重症肌无力患者肌细胞中LRP4胞内区与SNX17的相互作用

目的:探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白4(LRP4)和分拣微管连接蛋白17(SNX17)在重症肌无力(MG)患者肌细胞中相互作用关系。方法:分别构建原核表达载体p ET30a-LRP4胞内区和真核表达载体p EASY-Blunt M2-SNX17,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达相对分子质量约为17 800的His-LRP4胞内区,在HEK293T细胞中诱导表达相对分子质量约为53 000的Myc-SNX17。利用抗Myc单克隆抗体磁珠与抗His单克隆抗体磁珠进行双向免疫共沉淀(Co-IP),以验证LRP4、SNX17两种蛋白分子是否存在相互作用。结果:成功构建了原核表达载体pE T30a-LRP4胞内区和真核表达载体pE ASY-Blunt M2-SNX17;抗Myc单克隆抗体磁珠与His-LRP4混合后不发生共沉淀,如再与Myc-SNX17混合则可发生共沉淀;抗His单克隆抗体磁珠与Myc-SNX17混合后不发生共沉淀,再与His-LRP4胞内区混合可发生共沉淀。结论:原核表达的LRP4胞内区蛋白与真核表达的SNX17体外可发生直接结合。

实验性自身免疫性重症肌无力大鼠多肌群SNX17基因的表达

目的:探讨实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠多肌群分拣微管连接蛋白17(SNX17)的表达特点。方法:采用主动免疫法构建EAMG大鼠模型(EAMG组)并进行评估,以正常大鼠作对照(正常对照组),利用荧光定量PCR和Western blot检测2组大鼠胸锁乳突肌、膈肌、咬肌、心肌、肋间肌、前肢肌、腓肠肌和眼肌等8组肌群中SNX17、nAChR mRNA和蛋白含量变化。结果:成功构建了EAMG大鼠模型。与正常对照组相比,EAMG组大鼠心肌、肋间肌中SNX17 mRNA的表达升高(P <0. 05),膈肌中SNX17 mRNA的表达降低(P <0. 05);胸锁乳突肌、腓肠肌和眼肌中nAChR mRNA的表达降低(P <0. 05),心肌中n AChR mRNA的表达升高(P <0. 05);咬肌、心肌和腓肠肌中SNX17蛋白含量升高(P <0. 05),胸锁乳突肌、膈肌中降低(P <0. 05)。EAMG组腓肠肌中SNX17 mRNA与nAChR mRNA的表达呈负相关(r=-0. 773,P=0. 035),而在心肌中呈正相关(r=0. 947,P=0. 012)。结论:SNX17可能是神经肌肉接头处的关键蛋白。