麻黄附子细辛汤联合环磷酰胺对肺癌大鼠JAK/STAT通路的作用

目的研究麻黄附子细辛汤联合环磷酰胺对肺癌大鼠Janus酪氨酸蛋白激酶/信号转导及转录激活因子(JAK/STAT)通路的调节作用。方法60只大鼠随机分为空白对照组、肺癌组、麻黄附子细辛汤组、环磷酰胺组及联合组各12只,除空白对照组,其余大鼠采用尾静脉注射Walker-256细胞法建立肺癌大鼠模型,麻黄附子细辛汤组灌胃给予麻黄附子细辛汤(3 g/kg),环磷酰胺组腹腔注射环磷酰胺(0.05 g/kg),联合组同时给予麻黄附子细辛汤及环磷酰胺,1次/d,连续8 w,末次给药24 h后取肺组织测定肺湿重、肿瘤抑制率,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡率,苏木素-伊红染色法检查肺病理变化,实时定量聚合酶链反应(PCR)、免疫组化及Western印迹分别检测肺组织JAK2、STAT3 mRNA及蛋白水平变化。结果与肺癌组比较,麻黄附子细辛汤组、环磷酰胺组及联合给药组肺湿重、肺组织JAK2、STAT3 mRNA及蛋白水平显著降低,肿瘤细胞凋亡率显著升高(均P<0.05),与麻黄附子细辛汤及环磷酰胺单独给药组比较,联合给药组肺湿重、肺组织JAK2、STAT3 mRNA及蛋白水平显著降低,肿瘤抑制率及肿瘤细胞凋亡率显著升高(均P<0.05)。结论麻黄附子细辛汤联合环磷酰胺能够促进抑制肺癌大鼠肿瘤进展,促进肿瘤细胞凋亡,其机制可能与调节JAK/STAT通路有关。

自然杀伤细胞来源外泌体的miR-30e-3p抑制人食管鳞状细胞癌细胞增殖和侵袭

目的 研究自然杀伤(NK)细胞来源外泌体的miR-30e-3p对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法 从健康供体的外周血中分离和扩增NK细胞,并分离NK细胞外泌体(EXO)进行鉴定。NK细胞外泌体与NEC细胞进行共培养,随机分为Exo1和Exo2组。采用透射电子显微镜观察外泌体形态及大小。Western blot法检测外泌体凋亡相关基因2相互作用蛋白X(ALIX)、抗肿瘤易感基因101(TSG101)、 CD81、钙联蛋白(calnexin)表达。将miR-30e-3p模拟物(miR-30e-3p mimic)、 miR-30e-3p抑制物(miR-30e-3p inhibitor)及阴性对照(miR-NC)转入NK细胞,并分离相应的外泌体与NEC细胞进行共培养。CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶双染法检测细胞凋亡,Transwell^(TM)侵袭实验检测细胞侵袭能力。实时定量PCR检测NCE细胞和外泌体中miR-23b、 miR-422a、 miR-133b、 miR-124、 miR-30e-3p和miR-99a的表达。结果 NK细胞中CD56+CD3+细胞比例为(0.071±0.008)%,CD56+CD16+细胞比例为(90.6±10.6)%。从NK细胞分离的外泌体直径为30~150 nm,且表达ALIX、 TSG101、 CD81,不表达calnexin。NK细胞来源外泌体抑制NEC细胞增殖和侵袭、增加细胞凋亡,降低S期细胞比例并增加G1期细胞比例。过表达miR-30e-3p的NK细胞来源外泌体抑制NEC细胞增殖和侵袭,并阻滞细胞周期和促进细胞凋亡,敲低miR-30e-3p的NK细胞来源外泌体则相反。结论NK细胞来源外泌体miR-30e-3p阻断人ESCC细胞的细胞周期,抑制其增殖和侵袭并诱导其凋亡。

miR-9-3p通过IRF2BP2调控食管鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡、迁移和免疫逃逸

目的:探讨miR-9-3p/IRF2BP2分子轴对食管鳞状细胞癌(ESCC)恶性生物学行为的影响。方法:采用ACLBI和Starbase数据库分析miR-9-3p在ESCC中的表达差异及其与患者生存的相关性。双荧光素酶报告基因验证miR-9-3p和IRF2BP2的靶向关系。CCK-8、Annexin V-FITC/PI试剂盒和Transwell分别检测KYSE-30细胞增殖、凋亡和迁移。Western blot检测miR-9-3p/IRF2BP2轴对KYSE-30细胞PD-L1表达的影响。CD8~+T细胞与KYSE-30细胞共培养后,ELISA检测CD8~+T细胞上清中IFN-γ,IL-4和IL-10水平。结果:miR-9-3p在ESCC组织和细胞系中异常高表达,且预示较差的生存率。miR-9-3p靶向负调控IRF2BP2表达。过表达IRF2BP2抑制KYSE-30细胞增殖、迁移和免疫逃逸并促进其凋亡,而miR-9-3p可拮抗IRF2BP2的作用。结论:miR-9-3p通过抑制IRF2BP2表达促进ESCC细胞增殖、迁移和免疫逃逸并抑制其凋亡。