中医药通过相关基质金属蛋白酶途径干预心肌梗死后心室重塑的研究进展

左心室重塑是一个由神经激素、机械因素及基因等多因素调控的,心室大小、形态及功能不断发生改变的过程。基质金属蛋白酶(MMPs)是一组重要的蛋白水解酶家族,是降解细胞外基质的主要介质,MMPs的正常表达及MMPs/TIMP(组织金属蛋白酶抑制剂)适当的比例是维持心肌心脏结构正常的重要因素。近年来,不少研究发现,中医药通过多途径、多靶点综合干预心梗后心室重塑的发生发展方面取得了一些进展,有效逆转或改善了心室重塑,进一步研究MMPs将为临床实践提供新的理论基础。

毓麟助孕方对小鼠子宫容受性相关因子的影响

目的探索毓麟助孕方对性成熟雌性小鼠子宫容受性相关因子的影响。方法 SPF级昆明小鼠随机分为实验组(毓麟助孕方+HMG+HCG组)和对照组(HMG+HCG组)。实验组以毓麟助孕方连续灌胃10 d,模型组以等体积生理盐水灌胃10 d。24 h后两组小鼠同时腹腔注射尿促性素(HMG),48 h后两组同时腹腔注射绒毛膜促性腺激素(HCG),次日10时处死,HE染色观察子宫内膜组织形态学改变,免疫组化S-P法检测子宫内膜雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)的表达。结果实验组小鼠子宫内膜腺体面积与对照组小鼠比较,差异有统计学意义(P<0.01);实验组ER、PR在子宫内膜的表达与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论中药复方毓麟助孕方可以促进内膜腺体的增长,提高子宫内膜ER、PR的含量,有利于胚泡种植。

瞬时受体电位香草酸亚型1受体及C-C趋化因子受体2在盐敏感性高血压所致肾脏损害中的作用

目的观察瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)受体基因缺陷和C-C趋化因子受体2(CCR2)阻断剂对盐敏感性高血压所致肾脏损害的影响。方法野生型和TRPV1基因缺陷(TRPV1-/-)小鼠通过切除左侧肾脏、皮下包埋醋酸脱氧皮质酮(DOCA)和饮用盐水建立DOCA-盐高血压模型。DOCA-盐高血压组(野生型和TRPV1-/-小鼠n均=8)和DOCA-盐高血压-RS504393组(野生型和TRPV1-/-小鼠n均=8)分别皮下注射溶媒和特异性的CCR2阻断剂RS504393,假手术组野生型和TRPV1-/-小鼠(n均=7)仅左肾切除和给予正常饮用水。实验共4周,实验期间和结束时分别检测动脉收缩压、24 h尿白蛋白排泄量、尿8-异构前列腺素排泄量和肌酐清除率。取右肾进行病理组织学分析,比较肾小球硬化指数、肾小管间质损伤程度及单核/巨噬细胞浸润程度。结果与相应的假手术组比较,野生型DOCA-盐高血压组和TRPV1-/-DOCA-盐高血压组的血压显著升高,24 h尿白蛋白和尿8-异构前列腺素排泄量显著增加,肌酐清除率显著下降(P均<0.05);肾小球硬化指数和肾小管间质损伤程度显著升高,且单核/巨噬细胞浸润数量显著增加(P均<0.05)。除血压外,TRPV-/-DOCA-盐高血压组上述病理变化均显著高于野生型DOCA-盐高血压组(P均<0.05)。RS504393处理组的上述异常变化显著弱于相应的DOCA-盐高血压组(P均<0.05)。除假手术组外,DOCA-盐高血压组和DOCA-盐高血压-RS504393组的血压差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论在野生型和TRPV1-/-小鼠中,CCR2阻断剂均可抑制DOCA-盐高血压所致的肾脏损害及肾内单核/巨噬细胞浸润,并且其抑制作用在TRPV1-/-小鼠中明显增强,提示TRPV1受体可能通过抑制CCR2所介导的单核/巨噬细胞浸润来减轻盐敏感性高血压所造成的肾脏损害。

毓麟助孕方治疗肾虚型不孕症50例临床观察

目的观察毓麟助孕方对肾虚型排卵障碍性不孕症临床治疗疗效。方法选取2013年12月-2014年12月就诊的100例排卵障碍性不孕症患者,随机分为两组,治疗组和对照组各50例,对照组采用克罗米芬治疗,治疗组采用克罗米芬加用毓麟助孕方治疗,均治疗3个月为1个疗程。1~2个疗程后,观察临床疗效并于治疗前后通过彩色多普勒超声监测卵泡大小、子宫内膜形态、厚度。结果治疗组的患者经过治疗后子宫内膜厚度明显均匀增厚,并且子宫内膜厚度大于对照组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);用药后的排卵率治疗组低于对照组,但两组之间比较无明显区别,差异无统计学意义(P>0.05),而妊娠率治疗组明显高于对照组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05),流产率治疗组显著低于对照组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论毓麟助孕方能明显改善肾虚型排卵障碍性不孕症患者的子宫内膜厚度,提高妊娠率,降低流产率,提高临床疗效。

两种冠状动脉结扎法制作大鼠急性心肌梗死模型的比较

目的:比较两种制作大鼠急性心肌梗死模型的冠状动脉结扎法,推荐一种稳定性高、生存率高的模型制作方法。方法:将40只SD大鼠按照随机数字法分为两组:常规组和改进组,比较两组的手术时间、生存率,术后24h测量两组大鼠心肌梗死面积,危险区面积以危险区占左室面积的百分比(Ar/LV)表示,心肌梗死面积用梗死区占危险区面积的百分比(An/Ar)表示,比较两组Ar/LV和An/Ar。结果:术后3h改进组和常规组的存活率分别为90%和60%,二者比较无统计学差异(P>0.05);术后24h改进组大鼠的存活率为85%,常规组为45%,两组间有显著的统计学差异(P<0.05);常规组Ar/LV和An/Ar分别为51.4%±2.5%和52.5%±2.4%,改进组Ar/LV和An/Ar分别为51.5%±2.3%和52.5%±2.2%,两组间均无统计学差异(P>0.05);常规组的操作时间明显长于改进组,为(627.9±16.0)s对(253.9±12.7)s(P<0.01)。结论:改进的模型制作方法提高了大鼠生存率,缩短了手术时间,具有显著优越性,值得推广。

猫爪草皂苷对结肠癌LoVo细胞增殖和凋亡影响的研究

目的:探讨猫爪草皂苷(Radix ranunculus ternate saponins,RRTS)对人结肠癌LoVo细胞增殖和凋亡的作用及其机制。方法:按猫爪草皂苷浓度分为1、10、100、500μg/mL4个处理组和对照组(未加猫爪草皂苷),处理LoVo细胞不同时间后,倒置显微镜观察细胞形态;采用MTT法检测细胞增殖的抑制情况;荧光染色观察细胞凋亡;流式细胞仪(FCM)进行细胞周期分析;采用细胞免疫化学检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-3表达的变化。结果:与对照组比较,猫爪草皂苷可使细胞明显变圆、体积缩小、脱壁细胞增多;MTT法检测显示,猫爪草皂苷处理组随着浓度的增加和作用时间延长,LoVo细胞增殖的抑制作用增强,并呈时间、剂量依赖性(P<0.001);荧光显微镜下部分细胞发生凋亡形态学改变,对照组和4个猫爪草皂苷不同浓度处理组凋亡率分别为(3.57±1.56)%、(8.14±1.02)%、(11.11±2.30)%、(17.59±0.95)%和(25.10±1.23)%;流式细胞术显示,G1期细胞增加,而停滞在S、G2期细胞减少;细胞免疫化学检测发现,经猫爪草皂苷作用24h后,LoVo细胞Bax蛋白水平明显增高,而Bcl-2出现抑制,Bcl-2/Bax比例下降,Caspase-3蛋白水平明显升高,且呈明显的浓度依赖性。结论:猫爪草皂苷具有明显抑制人结肠癌LoVo细胞增殖和诱导凋亡作用,下调Bcl-2、Bcl-2/Bax,增加Bax、Caspase-3蛋白的表达可能是其作用机制之一。

一日清口服液质量标准的研究

目的:制订一日清口服液质量标准。方法:采用薄层色谱法对制剂中的金银花、连翘、栀子进行定性鉴定;采用高效液相色谱法对制剂中的黄芩苷进行定量。结果:定性鉴别能从样品中检出相应的斑点,含量测定黄芩苷进样量在0.143～0.683μg与峰面积有良好的线性关系,回收率为99.51%。结论:方法简便,灵敏、可靠,具有实用性。

猫爪草皂苷对结肠癌LoVo细胞凋亡和线粒体电位的影响

目的:探讨猫爪草皂苷(Radix ranunculus ternate saponins,RRTS)对人结肠癌LoVo细胞的增殖和凋亡作用及作用机制。方法:按猫爪草皂苷浓度分为1、10、100、500μg.mL-14个处理组和对照组(未加猫爪草皂苷),处理LoVo细胞不同时间后,倒置显微镜观察细胞形态;采用MTT法检测细胞增殖的抑制情况;流式细胞仪(FCM)分析细胞周期和凋亡率。结果:与对照组比较,猫爪草皂苷处理组可使细胞明显变圆、体积缩小、脱壁细胞增多;MTT法检测显示,猫爪草皂苷处理组随着浓度的增加和作用时间延长,对LoVo细胞的增殖抑制作用增强,并呈时间、剂量依赖性(P<0.001);随着浓度的增加凋亡率增加,药物组与对照组比较差异有显著性(P<0.001);流式细胞仪细胞周期分析图可看出细胞阻滞在G1期,随着给药浓度的增加,细胞凋亡峰(AP峰)越来越明显(图1);激光共聚焦扫描技术观察显示,细胞经皂苷作用4h、8h、12h后,线粒体膜电位下降(P<0.05)。结论:猫爪草皂苷可导致人结肠癌LoVo细胞线粒体膜电位下降,具有明显抑制增殖和诱导凋亡作用。

中药对树突状细胞功能影响的研究

树突状细胞(dendritic cell,DC)是目前已知的功能最强且唯一能激活初始型T细胞、激发初次免疫应答的抗原呈递细胞(antigen-presenting cell,APC),在机体疾病的发生、发展过程中发挥极为重要的作用。近年来,关于中药对免疫功能的影响越来越受到重视,研究中药对DC功能的影响,有助于进一步揭示中药治疗疾病的机制和新药的研发。本文就近几年中药对DC影响的研究进行综述。

黄芩水提液对3T3-L1脂肪细胞增殖、诱导分化及脂联素启动子荧光素酶活性的影响

目的:本研究旨在观察黄芩水提液(Scutellaria Baicalensis Water Extract,SBWE)对3T3-L1前体细胞增殖、分化,对脂肪细胞因子脂联素表达以及脂联素(Adiponectin,ADP)启动子荧光素酶活性的影响,从分子生物学角度阐述SBWE降脂作用的可能机理。方法:通过体外培养3T3-L1细胞,采用MTT法检测SBWE对3T3-L1细胞增殖能力的影响;通过诱导脂肪细胞分化成为成熟脂肪细胞,观察SBWE对脂肪形成的影响;化学发光法检测脂联素启动子双荧光素酶报告基因活性;荧光定量PCR法检测脂联素m RNA(Adipoq)表达。结果:与正常组相比,给予3T3-L1细胞0.01、0.1、1 mg?m L^(-1)浓度的SBWE 24 h,可显著抑制细胞的增殖活性(P<0.05);0.1、1 mg?m L^(-1)浓度的SBWE能够降低3T3-L1细胞分化为脂肪细胞的数量,并减少细胞内脂滴聚集,但无明显剂量依赖性;0.01、0.1 mg?m L^(-1)浓度SBWE能显著提高脂联素基因启动子荧光素酶活性,与空载体比较差异有统计学意义(P<0.05);与正常组相比,给予3T3-L1细胞0.1 mg?m L^(-1) SBWE 24 h,诱导前后的脂肪细胞Adipoq表达均明显增加(P<0.05)。结论 :SBWE可有效抑制3T3-L1脂肪细胞的增殖、分化,同时增加脂联素基因表达,这可能是通过增强脂联素基因启动子荧光素酶活性实现,这些为黄芩水提液减肥的作用机制提供一定的基础。

毓麟珠加味治疗卵巢低反应不孕42例

目的:观察毓麟珠加味对卵巢低反应不孕患者的临床疗效。方法:42例卵巢低反应不孕患者运用毓麟珠加味治疗3个月经周期后,进行控制性超排卵(COH)治疗,比较COH治疗前后COH周期用Gn天数、支数、获卵数、受精数、优胚数、妊娠率、流产率。结果:42例患者在毓麟珠加味治疗3个周期后COH周期中用Gn天数、果纳芬和HMG支数较治疗前减少,差别有统计学意义(P<0.05);获卵数、受精数、优胚数高于治疗前,差别有统计学意义(P<0.05)。治疗后42例患者妊娠10例,妊娠率为23.81%,流产3例,流产率为30%。结论:毓麟珠加味治疗卵巢低反应不孕,可调整卵巢对促性腺激素的反应,改善子宫内膜的容受性,提高临床妊娠率,临床疗效满意。

猫爪草皂苷对结肠癌LoVo细胞凋亡和细胞内Ca^(2+)浓度的影响

目的:探讨猫爪草皂苷(Radix ranunculus ternate saponins,RRTS)对人结肠癌LoVo细胞增殖和凋亡的调控作用及其机制。方法:按猫爪草皂苷浓度分为1、10、100、500μg·ml-14个处理组和对照组(未加猫爪草皂苷),处理LoVo细胞不同时间后,倒置显微镜观察细胞形态;采用MTT法检测细胞增殖的抑制情况;流式细胞仪(FCM)进行细胞周期分析并计算凋亡率;激光共聚焦(LCSM)测定皂苷对LoVo胞内Ca2+浓度的影响。结果:与对照组比较,猫爪草皂苷处理组可使细胞明显变圆、体积缩小、脱壁细胞增多;对LoVo细胞的增殖抑制作用增强,随着浓度的增加凋亡率增加,可看出细胞阻滞在G1期,随着给药浓度的增加,细胞凋亡峰(AP峰)越来越明显。作用于LoVo细胞4 h后,胞内Ca2+明显上升,4 h、8 h时略有下降,但仍维持在较高水平(P<0.001)。结论:猫爪草皂苷具有明显抑制人结肠癌LoVo细胞增殖和诱导凋亡作用,引起凋亡的途径可能与Ca2+的增加有关。

正交试验法优选西洋参醇提工艺

目的优选西洋参最佳醇提工艺。方法采用正交试验L9(34),以D101大孔吸附树脂-比色法对正交试验回流液中人参总皂苷进行含量测定。结果优选出西洋参最佳提取工艺为加70%乙醇4倍,回流2次,每次2h。结论该提取工艺合理,具有实用价值。

妇消宁泡腾栓最佳处方及质量控制的研究

目的:探索妇消宁泡腾栓制备的最佳基质处方及质量控制标准。方法:以pH值为指标采用正交试验法对妇消宁泡腾栓的处方进行优化;薄层色谱法对制剂中的青黛、黄柏进行定性鉴别。结果:优化处方以0.43g酒石酸、0.16g碳酸氢钠、2.00g药物混合为最佳用量比,与基质S40制栓。结论:制剂稳定,质量控制方法简便、准确。

C-C趋化因子受体2在盐敏感性高血压所致肾脏损害中的作用

目的探讨C-C趋化因子受体2(CCR2)在盐敏感性高血压所致肾脏损害中的作用。方法通过切除小鼠左侧肾脏、皮下包埋醋酸脱氧皮质酮(DOCA)和饮用盐水制备盐敏感性高血压小鼠模型,DOCA-盐高血压小鼠分为模型组和CCR2受体阻断剂组,分别皮下注射溶媒和特异性的CCR2受体阻断剂RS504393,对照组小鼠仅左肾切除和给予正常饮用水。检测动脉收缩压、24 h尿白蛋白排泄量、8-异构前列腺素排泄量、肌酐清除率、肾小球纤维样硬化指数、单核/巨噬细胞浸润程度。结果与对照组相比,模型组血压升高、24 h尿白蛋白和8-异构前列腺素排泄量增加、肌酐清除率下降、肾脏有较明显的肾小球纤维样硬化和肾小管间质损害,并伴有明显的单核/巨噬细胞浸润(P<0.05)。RS504393能显著抑制上述异常变化(P<0.05),使各项肾功能和肾形态学指标基本恢复正常,但RS504393对血压无影响。结论 CCR2受体阻断剂可抑制DOCA-盐高血压所致肾脏损害,CCR2受体介导的单核/巨噬细胞浸润在盐敏感性高血压诱导的肾脏损害中发挥重要作用。

大鼠连续尾静脉采血方法研究

目的采用自制的固定器控制SD大鼠,并用改进的采血方法对其尾静脉进行连续采血,根据相关指标评价其效果。方法 SD大鼠24只在乙醚麻醉下,采用改进的一次性静脉输液针进行尾静脉采血并补充生理盐水,每日1次,连续13 d。观察采血成功率和大鼠存活率。结果 24只SD大鼠连续12 d采血成功;1只SD大鼠在第13天死亡,原因为乙醚麻醉过量,只采到该只大鼠0.2 m L血液。采血成功率为99.68%,SD大鼠存活率为95.83%。结论使用改良后的一次性静脉输液针,实施SD大鼠尾静脉采血并补充生理盐水的方法安全有效、灵活方便,适用于连续时间点采集SD大鼠静脉血的实验研究。

药物治疗慢性粒细胞白血病的研究进展

慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)是一种以粒系细胞增生为主要特征的多能干细胞疾病。Ph染色体出现在95%的CML患者中,该染色体上表达的BCR-ABL融合蛋白具有持续的酪氨酸激酶活性,它在细胞信号转导过程中不断磷酸化和活化下游底物,使细胞不断增殖和迁移,导致CML的发生。近年,人们一直在尝试各种方法治疗CML,包括开发化学药物,中药提取物,以及针对BCR-ABL酪氨酸激酶设计合成的抑制剂等。经临床验证,这些药物已经取得显著的疗效。本文即为治疗慢性粒细胞白血病的药物的研究进展作一综述。

吴茱萸碱抑制M2型巨噬细胞功能的机制研究

目的:吴茱萸碱是中药吴茱萸重要生物碱成分之一,其具有明显的抗炎作用,但具体机制不清。研究显示瞬时受体电位香草醛亚型1受体(Transient Receptor Potential Vanilloid Type 1 Channel,TRPV1)对炎症反应具有明显的抑制作用,而吴茱萸碱可激活TRPV1受体。本研究以人单核细胞(THP-1)培养模型,探明吴茱萸碱对M2型巨噬细胞功能的影响及TRPV1受体参与该过程中的作用,从而阐明吴茱萸碱抑制炎症反应的分子生物机制。方法:在THP-1细胞培养模型上,观察吴茱萸碱对白介素-4(Interleukin-4,IL-4)诱导的M2型巨噬细胞功能的影响,以及特异性TRPV1受体拮抗剂Capsazepine(CAPZ)对该过程的影响,并分别利用ELISA、荧光定量PCR和western blot确定M2型巨噬细胞功能指标,其中包括TGF-β1的产生、Arginase-1和Mannose Receptor m RNA和蛋白的表达。结果:本研究发现吴茱萸碱明显抑制IL-4诱导的M2型巨噬细胞功能亚型,其主要表现为TGF-β1分泌产生下降(P<0.05),同时伴有Arginase-1和Mannose Receptor m RNA和蛋白表达的降低(P<0.05),以上结果可被特异性TRPV1受体拮抗剂CAPZ所阻断(P<0.05)。结论:本研究显示吴茱萸碱通过激活TRPV1受体抑制M2型巨噬细胞功能反应,从而实现其抑制炎症反应的作用。

ABL酪氨酸激酶及突变体蛋白ABL^(T315I)的分离纯化及活性鉴定

目的建立一种简单、稳定、高效分离纯化ABL酪氨酸激酶及其突变体ABLT315I的方法。方法 abl及其定点突变基因插入p ET-28a载体后,与p GEX6P-1-ptp-1b共同转化入大肠杆菌BL21感受态细胞中进行培养,加入异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导ABL酪氨酸激酶及其突变体的表达,亲和层析和凝胶过滤层析纯化蛋白,SDS-PAGE分析蛋白纯度与相对分子量,BCA法测定蛋白浓度,ATP/NADH偶联法测定蛋白激酶活性。结果 SDS-PAGE显示ABL及ABLT315I蛋白具有很高的纯度,并且其浓度分别达到28 mg/L(LB菌液)和20 mg/L(LB菌液)。2种目的蛋白在体外均测得了很好的酪氨酸激酶活性。结论本研究成功建立了一种稳定、简单高效的ABL蛋白及其突变体的分离纯化方法,为后续蛋白进行高通量药物筛选和结构分析建立良好的基础。

雷公藤多苷的抗炎作用研究进展

雷公藤多苷(tripterygium glycosides)是从卫矛科植物雷公藤的去皮根部提取的总苷,临床上被广泛应用于治疗类风湿关节炎、肾小球肾炎等疾病,是目前国内外研究的热点药物之一。对近年来雷公藤多苷的抗炎机制的研究进行概述,发现其在炎症过程的早期及炎症介质的产生和释放发挥着重要的抗炎作用。