白术附子汤对乳腺癌骨转移裸鼠生存时间及骨转移灶中破骨细胞的影响

目的探讨白术附子汤抑制乳腺癌骨转移裸鼠模型骨损伤的作用机理。方法建立乳腺癌骨转移裸鼠模型,用白术附子汤组、附子-白术药对进行干预,观察裸鼠模型的生存时间,用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)染色进行破骨细胞计数,RT-PCR法检测乳腺癌骨转移组织中巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、甲状旁腺激素相关肽(PTHrP)基因的表达,Western blot检测骨转移组织中M-CSF、PTHrP蛋白的表达。结果与模型组比较,附子-白术药对组、白术附子汤组生存时间显著延长(P<0.01);附子-白术药对组、白术附子汤组裸鼠骨转移灶中TRACP阳性细胞数量明显减少(P<0.01);附子-白术药对组、白术附子汤组M-CSF mRNA、PTHrP mRNA的相对表达量显著降低(P<0.01);附子-白术药对组、白术附子汤组M-CSF、PTHrP蛋白相对表达量显著降低(P<0.01);白术附子汤组M-CSF、PTHrP蛋白相对表达量有低于附子-白术药对组的趋势。结论白术附子汤抑制乳腺癌骨转移裸鼠模型骨损伤的作用与其下调乳腺癌骨转移组织中骨破坏因子M-CSF、PTHrP基因和蛋白的表达有关;附子-白术药对与白术附子汤功效相近,可能是白术附子汤的核心药物。

山慈菇-蜂房药对抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞体外侵袭转移的机理研究

目的研究山慈菇-蜂房药对对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响及其作用机制。方法噻唑蓝(MTT)法检测山慈菇-蜂房药对大鼠含药血清对细胞活力的影响,Transwell小室法测定其侵袭力,实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)基因的表达。结果山慈菇-蜂房药对组MDA-MB-231细胞体外生长杀伤率为35.86%;能明显抑制MDA-MB-231细胞的侵袭能力(P<0.01),其抑制率为34.8%;MMP-9 mRNA明显降低,TIMP-1 mRNA明显升高,MMP-9 mRNA/TIMP-1 mRNA值显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论山慈菇-蜂房药对能够抑制MDA-MB-231细胞侵袭能力,其机制可能与下调MMP-9mRNA表达,上调TIMP-1mRNA的表达,降低MMP-9 mRNA/TIMP-1 mRNA比值有关。

药对蛇床子—补骨脂对乳腺癌骨转移裸鼠生存时间与骨损伤的影响

目的研究药对蛇床子—补骨脂对裸鼠乳腺癌骨转移生存时间、破骨细胞活性及骨损伤的影响,探讨该药对治疗乳腺癌骨转移的最佳配伍关系。方法用左心室注射MDA-MB-231BO细胞法对裸鼠进行造模,观察蛇床子—补骨脂药对(2.56 g/只)的作用,以唑来膦酸(0.2 mg/kg)作为阳性对照药。将84只裸鼠模型随机分为A、B组,每组42只,每组再随机分为模型组、唑来膦酸组和蛇床子—补骨脂4∶0、0∶4、1∶3、2∶2、3∶1组,每组6只,实验B组另配正常组裸鼠6只。实验A组观察不同配比药对干预后各组模型的生存时间;实验B组不同配比药对干预6周后取材,TRACP染色观察各组破骨细胞的形态和数量,检测骨转移灶M-CSF、PTHrP的基因与蛋白的表达。结果各干预组均能显著延长裸鼠模型的生存时间(P<0.05,P<0.01),中药组以2∶2配伍最好,疗效接近唑来膦酸组;各干预组均可在一定程度上抑制乳腺癌骨转移裸鼠骨转移组织中破骨细胞的活性(P<0.05,P<0.01),中药组以2∶2配伍最好,疗效接近唑来膦酸组;各干预组均可不同程度地下调M-CSF、PTHrP的基因与蛋白的表达(P<0.05,P<0.01),中药组以2∶2配伍最好。结论基于温肾法的蛇床子—补骨脂药对可以抑制乳腺癌骨转移,该药对最佳疗效配伍比例可能是2∶2。

附子白术汤通过调节OPG/RANKL保护乳腺癌骨转移裸鼠骨损伤的研究

目的:从调节护骨素(OPG)/细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)系统探讨附子白术汤抑制乳腺癌骨转移骨损伤的机制。方法:采用左心室注射人乳腺癌骨转移细胞株(MDA-MB-231BO)细胞法建立乳腺癌骨转移裸鼠模型;随机分为模型组、唑来膦酸组、附子白术汤组、附子-白术药对组,另备正常裸鼠正常组(n=6)。造模后第4天开始药物干预:唑来膦酸组sc唑来膦酸0.2 mg.kg-1;模型组、附子白术汤组、附子-白术药对组、正常组,分别ig给予生理盐水20 mL.kg-1、附子白术汤5.6 g.kg-1、附子-白术药对煎液2.4 g.kg-1、生理盐水20 mL.kg-1;每周3次,持续6周。观察各组裸鼠体重、骨转移灶病理和OPG,RANKLmRNA表达变化。结果:①与模型组比较,附子-白术药对组与附子白术汤组骨转移个数、骨转移率及体重下降率均明显下降(P<0.05),骨转移灶中TRAP(+)细胞数量均减少(P<0.01),OPG mRNA表达含量上调(P<0.01),RANKLmRNA表达含量及二者比值降低(P<0.01);②与附子白术汤组比较,附子-白术药对组骨转移个数、骨转移率、体重下降率、骨转移灶中TRAP细胞数量,OPG mRNA,RANKL mRNA表达含量及其比值均无统计学差异。结论:附子白术汤和附子-白术药对均可通过调节OPG/RANKL系统,减少破骨细胞的数量并抑制其活性,从而减轻乳腺癌骨转移裸鼠溶骨性损伤;附子-白术药对与附子白术汤功效相近,可能是附子白术汤的核心药物。

放射性核素骨显像支持下建立乳腺癌骨转移裸鼠模型

目的建立人乳腺癌骨转移裸小鼠模型。方法采用人乳腺癌骨高转移细胞株MDA—MB-231BO，运用细胞悬液浓度0．8×10^7／ml、1．0×10^7／ml进行左心室注射，放射性核素骨显像和X线分别检测建立的人乳腺癌骨转移裸鼠模型。观察两组裸小鼠造模后的生存时间、体质量下降率，及骨转移程度与各部位转移率。结果在两组裸小鼠体内均建成了乳腺癌骨转移模型；1．0×10^7／ml组裸鼠生存时间显著低于0．8×10^7／ml组（P〈0．01），体质量下降率显著高于0．8×10^7／ml组（P〈0．05）；1．0×10^7／ml组骨转移程度高于0．8×10^7／ml组，1．0×10^7／ml组肿瘤细胞数／细胞总数显著高于0．8×10^7／ml组（P〈0．05）；1．0×10^7／ml组转移部位数高于0．8×10^7／ml组；放射性核素骨显像的检出率为100％。结论核素骨显像在裸鼠骨转移方面具有早期诊断意义；浓度为0.8×10^7／m1人乳腺癌骨高转移细胞株MDA—MB-231BO可以成功的建立乳腺癌骨转移裸鼠模型，完整地模拟了乳腺癌骨转移患者的自然临床病理过程。

药对“蛇床子-补骨脂”与乳腺癌骨转移裸鼠体重变化与骨代谢的量效关系研究

目的从调节破骨细胞分化的主要途径护骨素(OPG)/细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)/细胞核因子κB受体活化因子(RANK)系统研究蛇床子-补骨脂温肾药对抑制乳腺癌骨转移的作用机制。方法将42只乳腺癌骨转移裸鼠随机分为模型组、唑来磷酸组、蛇床子组、补骨脂组、2:2配比组、1:3配比组、3:1配比组,每组6只;另备正常裸鼠6只作为正常组。分别给予相应的药液灌胃,唑来磷酸组皮下注射,正常组给予生理盐水灌胃,持续6周。观察裸鼠的体重、骨转移灶病理和OPG、RANKL mRNA表达水平变化。结果 3:1配比组和2:2配比组体重下降率明显低于其他配比组,而2:2配比组低于3:1配比组;不同比例配伍组的骨抗酒石酸酸性磷酶(TRAP)(+)细胞数差异均有统计学意义,2:2配比组优于1:3配比组(P<0.05);不同配比的蛇床子-补骨脂可不同程度地上调OPG基因表达,下调RANKL基因表达,从基因方面调节OPG/RANKL的分泌比例,其中2:2配比组的疗效优于其他配比组。结论不同配比的蛇床子-补骨脂均具有一定的抑制乳腺癌骨转移作用,其中2:2配比组疗效最突出,其作用机制可能是调节了OPG/RANKL基因分泌比例。

蛇床子-补骨脂在乳腺癌骨转移裸鼠模型中吸收入血特征的研究

目的:以蛇床子素和补骨脂素为靶标成分,从药物吸收入血角度探讨蛇床子-补骨脂配伍后疗效增加的机制。方法:采用左心室注射MDA-MB-231BO细胞法建立裸鼠乳腺癌骨转移模型,给予不同配比的蛇床子-补骨脂药物煎液,采用HPLC-MS法测定裸鼠血浆中蛇床子素和补骨脂素,观察蛇床子-补骨脂配伍后蛇床子素和补骨脂素吸收入血的特征。结果:蛇床子组血浆中可发现蛇床子素离子峰;补骨脂组血浆中可发现补骨脂素分子及其离子峰信号;蛇床子-补骨脂(1:3)组血浆中可发现蛇床子素分子及离子峰信号,未发现补骨脂素分子及离子峰信号,蛇床子-补骨脂(2:2)组可发现蛇床子素和补骨脂素的分子及离子峰信号,蛇床子-补骨脂(3:1)组可发现蛇床子素分子及离子峰信号,未发现补骨脂素分子及离子峰信号。结论:蛇床子素和补骨脂素均可被吸收入血;蛇床子与补骨脂1:1配伍可促进补骨脂中补骨脂素的吸收入血。