半胱胺在反刍动物中的应用

半胱胺是辅酶A分子的组成部分,是动物体内的生物活性物质,在促进动物生长发育、提高动物生产性能等方面有很好的效果,且具有适用范围广、价格低廉、使用方便等优点,可作为反刍动物一种较为理想的饲料添加剂应用于生产。综述了半胱胺在反刍动物中的应用效果和存在的问题。

黄芪多糖对内毒素诱发奶牛实验性乳腺炎影响初探

选择同处于泌乳后期、日均产奶量相当的荷斯坦奶牛3头。每天早上挤奶后,于右后乳区经过乳头管灌注黄芪多糖20mL,左后乳区注入20mL生理盐水作为对照,连续10d。第11d早上挤奶后,两侧乳区均灌注含有100μg大肠杆菌内毒素的生理盐水10mL。分别于灌注黄芪多糖前、灌注内毒素前1h及灌注后3、6、9、12、24h采集两个乳区的乳样进行指标测定。试验结果表明,与灌注内毒素前相比,灌注PSS的对照乳区乳中的N—乙酰—β—D—氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力在注入内毒素后9h时达到峰值(12.65U/mg protein),24h时乳中NAGase活力下降到灌注内毒素前的水平(P>0.05);而施用了APS的试验乳区,在注入内毒素后,乳中的NAGase活力6h时达到峰值(16.79U/mg protein),9h时乳中NAGrise活力已下降到灌注内毒素以前的水平(P>0.05)。总抗氧化能力(T—AOC)的测定结果表明,奶牛乳导管注入内毒素后,两种处理的乳区乳中的总抗氧化能力显著下降(P<0.05),两种处理的乳区乳之间比较无显著差异(P>0.05)。

肌肽清除自由基及抗氧化性质的作用研究

采用邻苯三酚自氧化和脱氧核糖降解研究了肌肽对超氧阴离子、.OH自由基的清除效果;采用过氧化氢、紫外线诱导的红细胞氧化和水浴、四氯化碳诱导的肝匀浆氧化,研究了肌肽对脂质氧化的抑制作用.试验结果表明:肌肽能够在1 mmol/L时减少超氧阴离子的生成,随浓度增加抑制作用逐渐减弱;各浓度肌肽组剂量依赖性清除.OH自由基,显著减少脱氧核糖降解产物的生成;随浓度增加,肌肽能够显著抑制红细胞的氧化溶血和降低肝匀浆脂质氧化产物的生成.

猪KISS-1基因克隆、序列分析

在猪的不同组织中克隆KISS-1基因,提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR,PCR产物与pMD-19T载体连接后转化E.coliDH5α,检测阳性克隆并测序;结果:克隆的猪KISS-1基因与牛、人、大鼠、小鼠同源性分别为81.0%、76.8%、71.4%、72.4%;克隆了猪KISS-1基因全长并注册GenBank(Accession.EU934235),猪KISS-1基因在多种组织中表达。

猪Mighty基因的克隆与组织表达分析

Mighty基因是在骨骼肌中发现的一个新颖的肌形成前期因子。基于电子延伸序列,本试验成功克隆出了Mighty基因,其全长874 bp,开放阅读框为579 bp,编码有193个氨基酸,提交GenBank(EU559709)。同时,试验采取半定量RT-PCR法,以18S rRNA为内标,研究了Mighty基因在仔猪18个组织中的分布和mRNA的表达水平。

牛乳汁中葡萄糖转运基因的表达

以牛初乳和末乳为研究对象,利用乳汁体细胞的分子生物学技术平台,对牛乳汁中葡萄糖转运基因的表达进行研究。结果表明,初乳和末乳中均有GAT-(1,4)和SGLT-1表达,且初乳中的表达高于末乳;GLUT-1只在末乳中有表达,初乳中不表达。提示乳腺细胞葡萄糖的摄取方式与泌乳阶段相关,初乳期乳腺合成乳糖的作用高于末乳期乳腺。

乳腺分泌物中体细胞的研究进展

不同物种的乳腺分泌物中含有的细胞成分被称为体细胞,其中包括淋巴细胞、白细胞、巨噬细胞和上皮细胞。物种、乳腺感染情况、不同生理阶段和饲养管理条件等因素均会影响乳中的体细胞数量和细胞类型。近年来,乳中体细胞得到了人们的关注和深入研究,显示出广阔的应用前景。人们利用从初乳和常乳中得到的乳腺上皮细胞已经成功进行了乳腺细胞的原代培养和建立了乳腺细胞系,为乳生成、被动免疫转移和乳腺癌的研究提供了良好平台。体细胞中提取的RNA代表了乳腺组织的基因表达,因此为研究乳腺组织的基因表达提供了方便、良好的来源。

斑点免疫金渗滤法检测抗乳铁蛋白多克隆抗体特异性研究

采用斑点免疫金渗滤法对抗乳铁蛋白多克隆抗体特异性进行检测。结果表明金探针具有很强的选择性,斑点免疫金渗滤法能准确快速地检测出多克隆抗体的特异性。

猪Chemerin和受体基因的克隆与组织分布

基于电子延伸序列,本试验克隆并分析了猪Chemerin和受体(ChemerinR)基因;各种组织提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR,PCR产物与pMD19-T连接后转化E.coliJM109,检测阳性克隆并测序;结果表明:猪Chemerin cDNA克隆片段为558 bp,开放阅读框架为492 bp,编码有163个氨基酸。ChemerinR cDNA克隆片段为1 470 bp,开放阅读框架为1 092 bp,编码363个氨基酸。同源分析结果表明,猪Chemerin的核酸序列与牛、人和大鼠的同源性分别为86.7%、79.1%和73%,氨基酸序列的同源性分别为83.1%、83.4%和67.7%,ChemerinR的核酸序列与人、大鼠和小鼠的同源性分别为80.4%、77.6%和72.6%,氨基酸序列的同源性分别为88.2%、80.7%和79.3%。组织分布结果显示:猪Chemerin在多种组织均有分布,ChemerinR仅在膀胱、大脑和肌肉有分布。

猪肌肉素基因的cDNA克隆与表达

从人肌肉素基因出发，在dbEST数据库中进行同源性搜索，找到七个有较高同源性的Expressed Sequence Tag（DY426490，CF787546，AJ660979，AJ664670，AJ663820，AJ680159，DN106254）。通过拼接和进一步RT-PCR实验验证，获得猪肌肉素基因全长cDNA序列，其全长651bp，开放阅读框为54～452bp，编码有132个氨基酸。同源性分析结果表明，与人、小鼠和大鼠的肌肉素基因cDNA编码区（CDS）同源性分别为87．2％、77．6％和77．9％。利用克隆出的猪肌肉素cDNA，构建表达载体pGEX-4T-1-musclin，并在BL21大肠杆菌中成功表达和纯化了分子量为38．59kD的融合蛋白GST-Musclin，并运用蛋白印迹技术进行鉴定。

猪神经介素B和受体基因的克隆与组织分布

基于电子延伸序列,克隆并分析了猪神经介素B(NMB)和受体(NMBR)基因。猪NMBcDNA克隆片段长度为567 bp,开放阅读框架长度为366 bp,编码121个氨基酸。NMBR cDNA克隆片段长度为1 194 bp,开放阅读框架长度为1 173 bp,编码390个氨基酸。同源分析表明,猪NMB的核酸序列与牛、人、小鼠和大鼠的同源性分别为87.1%,85.2%,78.1%和76.6%,氨基酸序列的同源性分别为81%,74.4%,70.2%和70.1%;NMBR的核酸序列与牛、人、小鼠和大鼠的同源性分别为91%,89%,84.2%和83.6%,氨基酸序列的同源性分别为92.3%,90.3%,86.9%和86.4%。组织分布结果显示,猪NMB在多种组织均有分布,NMBR仅分布在大脑。克隆的猪NMB和受体基因分别注册GenBank(EU375564和EU670045)。

乳汁中RNA提取方法的建立

用牛初乳作为试验材料,进行乳汁体细胞的提取及RNA的提取与扩增。结果显示:牛初乳中含有大量的体细胞(SCC约为20万/ml,活力约为60%),从体细胞中提取RNA,所提取的RNA完整性和纯度可以用来合成cDNA,管家基因GAPDH扩增条带正确,表明可以用合成的cDNA作为模板进行其它基因的扩增,为奶牛在基因工程方面的研究提供分子生物学技术平台。

小鼠催乳素释放肽的初步克隆

为克隆并分析小鼠催乳素释放肽基因,从小鼠下丘脑提取总RNA,进行RT-PCR,PCR产物与pMD-19T连接后转化E.coli DH5α,检测阳性克隆并测序。测序结果表明,所得序列与大鼠催乳素释放肽编码区序列的相似指数为86.3%。克隆所得序列为小鼠催乳素释放肽的基因片段。

乳腺分泌细胞钙转运机制

依据钙转运的模式,综述了乳腺分泌细胞钙转运机制,阐明了参与钙转运过程的关键分子,为今后的研究提供了新思路。

绵羊Gastorkine-1基因的克隆与序列分析

基于电子延伸序列，克隆并分析了绵羊Gastorkine—1基因。提取皱胃黏膜组织总RNA，利用设计的引物进行RT-PCR，PCR产物与pMD19-T载体连接后转化E．coli JM109感受态细胞，检测阳性克隆并测序。克隆的绵羊Gastorkine—1基因长619bp，编码185个氨基酸，与人、小鼠、猪、牛的同源性分别为82．0％，48．8％，85．4％，96．9％，推测的氨基酸序列信号肽为1～20aa，BRICHOS结构域为54～150aa，结构特征与人、小鼠、猪、牛的Gastorkine-1相一致。

猪脂肪特异性蛋白27基因的克隆与序列分析

基于电子延伸序列,克隆并分析了猪脂肪特异性蛋白27基因。各种组织提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR,PCR产物与pMD19-T连接后转化E.coliJM109,检测阳性克隆并测序。猪FSP27基因的cDNA序列,其全长为745bp,开放阅读框为11-727bp,编码有238个氨基酸。同源分析结果表明,猪FSP27的核酸序列与人、小鼠和牛的同源性分别为86%、77.6%、82.3%,氨基酸序列的同源性分别为83.2%、74.4%、79.3%。组织分布结果显示:猪FSP27基因在多种组织均有分布。克隆的猪FSP27基因并注册GenBank(Accession.EU395789)。

地塞米松对小鼠脂肪组织中孤啡肽及其受体基因表达的影响研究

目的:探讨地塞米松对孤啡肽及其受体mRNA在小鼠附睾脂肪组织中表达的变化。方法:将12只雄性昆明小鼠,随机分为正常组和地塞米松组,分别采集其脂肪组织,用RT-PCR方法检测孤啡肽及其受体mRNA水平的变化。结果:与正常组相比,地塞米松组孤啡肽及其受体的mRNA表达水平明显下降(P<0.05)。结论:地塞米松可能抑制孤啡肽及其受体基因的活性和合成,对孤啡肽及其受体基因的表达可能具有强烈的下调作用。

猪干扰素IFNE1基因克隆及重组表达载体的构建

依据电子延伸序列设计一对克隆引物,用RT-PCR法从猪胃组织扩增出猪干扰素epsilon 1(IFNE1)基因的完整编码区并进行序列分析;再根据克隆的序列设计一对表达引物,用PCR法从重组克隆载体中扩增出含EcoRI/XhoI酶切位点的猪IFNE1片段,插入原核表达载体,转化至宿主菌,诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白。结果表明,克隆的猪IFNE1基因包含完整的开放阅读框架,长为586bp,ORF为582bp,编码193个氨基酸,与人、小鼠的同源性分别为83.6%和69.2%,推测的氨基酸序列与人、小鼠的同源性分别为76.2%和55.2%,表达的融合蛋白分子量约为47kD。

妊娠和泌乳期大鼠血清激素水平的变化

[目的]探讨大鼠血清糖代谢激素与生殖激素的关系及其与生殖周期活动的相关性。[方法]以妊娠中晚期和泌乳早中期的24只雌性处女SD大鼠和12只雄性SD大鼠为研究对象,用放射免疫法测定大鼠血清FSH、LH、胰岛素和胰岛素抗体的水平。[结果]FSH从妊娠中期到泌乳早期呈现先下降,再升高,后下降的趋势,泌乳中期降至最低,差异不显著;LH从妊娠中期到泌乳早期变化不大,从泌乳早期到泌乳中期有所上升,且差异显著;胰岛素和胰岛素抗体结合率从妊娠中期到妊娠晚期呈上升趋势,从妊娠晚期到泌乳早期急剧下降,泌乳早期降至最低,至泌乳中期迅速升至妊娠中晚期水平。[结论]大鼠血清胰岛素及其抗体与LH在妊娠和泌乳期的变化一致,与FSH的变化相反。

猪Musclin基因片段克隆与序列分析

【研究目的】克隆并分析猪musclin基因;【方法】肌肉组织提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR,PCR产物与pMD19-T连接后转化E.coliDH5α,检测阳性克隆并测序;【结果】克隆的猪musclin基因片段与人、大鼠、小鼠同源性分别为86%、78%、75%,预测的氨基酸序列含有“KKKR”结构和与小鼠ANP、BNP、CNP蛋白的同源性区域;【结论】克隆了猪musclin基因片段并注册GenBank(Ac-cession.EF369511)。