农杆菌介导大豆遗传转化优化的初步研究

利用农杆菌对大豆成熟种子子叶节进行转化,探究了不同种植物提取物、植物提取物浓度、大豆基因型、萌发天数以及共培养天数对提高农杆菌遗传转化效率的影响。结果表明:含有植物提取物的共培养菌液侵染子叶节均能够明显提高抗性芽的再生率,但不同基因型的大豆所需的最适提取物浓度不同,‘豫豆22’最适浓度为7mL/L,‘中黄42’最适浓度为14mL/L;‘豫豆22’是本研究中最适宜转化的大豆基因型;萌发5d的大豆子叶节转化率最高;共培养10d获得阳性转化植株率最高。

驴生长激素基因的克隆与分析

【目的】克隆驴生长激素基因DNA和cDNA的全序列,分析其序列和cDNA编码的蛋白序列特征及其在不同物种中的遗传差异。【方法】根据不同物种同一基因序列的同源性比对结果设计引物,应用RT-PCR和PCR技术克隆基因,用生物信息学方法对获得的DNA和cDNA及推定的氨基酸序列进行分析。【结果】从驴肝组织和血液中分别得到驴GH基因全序列1 928 bp和包括完整的编码区的cDNA序列706 bp,两者序列比对后证明驴GH基因DNA序列由5个外显子和4个内含子组成,编码216个氨基酸的GH前体蛋白,其中包括26个氨基酸的信号肽和190个氨基酸的成熟肽。序列比较结果表明,驴GH基因的序列与马同源性最高,启动子不是哺乳动物的典型TATA盒,而是CATA盒,该基因在进化过程中是保守的。【结论】从驴肝组织和血液中克隆了GH基因DNA和cDNA,DNA序列在1 267位的C→G可能影响到驴和马生长发育的差异,为下一步驴GH基因的表达调控、进化和多态性分析奠定了基础。

鸡cENS-2基因U3-R序列的克隆分析与表达载体的构建

克隆并测序了1.2 kb的鸡cENS-2(chicken normastem cell gene-2,cENS-2)基因3′端U3-R样结构调控序列。经序列分析和同源性比较表明,所克隆的U3-R序列包含多个转录因子结合位点如AP-1、GATA-1等,同时还包括一个重要的顺式调控元件B区,该区域在鸡正常的胚胎干细胞中有特异的增强子活性。该序列经pMD-18T载体过渡后,定向连接于切去启动子的pEGFP-N1载体的上游,构建了鸡cENS-2基因U3-R样序列调控的绿色荧光蛋白基因报告载体,为下一步对鸡胚胎干细胞(CES)细胞标记研究打下基础。