2型糖尿病大鼠肝损伤及氧化应激的变化

目的探讨2型糖尿病肝组织损伤的机制。方法 35只SD雄性大鼠随机分为对照组15只和糖尿病组20只,分别喂以标准饲料和高脂饲料,8周后通过口服糖耐量试验、胰岛素敏感指数,证实是否产生胰岛素抵抗。出现胰岛素抵抗的大鼠注射小剂量链脲佐菌素(STZ)以诱导2型糖尿病(DM)。成模大鼠继续用高脂饲料喂养4周,每组随机取10只大鼠,股动脉采血并留取部分肝组织。检测血清AST、ALT活性和总胆汁酸含量,ELISA检测肝组织中过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,Real time PCR检测解偶联蛋白2(UCP2)、IL-18和巨噬细胞来源趋化因子(MDC)的mRNA表达。结果与对照(Con)组相比,DM组大鼠血清AST、ALT活性升高(P<0.01),总胆汁酸水平增加(P<0.01);DM组大鼠肝组织CAT和SOD活性明显降低(P<0.01),MDA含量增加(P<0.05);DM组大鼠肝组织UCP2、IL-18和MDC的mRNA表达增加(P<0.01)。结论 2型糖尿病状态下,氧化应激异常,存在特异性免疫反应,从而引起肝组织损伤。

MDC、STxB与CVB3 VP1融合DNA疫苗的免疫效果比较

目的比较小鼠巨噬细胞源趋化因子(macrophage-derived chemokine,MDC)和志贺毒素B亚单位(Shiga tox-in B subunit,STxB)与柯萨奇病毒B组3型(coxsackievirus B3,CVB3)VP1融合DNA疫苗的免疫效果。方法将120只雄性BALB/c小鼠分为6组,每组20只,分别肌内注射pcDNA3、pcDNA3/MDC、pcDNA3/STxB、pcDNA3/VP1、pcDNA3/MDC-VP1和pcDNA3/STxB-VP1,每3周1次,共3次,每次免疫后20d取血清,用微量中和试验检测CVB3中和抗体,第3次免疫后3周,每组取3只小鼠,取脾脏制备脾细胞,用CCK-8法检测特异性CTL杀伤活性,其余小鼠用10LD50的CVB3攻击,观察小鼠的生存情况。结果pcDNA3/VP1、pcDNA3/STxB-VP1和pcDNA3/MDC-VP1组均能诱导小鼠产生中和抗体;除pcDNA3/STxB-VP1组外,另两组抗体滴度随免疫次数增加而提高;第3次免疫后,pcDNA3/MDC-VP1组平均抗体滴度和脾淋巴细胞特异性CTL杀伤活性高于pcDNA3/VP1(P<0.05)。病毒攻击后,pcDNA3/MDC-VP1组21d生存率高于其他各组(P<0.05)。pcDNA3/STxB-VP1组抗体滴度和生存情况与pcDNA3/VP1组无明显差异。结论融合基因疫苗pcDNA3/MDC-VP1能诱导小鼠产生较强的体液和细胞免疫,提高了小鼠生存率,免疫效果优于pcDNA3/STxB-VP1。

融合基因DNA疫苗STxB-VP1和MDC-VP1对CVB3的免疫效果研究

目的构建融合基因DNA疫苗pcDNA3/STxB-VP1和pcDNA3/MDC-VP1,并免疫小鼠,观察其免疫效果。方法从痢疾志贺菌PCR扩增志贺毒素B亚单位(STxB)基因片段,用RT-PCR法从小鼠脾细胞扩增巨噬细胞来源的趋化因子(MDC)基因片段。将这两个基因片段分别与柯萨奇病毒B组3型(CVB3)的衣壳蛋白VP1通过一个编码15肽的柔性接头(Linker)相连接,构建真核表达质粒pcDNA3/STxB-VP1和pcDNA3/MDC-VP1。120只BALB/c小鼠随机均分为6组,分别在胫骨前肌注射pcDNA3、pcD-NA3/STxB、pcDNA3/MDC、pcDNA3/VP1、pcDNA3/STxB-VP1和pcDNA3/MDC-VP1,每3周1次,共3次。每次免疫后20d检测血清中中和抗体水平,最后1次免疫后20d用7LD50的CVB3进行致死性攻击,观察小鼠生存率。结果成功构建了融合基因疫苗pcD-NA3/STxB-VP1和pcDNA3/MDC-VP1。各组小鼠的生存率分别是10%、10%、15%、40%、20%和75%,中和抗体水平及血中病毒滴度均与生存率一致。结论与pcDNA3/VP1相比,pcDNA3/MDC-VP1可诱导产生高水平的中和抗体,提高小鼠生存率,而pcDNA3/STxB-VP1仅诱导出低水平的中和抗体,小鼠的生存率降低。