猪细小病毒NS1基因的原核表达及重组蛋白的复性

利用PCR技术扩增出PPVNS1基因抗原区。将目的基因与原核表达载体pGEX-4T-1进行连接并转化,重组质粒经鉴定并测序。测序结果表明,目的基因插入的位置、大小和读码框均正确,通过试验摸索并确定了表达NS1基因的最佳诱导条件:IPTG终浓度为1.0mmol/L,诱导时间为10h,温度为37℃,其表达量占全菌蛋白的29.8%。表达产物经SDS-PAGE分析,得到分子量约为52kDa的重组蛋白且以包涵体形式存在。重组蛋白经Westernblot检测,结果证明重组蛋白可被PPV阳性血清识别。用8mol/L尿素变性溶解包涵体,再用稀释方法和还原型、氧化型谷胱甘肽系统相结合的方法对重组蛋白进行复性。ELISA检测表明,复性后的重组蛋白有良好的生物活性。

海兰鸡IL-18全基因的克隆与序列分析

IL-18是一种能诱导产生IFN-γ的新型细胞因子,在调节Th1型细胞免疫应答中起重要作用。根据GenBank发表的鸡IL-18cDNA基因序列,自行设计一对引物,经植物血凝素(PHA)活化60日龄海兰鸡的脾淋巴细胞后,提取其总RNA,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,扩增产物进行了T-A克隆、测序,获得了中国海兰鸡IL-18基因全序列,其大小为597 bp,与GenBank中查得的鸡IL-18基因进行比较发现,中国海兰鸡IL-18基因与Schneider报道的鸡IL-18基因序列完全一致,为进一步研究鸡IL-18基因表达、生物学活性和应用奠定了基础。

不同毒株猪细小病毒VP2基因的克隆与序列分析

应用PCR扩增了猪细小病毒NJ-1株、NJ-2株、7909株和Vaccine株的VP2基因，分别克隆于pGEM-T Easy载体中，测定其核苷酸序列，并推导出相应的氨基酸序列，对其核苷酸和氨基酸序列进行分析和同源性比较。所测4个序列中，NJ-1株、NJ-2株和7909株序列均为1437bp，共编码479个氨基酸；而Vaccine序列为657bp，比其他毒株缺失780bp，共编码219个氨基酸。将所得4个序列与GenBank中NADL-2株、Kresse株、China株及VR-1株相应的核苷酸及氨基酸进行同源性比较。发现其核苷酸和氨基酸的同源性分别在97．7％～99．9％和97．2％～99．2％之间，具有高度同源性；通过绘制系统进化树可知，分离自国内的China株、NJ-1株、NJ-2株、7909株及Vaccine株亲缘性最为相近。与其他毒株的亲缘关系较远。

干扰素研究进展

干扰素具有广谱抗病毒、抗肿瘤的活性以及强大的免疫调节作用,现已成为病毒学、细胞学、分子生物学、临床医学、免疫学、肿瘤学等相关领域的研究热点。本文就干扰素基因结构、作用机理及其基因工程等方面研究进展作一综述。

白细胞介素32研究进展

白细胞介素32(IL-32)是近年发现的一种细胞因子,主要由淋巴细胞,自然杀伤细胞,上皮细胞和外周血单核细胞分泌。IL-32具有特异的结合蛋白酶3,并与肽聚糖的胞壁酰二肽、核苷酸结合寡聚结构域具有协同作用,通过两条通路进行信号转导,决定了其前炎性细胞因子的特性,与多种疾病有密切相关,在治疗炎性疾病方面具有重要的临床意义。因此了解IL-32的背景及研究现状,已日益迫切。此文综述了IL-32的来源,结合蛋白及核酸结构,信号转导及协同作用,重点介绍了IL-32的生物学功能和与疾病的相关性。