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H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白在水稻胚乳中的表达及其纯化
1
作者
屈小天
王雅楠
+4 位作者
许倩茹
李雪洋
张申立
张二芹
张改平
《河南农业科学》
北大核心
2024年第3期125-132,共8页
为制备H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白并评估其免疫原性,利用水稻表达系统表达H5N1亚型禽流感病毒重组HA蛋白。首先构建了重组植物表达载体pCAMBIA1300-HA,该载体具有GT13特有启动子、信号肽SP和终止子,有利于外源基因在水稻中表达。之后将...
为制备H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白并评估其免疫原性,利用水稻表达系统表达H5N1亚型禽流感病毒重组HA蛋白。首先构建了重组植物表达载体pCAMBIA1300-HA,该载体具有GT13特有启动子、信号肽SP和终止子,有利于外源基因在水稻中表达。之后将重组质粒pCAMBIA1300-HA通过电转化法导入根癌农杆菌EHA105中,筛选出阳性菌落并侵染水稻愈伤组织。经过暗培养、潮霉素筛选、分化、生根、成苗,采用CTAB法提取水稻叶片DNA,PCR鉴定结果显示,HA基因已插入到水稻基因组中,重组HA基因大小为4660 bp。将阳性植株移植到大田中,4个月后收获水稻种子,提取水稻胚乳蛋白,Western blot鉴定结果表明,HA蛋白在水稻胚乳中成功表达。重组HA蛋白通过Q阴离子层析、疏水层析和凝胶过滤层析三步分离纯化,其纯度达到90%以上。最后将纯化后的重组HA蛋白与ISA 50V佐剂混合并乳化制成疫苗,免疫小鼠,小鼠血清具有较高的特异性抗体水平,表明重组HA蛋白免疫原性较好。综上,成功构建了H5N1亚型禽流感病毒HA重组蛋白的水稻表达系统,并分离纯化获得了高纯度和免疫原性良好的重组HA蛋白。
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关键词
H5N1亚型禽流感病毒
HA蛋白
水稻胚乳表达
蛋白质纯化
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职称材料
题名
H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白在水稻胚乳中的表达及其纯化
1
作者
屈小天
王雅楠
许倩茹
李雪洋
张申立
张二芹
张改平
机构
河南农业大学
生命科
学
学院
吉林
大学
动物
医学院
河南农业大学动物医学院/国家动物免疫学国际联合研究中心
河南
省
农业
科
学院
动物
免疫
学
重点实验室
出处
《河南农业科学》
北大核心
2024年第3期125-132,共8页
基金
国家转基因生物新品种培育重大专项(2016ZX08001006-10)。
文摘
为制备H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白并评估其免疫原性,利用水稻表达系统表达H5N1亚型禽流感病毒重组HA蛋白。首先构建了重组植物表达载体pCAMBIA1300-HA,该载体具有GT13特有启动子、信号肽SP和终止子,有利于外源基因在水稻中表达。之后将重组质粒pCAMBIA1300-HA通过电转化法导入根癌农杆菌EHA105中,筛选出阳性菌落并侵染水稻愈伤组织。经过暗培养、潮霉素筛选、分化、生根、成苗,采用CTAB法提取水稻叶片DNA,PCR鉴定结果显示,HA基因已插入到水稻基因组中,重组HA基因大小为4660 bp。将阳性植株移植到大田中,4个月后收获水稻种子,提取水稻胚乳蛋白,Western blot鉴定结果表明,HA蛋白在水稻胚乳中成功表达。重组HA蛋白通过Q阴离子层析、疏水层析和凝胶过滤层析三步分离纯化,其纯度达到90%以上。最后将纯化后的重组HA蛋白与ISA 50V佐剂混合并乳化制成疫苗,免疫小鼠,小鼠血清具有较高的特异性抗体水平,表明重组HA蛋白免疫原性较好。综上,成功构建了H5N1亚型禽流感病毒HA重组蛋白的水稻表达系统,并分离纯化获得了高纯度和免疫原性良好的重组HA蛋白。
关键词
H5N1亚型禽流感病毒
HA蛋白
水稻胚乳表达
蛋白质纯化
Keywords
H5N1 subtype avian influenza virus
HA protein
Rice endosperm expression
Protein purification
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白在水稻胚乳中的表达及其纯化
屈小天
王雅楠
许倩茹
李雪洋
张申立
张二芹
张改平
《河南农业科学》
北大核心
2024
0
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