环状RNA circWHSC1在结肠癌的表达及相关分子机制研究

目的探讨环状RNAcircWHSC1在结肠癌发生发展过程中的作用及其相关分子机制。方法选取2017-01-01-2021-01-31郑州人民医院病理确诊为结肠癌的60例患者癌及癌旁组织(距癌旁≥5cm),按照circWHSC1表达水平将患者分为高表达组(≥3.44,33例)与低表达组(<3.44,27例)。Kaplan-Meier plotter法分析circWHSC1表达与患者预后生存的关联性。通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测circWHSC1、miR-142-3p和RAC1的表达;采用蛋白质印迹法、CCK-8和Transwell检测其蛋白的表达、细胞的增殖和转移能力;双荧光素酶报告基因和RT-PCR验证circWHSC1、miR-142-3p和RAC1三者之间的作用关系。结果circWHSC1在结肠癌患者癌组织(3.74±1.60)中的表达高于癌旁组织(1.07±0.58),t=7.572,P<0.001;与circWHSC1低表达组相比,circWHSC1高表达组结肠癌患者的生存时间缩短,χ^(2)=12.321,P<0.001。结肠癌细胞系HCT116的circWHSC1表达量最高,F=29.380,P<0.001。敲低circWHSC1可抑制HCT116细胞的增殖(t=12.775,P<0.001)、迁移(t=46.973,P<0.001)和侵袭能力(t=40.935,P<0.001)。双荧光素酶报告基因显示,circWHSC1与miR-142-3p具有靶向关系,而敲低circWHSC1可增加HCT116细胞中miR-142-3p表达水平,t=17.705,P<0.001。在敲低circWHSC1基础上应用miR-142-3p抑制剂则可以增强HCT116细胞的增殖(t=7.304,P=0.002)、迁移(t=16.049,P<0.001)和侵袭能力(t=14.994,P<0.001)。miR-142-3p在结肠癌患者癌组织中的表达低于癌旁组织,t=12.599,P<0.001。双荧光素酶报告基因实验证实,RAC1为miR-142-3p的靶基因,过表达miR-142-3p可抑制HCT116细胞中RAC1蛋白表达水平(t=25.162,P<0.001),并且发现,在敲低circWHSC1基础上过表达RAC1同样可以增强HCT116细胞的增殖(t=7.658,P=0.002)、迁移(t=62.626,P<0.001)和侵袭能力(t=58.596,P<0.001)。RAC1在结肠癌患者癌组织中的表达同样高于癌旁组织(t=14.873,P<0.001),敲低circWHSC1可在抑制HCT116细胞中RAC1表达的同时,抑制其下游PAK1蛋白RAC1、PAK1及p-PAK1的表达和激活,t值分别为7.506、15.588和6.795,P值分别为0.001、<0.001和0.002。结论circWHSC1可能通过调控miR-142-3p/RAC1/PAK1轴参与结肠癌的发生过程,为未来临床结肠癌早期诊断和治疗提供新的靶点。