浅谈Motic数码显微互动系统在组织学实验教学中的应用

Motic数码显微互动实验室在组织学实验课教学过程中具有明显优势,该系统一方面消除了师生之间在显微图像上的沟通障碍,充分实现教学过程中的师生互动;另一方面使教师迅速有效地对全体或个别学生给予直接指导和帮助,此外,还可发挥强大的计算机图像处理和保存功能,为组织学及其他的医学形态学实验课教学提供了高效的教学和沟通手段。Motic数码显微互动实验室改变了传统形态学实验课的教学模式,提高了教学质量和教学效率。

黄芪注射液对人羊膜上皮细胞向神经细胞分化作用及存活的影响

目的:探讨黄芪注射液体外定向诱导人羊膜上皮细胞分化的作用和黄芪注射液对分化细胞活力影响。方法:将人羊膜上皮细胞分为三组,即黄芪诱导组(设立四个浓度亚组)、全反式维甲酸组和对照组。分别采用化学诱导剂和黄芪注射液诱导hAECs分化为神经细胞,在诱导前后,应用免疫细胞化学方法染色鉴定神经元特异性烯醇化酶、神经干细胞巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白.逆转录-聚合酶链反应进一步鉴定细胞多能基因Oct4、神经干细胞标记物Nestin基因和神经元标记物NSE,四甲基偶氮唑盐比色法观察细胞活力。结果:倒置显微镜下见,RA诱导12 h后,黄芪诱导24 h后,由胞体伸出较长的轴突样和树突样突起,且有分支,48 h时100μl/ml黄芪诱导组,NSE阳性率低于RA诱导组(P<0.05),细胞活力较RA组高(P<0.05),两诱导组结果均高于对照组,而GFAP阳性率高于RA组(P<0.05),同时RT-PCR检测到诱导后多能基因Oct4表达减少,而Nestin、NSE表达增多。结论:黄芪和RA都可诱导人羊膜上皮细胞在体外分化为神经元样细胞,且黄芪于100μl/ml浓度时效果较好,黄芪诱导后对细胞毒性较小。

锰诱导大鼠生精细胞凋亡过程中半胱氨酸酶-3mRNA与增殖细胞核抗原表达变化

目的：研究氯化锰对生精细胞凋亡过程半胱氨酸酶3 （caspase-3） mRNA和增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响,探讨两者在生精细胞凋亡过程中的作用.方法：雄性SD大鼠随机分为空白对照组、低剂量（15 mg/kg MnC12）和高剂量（30 mg/kg MnCl2）组.MnCl2组分别染锰4周和6周,空白对照组给予等容生理盐水,给药途径均为腹腔注射,TUNEL法检测睾丸生精细胞凋亡,原位杂交和免疫组织化学（SABC）检测生精细胞caspase-3 mRNA和PCNA和表达.结果：与空白对照组比较,各染锰组生精细胞凋亡指数（AI）均升高,caspase-3 mRNA阳性细胞率均显著升高,染锰4周PCNA阳性细胞率显著降低,染锰6周反而升高.染锰剂量相同,6周与4周组比较,生精细胞AI与caspase-3 mRNA阳性细胞率、PCNA阳性细胞率均显著升高.染锰时间相同,高剂量组与低剂量组比较,生精细胞AI与caspase-3 mRNA阳性细胞率均显著升高,PCNA阳性细胞率显著降低.各组大鼠生精细胞AI与caspase-3 mRNA阳性细胞率呈正相关,与PCNA阳性细胞率呈负相关,而caspase-3 mRNA阳性细胞率与PCNA阳性细胞率呈负相关.结论：锰可诱导大鼠生精细胞caspase-3mRNA表达,促使生精细胞凋亡并且抑制细胞增殖,产生生殖毒性效应.

染锰大鼠生精细胞caspase-3表达与生殖激素及乳酸脱氢酶水平关系

目的：研究锰对大鼠体内生殖激素和乳酸脱氢酶（LDH）水平的影响，探讨锰对大鼠生精细胞caspase-3表达与生殖激素和LDH水平之间的关系。方法：雄性SD大鼠随机分为空白对照组，15mg／kgMnCl2和30mg／kMnCl。组。免疫组织化学检测睾丸caspase-3表达，放射免疫测定血清睾酮（T）、卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）含量，化学比色测定血清和睾丸LDH活性。结果：与空白对照组比较，各染锰组caspase-3阳性细胞率均升高，血清睾酮含量降低，FSH和LH含量升高，6周30mg／kg组血清LDH活性升高，各染锰组睾丸LDH活性降低。染锰剂量相同，6周与4周比较，caspase-3阳性细胞率和血清FSH、LH含量升高，血清和睾丸LDH活性分别升高和降低。染锰时间相同，高剂量组与低剂量组比较，caspase-3阳性细胞率和血清FSH、LH含量均升高，血清和睾丸LDH活性分别升高和降低。结论：染锰15mg／kg4周即可诱发大鼠血清睾酮含量降低，FSH和LH含量升高及睾丸LDH活性降低和血清LDH活性升高，可能是促进生精细胞caspase-3表达的重要原因。

染锰大鼠生精细胞凋亡中caspase-3 mRNA、凋亡蛋白酶活化因子-1及多聚ADP核糖聚合酶的表达变化

目的:研究染锰诱导的大鼠生精细胞凋亡过程中,天冬氨酸特异性半胱氨酸酶-3(caspase-3)mRNA和凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)、多聚ADP核糖聚合酶(PARP)的表达及其关系,探讨它们在生精细胞凋亡过程中的作用。方法:雄性SD大鼠,设立空白对照组、低剂量(15 mg/kg MnCl_2)和高剂量(30 mg/kg MnCl_2)组。实验组分别染锰4周和6周,空白对照组给予等容生理盐水,给药途径均为腹腔注射,TUNEL法检测生精细胞凋亡,原位杂交法和免疫组织化学法检测生精细胞caspase-3 mRNA、Apaf-1和PARP的表达。结果:与空白对照组比较,各染锰组生精细胞凋亡指数(AI)和caspase-3mRNA阳性细胞率均显著升高,Apaf-1和PARP阳性细胞率均显著降低。染锰剂量相同,6周与4周组比较,以及染锰时间相同,高剂量组与低剂量组比较,生精细胞AI和caspase-3 mRNA阳性细胞率均显著升高,Apaf-1和PARP阳性细胞率均显著降低。各组大鼠生精细胞AI与caspase-3 mRNA阳性细胞率呈正相关,与Apaf-1和PARP阳性细胞率呈负相关。结论:锰可影响大鼠生精细胞caspase-3 mRNA表达,促进Apaf-1和PARP分解,导致生精细胞凋亡,产生生殖毒性效应。

锰诱导大鼠生精细胞凋亡过程中生殖激素和乳酸脱氢酶及PARP的作用

目的研究锰对大鼠体内生殖激素和乳酸脱氢酶(LDH)和多聚ADP核糖聚合酶(PARP)表达的影响,探讨它们在生精细胞凋亡过程中的作用。方法雄性SD大鼠48只,随机分为空白对照组,低剂量组和高剂量组,腹腔注射Mn Cl24周和6周,TUNEL法检测生精细胞凋亡,放射免疫测定血清睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)含量,化学比色测定血清和睾丸LDH含量。免疫组织化学法检测生精细胞PARP表达。结果各染锰组生精细胞凋亡指数、血清FSH、LH及LDH含量升高,血清T、睾丸LDH含量及PARP表达降低。结论锰可使大鼠T和睾丸LDH降低,FSH、LH和血清LDH活性升高,抑制大鼠生精细胞PARP表达,导致生精细胞凋亡。

细胞色素C和波形蛋白在染锰大鼠睾丸表达及对精子发生的抑制作用

目的研究氯化锰对大鼠生精细胞细胞色素C(cyto-c)和支持细胞波形蛋白(VM)表达的影响及对生精功能的抑制效应。方法雄性SD大鼠随机分为空白对照组,低剂量(15 mg/kg Mn Cl2)和高剂量(30 mg/kg Mn Cl2)组,8只/组。Mn Cl2组分别染锰4周和6周,空白对照组给予等容生理盐水,给药途径均为腹腔注射,取睾丸免疫组织化学(SABC)法检测生精细胞cyto-c和VM表达,测定睾丸脏器系数,取附睾检测精子数量和精子畸形率。结果与空白对照组比较,各染锰组生精细胞cyto-c阳性细胞率和支持细胞VM阳性细胞率及各生精功能指标均显著降低,并呈一定的时间-效应关系和剂量-效应关系。各组大鼠精子数量与cyto-c阳性细胞率和VM阳性细胞率均呈正相关。结论锰可诱导大鼠生精细胞cyto-c和支持细胞VM表达,抑制生精细胞增殖,产生生殖毒性效应。

生殖激素及LDH在染锰大鼠生精细胞凋亡蛋白表达中的作用

目的研究锰对大鼠体内生殖激素和乳酸脱氢酶(LDH)水平的影响,探讨锰对大鼠生精细胞caspase-3表达与生殖激素和LDH水平之间的关系。方法 48只雄性SD大鼠,体质量(120±10)g随机分为6组:空白对照组,低剂量(15 mg/kg MnCl2)和高剂量(30 mg/kg MnCl2)组,8只/组。MnCl2组分别染锰4 w和6 w,空白对照组给予等量NS,给药途径均为腹腔注射,5 d/w,1次/d。大鼠分别于第4w末和第6w末处死。免疫组化法检测睾丸组织中caspase-3表达,放射免疫法测定血清T、FSH和LH含量,化学比色法测定血清和睾丸LDH活性。结果与空白对照组比较,各染锰组caspase-3阳性细胞率均显著升高,血清T含量显著降低,FSH和LH含量显著升高,6 w 30mg/kg组血清LDH活性显著升高,各染锰组睾丸LDH活性显著降低(P<0.01)。染锰剂量相同,6 w与4 w比较,caspase-3阳性细胞率和血清FSH、LH含量显著升高(P<0.01),血清和睾丸LDH活性分别显著升高和降低(P<0.01)。染锰时间相同,高剂量组与低剂量组比较,caspase-3阳性细胞率和血清FSH、LH含量均显著升高(P<0.01),血清和睾丸LDH活性分别显著升高和降低(P<0.01)。结论染锰15 mg/kg 4 w即可诱发大鼠血清T含量降低,FSH和LH含量升高及睾丸LDH活性降低和血清LDH活性升高,可能是促进生精细胞caspase-3表达的重要原因。

XIAP和Smac在染锰大鼠生精细胞Caspase-9和Apaf-1表达中的作用

目的研究氯化锰导致的大鼠生精细胞caspase-9及Apaf-1表达中XIAP和Smac的调节机制,探讨锰导致的雄性不育机制。方法雄性SD大鼠随机分为对照组、低剂量(15 mg/kg MnCl_2)和高剂量(30 mg/kg MnCl_2)组,腹腔注射MnCl_24周和6周,免疫组织化学检测生精细胞caspase-9、Apaf-1、XIAP和Smac表达。结果 (1)各组生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高(P<0.01),XIAP表达降低(P<0.01)。(2)同时间的高剂量组与低剂量组比较,同剂量的6周组与4周组比较,生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高(P<0.01),XIAP表达降低(P<0.01)。(3)各组caspase-9与Apaf-1表达呈正相关(r=0.862,P<0.05),XIAP与Smac表达呈负相关(r=-0.887,P<0.01)。结论锰可促进生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达,抑制XIAP表达,导致细胞凋亡,产生雄性生殖毒性效应。

PCNA和Ki-67在染锰大鼠生精细胞中的表达及研究

目的研究氯化锰对生精细胞PCNA和Ki-67表达的影响,比较二者作为细胞增殖指标的差异。方法雄性SD大鼠(体重120±10 g)48只,随机分为6组:空白对照组,低剂量(15 mg/kg MnCl2)和高剂量(30 mg/kg MnCl2)组,8只/组。MnCl2组分别染锰4周和6周,空白对照组给予等量NS,给药途径均为腹腔注射,5 d/周,1次/d,分别于第4周末和第6周末处死,免疫组化(SABC法)法检测睾丸PCNA和Ki-67表达。结果与空白对照组比较,染锰4周PCNA阳性细胞率显著降低,染锰6周反而升高(P<0.01)。各染锰组Ki-67总阳性细胞率显著降低,细胞核阳性细胞率显著升高(P<0.01)。染锰剂量相同,6周与4周组比较,PCNA阳性细胞率显著升高,Ki-67总阳性细胞率显著降低,Ki-67细胞核阳性细胞率显著升高(P<0.01)。染锰时间相同,高剂量组与低剂量组比较,PCNA阳性细胞率和Ki-67总阳性细胞率均显著降低(P<0.01),Ki-67细胞核阳性细胞率在4周组和6周组分别显著升高和显著降低(P<0.01)。结论 15 mg/kg氯化锰即可抑制大鼠生精细胞的增殖能力,PCNA和Ki-67互相结合可以更加准确地反映细胞周期。

Caspase-9与Apaf-1在锰中毒大鼠生精细胞表达及XIAP与Smac的调控作用

目的研究氯化锰导致的大鼠生精细胞caspase-9及Apaf-1表达中XIAP和Smac的调节机制,探讨锰导致的雄性不育机制。方法雄性SD大鼠随机分为对照组,低剂量(15 mg/kg Mn Cl2)和高剂量(30 mg/kg Mn Cl2)组,腹腔注射MnCl24周和6周,免疫组织化学检测生精细胞caspase-9、Apaf-1、XIAP和Smac表达。结果各组生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低;同时间的高剂量组与低剂量组比较,同剂量的6周组与4周组比较,生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低;各组caspase-9与Apaf-1表达正相关,XIAP与Smac表达成负相关。结论锰可促进生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达,抑制XIAP表达,导致细胞凋亡,产生雄性生殖毒性效应。

锰对大鼠睾丸支持细胞骨架蛋白及紧密连接相关蛋白表达的抑制作用

目的研究染锰诱导的大鼠睾丸超微结构改变及支持细胞(vimentin,VM)和紧密连接Occludins、Claudin-11mRNA表达,探讨锰对支持细胞骨架蛋白和紧密连接蛋白的破坏机制。方法雄性SD大鼠随机分为空白对照组,低剂量(15 mg/kg MnCl_2)和高剂量(30 mg/kg MnCl_2)组,8只/组。实验组分别染锰4周和6周,空白对照组给予等容生理盐水,给药途径均为腹腔注射,电镜观察睾丸支持细胞及血睾屏障超微结构,免疫组织化学(SABC)法检测支持细胞VM表达,实时定量PCR反应检测血睾屏障紧密连接Occludins和Claudin-11 mRNA表达。结果 1与空白对照组比较,各染锰组支持细胞数量及VM阳性细胞率、Occludins mRNA和Claudin-11 mRNA表达均显著降低。2染锰剂量相同,6周与4周组比较,以及染锰时间相同,高剂量组与低剂量组比较,支持细胞数量及VM阳性细胞率、Occludins mRNA和Claudin-11 mRNA表达均显著降低。3各组大鼠睾丸支持细胞数量与VM阳性细胞率及Occludins mRNA和Claudin-11 mRNA表达均成正相关。结论锰可抑制大鼠睾丸支持细胞骨架蛋白及紧密连接相关蛋白表达,破坏血睾屏障,导致生精微环境改变,产生生殖毒性效应。

X连锁凋亡抑制蛋白和线粒体第二激活因子在锰诱导大鼠生精细胞凋亡蛋白酶表达中的调节作用

目的:研究氯化锰导致的大鼠生精细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)及凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)表达中X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和线粒体第二激活因子(Smac)的调节机制,探讨锰导致的雄性不育机制。方法:雄性SD大鼠随机分为对照组、低剂量(15 mg/kg MnCl_2)和高剂量(30 mg/kg MnCl_2)组,腹腔注射MnCl_2 4周和6周,免疫组织化学检测生精细胞caspase-9、Apaf-1、XIAP和Smac表达。结果:与对照组相比较,各组生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低。同时间的高剂量组与低剂量组比较,同剂量的6周组与4周组比较,生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低。各组caspase-9与Apaf-1表达呈正相关,XIAP与Smac表达呈负相关。结论:锰可促进生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达,抑制XIAP表达,导致细胞凋亡,产生雄性生殖毒性效应。

Caspase-3mRNA与PARP在染锰大鼠生精细胞中表达变化

目的研究氯化锰对生精细胞凋亡过程半胱氨酸酶3(caspase-3)mRNA和多聚ADP核糖聚合酶(PARP)表达的影响,探讨氯化锰的生殖毒性效应及可能机制。方法雄性SD大鼠48只随机分为空白对照组,低剂量(15 mg/kg MnCl_2)和高剂量(30 mg/kg MnCl_2)组,8只/组。MnCl_2组分别染锰4周和6周,空白对照组给予等容生理盐水,给药途径均为腹腔注射,TUNEL法检测睾丸生精细胞凋亡,原位杂交法和免疫组织化学(SABC)法检测生精细胞caspase-3mRNA和PARP和表达。结果随染锰时间延长和剂量增加,各染锰组生精细胞凋亡指数(AI)及caspase-3 mRNA表达水平显著升高,PARP表达水平显著降低,凋亡指数AI分别与caspase-3 mRNA和PARP表达呈正相关和负相关。结论锰可诱导大鼠生精细胞caspase-3 mRNA表达,促进PARP分解,导致生精细胞凋亡,产生生殖毒性效应。

锰对大鼠生精细胞凋亡的影响

锰可以引起睾丸的组织病理学改变,抑制G-6PD和NADH活性,抑制铁和锌的吸收,导致性发育不良和性功能低下。在细胞凋亡信号传导通路上,线粒体通路和死亡受体通路的交汇点在caspase-3,caspase-3m RNA可以把DNA的遗传信息精确无误地转录下来,决定蛋白质的氨基酸顺序,完成基因表达过程中的遗传信息传递。caspase-3由细胞质进入细胞核是其发挥促凋亡作用所必需的过程,可以通过检测caspase-3蛋白的活性,为早期发现和诊断各种原因所导致的生精障碍提供依据,以caspase-3抑制剂或拮抗蛋白治疗可以为治疗男性不育开辟一条新的途径。

支持细胞波形蛋白及紧密连接结构蛋白在染锰大鼠睾丸中的表达

目的研究染锰诱导的大鼠睾丸超微结构改变及支持细胞vimentin(VM)和紧密连接Occludins mRNA和Claudin-11 mRNA表达,探讨锰对支持细胞骨架蛋白和紧密连接蛋白的破坏机制。方法雄性SD大鼠随机分为空白对照组,低剂量(15 mg/kg MnCl_2)和高剂量(30 mg/kg MnCl_2)组,8只/组。实验组分别染锰4周和6周,空白对照组给予等容生理盐水,给药途径均为腹腔注射,电镜观察睾丸支持细胞及血睾屏障超微结构,免疫组织化学(SABC)法检测支持细胞VM表达,实时定量PCR反应检测血睾屏障紧密连接Occludins,Claudin-11 mRNA表达。结果随着染锰时间延长和剂量增加,各组支持细胞数量及VM阳性细胞率、Occludins mRNA和Claudin-11 mRNA表达水平均显著降低。各组大鼠睾丸支持细胞数量与VM阳性细胞率及Occludins mRNA和Claudin-11 mRNA表达水平均成正相关。结论锰可抑制大鼠睾丸支持细胞骨架蛋白及紧密连接相关蛋白表达,产生生殖毒性效应。

染锰大鼠睾丸Caspase-9,Smac,Apaf-1和XIAP的表达

目的研究氯化锰导致的大鼠生精细胞caspase-9及Apaf-1表达中XIAP和Smac的调节机制,探讨锰导致的雄性不育机制。方法雄性SD大鼠随机分为对照组,氯化锰低剂量(15mg/kg MnCl_2)和氯化锰高剂量(30mg/kg MnCl_2)组,腹腔注射MnCl_24周和6周,免疫组织化学SABC法和Western blot检测生精细胞caspase-9、Apaf-1、XIAP和Smac表达。结果氯化锰组生精细胞caspase-9和Smac蛋白表达水平显著高于对照组,随时间和剂量增加而升高;而Apaf-1和XIAP蛋白表达水平则降低,并有时间和剂量依赖性。结论 caspase-9,Apaf-1,XIAP和Smac可能参与锰引起雄性生殖毒性的发病机制。