HIV假病毒模型优化及其在中医药防治艾滋病研究中的应用探讨

中医药治疗艾滋病有一定疗效,但亟需研究其作用机制,因此建立稳定可靠模型尤为必要。HIV假病毒安全性高、稳定性强,筛选优势毒株构建假病毒感染细胞模型研究中药作用机制可行可信。假病毒模型已应用于体外药物筛选、中和抗体检测、表型耐药检验系统、宿主与病毒相互作用等研究方面。笔者在分析中药作用特点及中药研究手段的基础上,提出筛选优势毒株、优化病毒制备和感染过程可构建稳定可靠的假病毒感染细胞模型,并且可应用于中药多靶点的机制探讨及网络药理学活性中药筛选等,以期为更好地开展中医药防治艾滋病临床基础研究提供借鉴。

基因片段扫描检测T细胞受体多样性运用于益艾康胶囊治疗艾滋病的效果观察

目的:利用基因片段扫描建立检测T细胞受体(T cell receptor,TCR)β链多样性的方法,并探讨运用其观察益艾康胶囊治疗艾滋病疗效的效果。方法:①收集17例健康者外周血液样本,提取基因组DNA,设计多重荧光引物,采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)分别扩增TCRβ链互补决定区3(CDR3)的2个V-J重组区和1个D-J重组区,以分子量内标(Liz-500)为标准品,利用毛细管电泳技术使用一代测序仪进行基因片段扫描,最后通过GeneMapper ID-X数据分析软件,根据荧光信号差异识别PCR产物,并对数据进行自动分析。②从样本储存库中筛选40例HIV/AIDS患者在益艾康胶囊治疗前及治疗1年时的血液样本,采用上述方法检测TCRβ链CDR3重组区多样性,从峰形、目标区域曲线下面积、离散度等方面评估其变化情况。结果:①Liz-500可在分子量50~500 bp之间扫描出15条标记片段,用以判定目标片段长度。样本DNA完整,可检测出300 bp以上扩增峰。②健康对照组TCRβ链A/B/C管(其中A/B管为V-J区,C管为D-J区)峰形均呈现类似钟形的正态分布;③TCRβ链C管益艾康胶囊治疗前、后曲线下面积差异有统计学意义(P<0.05),即益艾康胶囊治疗后HIV/AIDS患者TCRβ链D-J区基因重组多样性较治疗前有所增加;④治疗前、后TCRβ链各管离散度均大于健康对照组(P<0.05)。结论:采用基因片段扫描检测T淋巴受体多样性,可以从不同角度分析益艾康胶囊对艾滋病的治疗效果,进而反映机体免疫系统状态。

健脾益气方对HIV/AIDS患者病毒载量与IL-2、IL-13、IFN-γ变化影响及相关性分析

目的:探讨健脾益气方治疗HIV/AIDS患者的作用机制。方法:采用Real-time PCR与流式荧光法检测病毒载量(VL)与IL-2、IL-13、IFN-γ变化情况,分析不同VL水平细胞因子含量差异及其相关性。结果:治疗后细胞因子水平相比治疗前均有所升高;VL分组为Ⅰ组VL=0,Ⅱ组:VL=20copies/ml,Ⅲ组:20<VL<1000 copies/ml,Ⅳ组:VL>1000 copies/ml。IL-13在治疗前后差异有统计学意义,并随着VL的增加IL-13水平增高;VL与IL-13的相关性分析显示,在治疗前后均呈现中度正相关关系。结论:健脾益气方可影响HIV/AIDS患者IL-2、IL-13和IFN-γ水平,但对VL影响较小;随着病毒载量增加,血浆IL-13水平变化趋势与之相同。

益艾康治疗对HIV-1感染者CCR5、CXCR4表达及T细胞活化水平的影响

目的:研究益艾康治疗对艾滋病病毒感染者辅助受体CCR5/CXCR4及CD38、HLA-DR表达的影响,探讨T细胞活化水平与辅助受体表达的关系。方法:收集65例HIV感染者及10例健康对照抗凝全血,用流式细胞技术检测各样本CD8^+T细胞表面CCR5、CXCR4、CD38、HLA-DR表达水平,并分析益艾康治疗对其表达的影响。结果:HIV感染者CD8^+T细胞表面CXCR4表达明显低于健康对照,CD8^+T细胞活化水平较健康对照明显升高,CCR5/CXCR4表达水平及CD8^+T细胞活化状态相关,益艾康治疗可改善HIV感染者辅助受体表达及细胞活化水平。结论:HIV感染者辅助受体CCR5/CXCR4表达水平与机体对HIV的免疫反应密切相关,益艾康治疗可在一定程度上改善艾滋病病毒感染后的免疫损伤。

益艾康及HAART治疗对HIV感染者辅助受体CCR5/CXCR4表达的影响

目的:探讨益艾康及HAART治疗对艾滋病病毒感染者辅助受体CCR5/CXCR4表达的影响及辅助受体表达与HIV疾病进展的关系。方法:收集65例HIV感染者及10例健康对照抗凝全血,采用流式细胞技术检测各样本T细胞表面CCR5、CXCR4表达水平。HIV感染者按治疗情况分为未治疗组、益艾康治疗组、益艾康合并HAART治疗组3组,比较不同组别间辅助受体表达水平。结果:HIV感染组CD4^+T淋巴细胞表面CCR5表达高于对照组,CXCR4表达低于对照组。相关分析显示,CCR5表达与CD4^+T细胞数成负相关,与病毒载量成正相关;CXCR4表达与CD4^+T细胞数成正相关,与病毒载量成负相关。HIV感染者不同治疗组辅助受体表达水平结果显示,益艾康治疗可部分恢复辅助受体的表达水平,HAART治疗可增强益艾康疗效。结论:益艾康治疗可降低艾滋病感染者辅助受体CCR5的表达,增加辅助受体CXCR4的表达,可部分改善艾滋病病毒感染后的免疫损伤。

清肺培元颗粒对免疫低下肺部感染小鼠模型的影响

目的:探讨清肺培元颗粒对免疫低下肺部感染小鼠的可能作用机制。方法:建立免疫低下肺部感染小鼠模型,随机分为8组,各组给药14d后摘取眼球取静脉血;流式细胞术检测小鼠外周血中CD_4^+T、CD_8^+T细胞含量,计数CD_4^+/CD_8^+的比值;ELISA法测定小鼠血清中白细胞介素6(IL-6)及降钙素(PCT)含量。结果:各治疗组病理学改变较模型组轻,中西药组,清肺培元颗粒中、高剂量组改善明显;与正常对照组比较,模型组CD4+显著降低(P<0.05),CD_8^+显著升高(P<0.05);与模型组比较,用药后清肺培元颗粒3个剂量组小鼠,CD_4^+T淋巴细胞水平及CD_4^+/CD_8^+比值明显升高,同时降低CD_8^+T淋巴细胞数量(P<0.05);模型小鼠血清中IL-6、PCT表达水平均较正常组增高(P<0.05),各治疗组较模型组显著降低(P<0.01)。结论:清肺培元颗粒有效地调节小鼠外周血T淋巴细胞亚群的水平,降低IL-6、PCT的表达水平,能够增强机体免疫功能。

HIV/AIDS肺脾气虚证患者外周血中调节性T细胞和髓源性抑制细胞的变化

目的:探讨HIV/AIDS肺脾气虚证患者外周血中的调节性T细胞(Treg)、髓源性抑制细胞(MDSCs)的变化。方法:收集27例HIV/AIDS肺脾气虚证患者、5例HIV无证可辨者及10名健康人抗凝全血,流式细胞术检测各样本T淋巴细胞亚群、Treg和MDSCs数量,分析各组T淋巴细胞亚群、Treg和MDSCs的变化。结果:肺脾气虚证患者CD_(4)^(+)T淋巴细胞数量较无证可辨者和健康人显著下降(P<0.05);HIV感染人群Treg和MDSCs数量较健康人群显著升高(P<0.05),尤其以肺脾气虚证组免疫抑制性细胞比例最高;肺脾气虚证患者体内Treg和M-MDSCs水平与CD_(4)^(+)T淋巴细胞绝对计数呈负相关。结论:HIV/AIDS肺脾气虚证患者体内免疫抑制性细胞Treg和MDSCs水平上升,且其变化与HIV疾病进展相关,可作为中医证候客观化和标准化的辅助指标。