猪细小病毒病毒样颗粒的制备及其免疫评价

为了研制猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)疫苗,结合大肠杆菌密码子偏好性,经密码子优化,合成猪细小病毒VP2蛋白编码区序列,并将其插入原核表达载体pET28a中,随后转化BL21(DE3)感受态细胞,再转入伴侣蛋白质粒pTf16构建共表达载体,优化诱导表达条件,进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。结果表明,在L-阿拉伯糖质量浓度为2 mg/mL、IPTG浓度为0.1 mmol/L、温度为30℃、诱导12 h时重组蛋白VP2可溶性表达量最高,经硫酸铵沉淀和Ni-NTA亲和层析纯化获得纯度约90%的VP2蛋白,体外装配可形成直径约20 nm的具有血凝活性的VLPs。用制备的VLPs免疫昆明鼠并对其进行免疫评价,结果表明,制备的VLPs能有效刺激机体产生高滴度抗体,ELISA效价高达1∶25600。可见,制备的VLPs能刺激机体产生特异性抗体。