(P<0.05)。A、D组各指标差异均无统计学意义。结论随着吸入七氟醚浓度的升高,七氟醚可能通过促进促凋亡蛋白Bid、Bim和Puma的表达增加对神经元的毒性作用。

HIF-1α在七氟醚预处理减轻大鼠皮质神经元凋亡中的作用：与Bid、Bim和Puma的关系

目的 评价缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在七氟醚预处理减轻大鼠皮质神经元凋亡中的作用.方法 新生SD大鼠,培养原代皮质神经元,以1×106个/ml的密度接种于6孔板（2 ml/孔）,采用随机数字表法,分为4组（n=15）：正常对照组（C组）、缺氧复氧组（A/R组）、七氟醚预处理组（SP组）和HIF-1α抑制剂2-甲氧基雌二醇组（H组）.采用氧糖缺失90 min,复氧复糖24 h的方法制备皮质神经元缺氧复氧损伤模型;SP组通人2.0％七氟醚2h,随后采用PBS洗涤3次,每次5 min,结束后立即制备缺氧复氧损伤模型;H组加入5 μmol/L2-甲氧基雌二醇孵育72 h时进行七氟醚预处理.采用膜联蛋白V/碘化丙啶双染流式细胞术检测神经元凋亡情况,采用免疫蛋白印迹法测定神经元Bid、Bim、Puma和活化的caspase-3的表达水平.结果 与C组比较,A/R组神经元凋亡率升高,Bid、Bim、Puma和活化的caspase-3表达上调（P＜0.05）;与A/R组比较,SP组和H组神经元凋亡率降低,SP组Bid、Bim、Puma和活化的caspase-3表达下调（P＜0.05）;与SP组比较,H组神经元凋亡率升高,Bid、Bim、Puma和活化的caspase-3表达上调（P＜0.05）.结论 HIF-1α介导了七氟醚预处理减轻大鼠神经元凋亡的过程,其机制与下调Bid、Bim和Puma表达有关.