食管癌多中心起源理论的分子学基础研究

采用免疫组化选择性ＤＮＡ序列分析方法，对来自河南省林州市２１例原发性食管鳞癌患者食管癌组织和癌旁基底细胞增生、间变和原位癌病灶的肿瘤抑制基因Ｐ５３进行比较研究。结果：２１例原发食管癌病灶中发现１４例Ｐ５３基因突变（６７％）。突变部位分别为第５外显子（４例，占２９％）、第６外显子（１例，占７％）、第７外显子（２例，占１４％）和第８外显子（６例，占４２％）。１例突变发生在第４内显子（７％）。对１４例癌旁上皮基底细胞增生、间变和原位癌病灶的Ｐ５３基因分析发现均有不同数量的基因突变。间变及原位癌组织的Ｐ５３基因突变与癌组织极为相似，但是基底细胞增生病变的Ｐ５３基因突变与癌组织不同，其突变部位均发生在第５外显子。提示：食管上皮不同部位的孤立病灶出现相似的分子学改变，支持食管癌多中心起源的理论，随着病变从基底细胞增生到间变到原位癌和早期浸润癌的发展，这些分子学变化可能在癌变的不同阶段起重要作用。

河南林州市人与实验动物食管上皮病变的比较

采用免疫组织化学和组织病理学方法对食管癌高发区河南省林州市（原林县）居民、当地居民家庭饲养的猪以及甲基苄基亚硝胺诱发的ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙ大鼠食管上皮病变和肿瘤抑制基因Ｐ５３的改变进行比较研究。结果：大鼠和猪食管上皮增生性改变，特别是基底细胞增生和间变的形态学改变与人食管上皮改变非常相似；大鼠食管上皮癌变各阶段未见明显Ｐ５３蛋白的改变，猪食管上皮特别是间变组织出现与人相似的Ｐ５３免疫阳性反应。提示：食管癌高发区居民饲养的猪可能是一种有价值的研究食管癌变机理的自然动物模型。

食管和贲门癌原发病灶和淋巴结转移灶p53蛋白聚集变化的相关性研究

目的：通过对食管和贲门癌原发病灶和淋巴结转移病灶肿瘤抑制基因ｐ５３变化规律的研究，加深对食管和贲门癌转移发生的分子学基础的了解。方法：采用组织病理学和免疫组织化学（ＡＢＣ）方法，对３１例手术切除的食管和贲门癌原发病灶和转移病灶肿瘤抑制基因ｐ５３蛋白聚集进行比较研究。结果：３１例手术标本中，病理检查发现２４例食管鳞状细胞癌，７例为贲门腺癌。研究表明：２４例食管原发和转移鳞癌中，１１例原发和转移病灶中均出现ｐ５３蛋白聚集的变化，原发和转移病灶的一致性变化发生率为６１％（１１／１８）；在６例原发病灶ｐ５３免疫组化阴性患者中，其淋巴结转移病灶也同时出现免疫阴性反应。在７例胃贲门腺癌中，３例原发和转移病灶同时出现ｐ５３免疫阳性表达的一致率为５０％（３／６）；１例原发病灶ｐ５３免疫组化阴性患者，其淋巴结转移病灶也出现阴性反应。结论：肿瘤抑制基因ｐ５３在食管和贲门癌癌变和转移中起一定的作用。可能是食管和贲门癌侵袭与转移过程中值得重视的生物学指标之一。

食管和贲门癌前病变癌基因c－erbB_2、c－myc和cyclin D_1的表达研究

为了解食管和贲门癌变的分子生物学发生基础，采用免疫组化技术测定人食管和贲门正常上皮和癌前病变组织的癌基因蛋白ｃ－ｅｒｂＢ２，ｃ－ｍｙｃ和ｃｙｃｌｉｎＤ１的表达状况。研究对象来自食管癌高发区河南辉县。结果：在食管，未观察到ｃ－ｅｒｂＢ２的阳性表达（０／５４）；而ｃ－ｍｙｃ和ｃｙｃｌｉｎＤ１的阳性表达率分别为２５％（６／２４）和８２％（９４／１１５）。贲门上皮ｃ－ｅｒｂＢ２和ｃ－ｍｙｃ的阳性表达率分别为７３％（１６／２６）和７８％（３１／４０），均明显高于食管组织的表达。贲门组织ｃｙｃｌｉｎＤ１的阳性表达率为７８％（３１／４０），但是，随着贲门上皮病变加重，ｃｙｃｌｉｎＤ１的阳性表达率呈现下降趋势。提示同一地区食管和贲门癌前病变发生存在不同的分子学改变；食管和贲门癌变的不同阶段可能由多种癌基因参与作用；ｃ－ｅｒｂＢ２可能是贲门癌变的重要分子学变化。

人食管和贲门癌前病变的细胞增生生物学指标研究

采用增生细胞核抗原（ＰＣＮＡ），Ｋｉ－６７和溴脱氧尿啶嘧核苷（ＢｕｄＲ）标记的Ｓ期细胞的三种生物学指标，测定人食管和贲门粘膜活检上皮正常和不同程度的癌前病变细胞增生状况。食管粘膜上皮从正常到基底细胞增生，上述指标变化幅度不大，但从基底细胞增生到间变时，ＰＣＮＡ和Ｋｉ－６７阳性细胞数明显升高。贲门随上皮病变的加重，ＰＣＮＡ和Ｋｉ－６７阳性细胞逐渐升高。在同一类病变，ＰＣＮＡ和Ｋｉ－６７阳性细胞数几乎是ＢｕｄＲ的２倍。结果提示三种指标均与食管和贲门上皮病变进展程度有关，能比较客观地评价其细胞增生动力学状况。ＰＣＮＡ可能是一种简便易行，特别适宜研究大范围人群细胞增生状况的生物学指标。

食管癌高发区人群食管癌前病变癌基因EGFR、C－Jun和Ras蛋白表达的研究

为进一步了解食管癌前病变发生的分子基础，采用免疫组织化学技术测定人食管正常上皮和癌前病变组织中表皮生长因子受体ＥＧＦＲ，Ｃ－Ｊｕｎ和Ｒａｓ三种癌基因蛋白的表达状况。结果：在５４例食管粘膜活检组织中，共发现１２例正常上皮，３４例基底细胞增生和８例间变。在２９例ＥＧＦＲ测定中，正常组织未见免疫阳性反应，而基底细胞增生和间变分别出现３９％和８０％的免疫阳性反应率。在所有活检正常和癌前病变组织中未观察到Ｃ－Ｊｕｎ和Ｒａｓ蛋白表达。提示ＥＧＦＲ在食管癌前病变发生和发展中可能起一定的作用。

人食管和贲门癌前病变和癌组织P40上皮特异性蛋白表达的研究

利用鼠单克隆抗体７Ｅ（１２）Ｈ（１２），对人食管和贲门正常粘膜上皮，癌前病变和癌组织的Ｐ４０上皮特异性蛋白表达进行比较研究。结果表明，食管和贲门上皮Ｐ４０蛋白的表达和分布明显不同。贲门柱状上皮Ｐ４０蛋白的免疫反应强度和发生率明显高于鳞状上皮（相差８倍）。食管固有腺上皮细胞也出现较强的Ｐ４０蛋白免疫反应性。在贲门组织中，Ｐ４０蛋白免疫反应６２％发生在细胞浆；２１％发生在细胞核；１７％同时发生在胞浆和胞核。而在食管，其反应全部在胞浆。随着病变的加重，食管和贲门Ｐ４０蛋白的表达均出现增高的趋势。

人贲门癌WAF－1基因和P53肿瘤抑制基因表达的初步研究

采用免疫组织化学方法，初步观察３４例手术切除后的贲门癌组织ＷＡＦ－１基因蛋白（Ｐ２１）的表达状况并与Ｐ５３肿瘤抑制基因蛋白的免疫组化结果进行比较。贲门癌组织Ｐ２１免疫组化阳性率为７４％；癌细胞Ｐ２１免疫反应强度与正常细胞相似。

食管鳞状细胞癌组织 Ras 蛋白表达的初步研究

为进一步了解食管癌变发生的分子学基础，采用免疫组织化学方法测定人食管鳞癌组织中癌基因Ｒａｓ蛋白的表达。结果：在３６例食管癌手术切除标本中，９例出现免疫阳性反应，免疫阳性反应率为２５％；同时还发现同一食管癌组织中食管粘膜固有腺体上皮也出现免疫阳性反应，其表达强度高于鳞状上皮。提示：Ｒａｓ基因表达是食管癌变晚期阶段的一个分子学改变。

食管粘膜活检对食管癌前病变诊断的重复性研究

为评价食管粘膜上皮活检取样对食管癌前病变检出的重复性的影响，对来自河南食管癌高发区２８例患者行食管内镜检查和中、下段粘膜活检组织学病理检查，１０ｄ后对同一人群作重复检查。组织病理学分析显示，第二次粘膜活检组织中，食管中段２４％的患者病变减轻，２８％的患者病变加重，４８％的患者病变维持不变。食管下段粘膜活检中，４８％的患者病变减轻，１６％的患者病变加重，３２％的患者病变维持不变。结果提示，粘膜活检取样误差是造成以往报道人群癌前病变随访中出现病变“逆转”或“进展”的一个因素。肿瘤抑制基因Ｐ５３蛋白聚集的重复性检出率较高，可能是食管癌变过程中的有效生物学观察指标。

大鼠食管上皮细胞色素P450 2E1和谷胱甘肽S转移酶的初步研究

细胞色素Ｐ４５０和谷胱甘肽Ｓ转移酶是二组参于抗肿瘤药物和致癌剂代谢的重要酶系。利用免疫组织化学技术，对甲基苄基亚硝胺（ＮＭＢｚＡ）诱发的大鼠食管肿瘤动物模型中Ｐ４５０２Ｅ１和ＧＳＴα，ＧＳＴπ和ＧＳＴμ在食管上皮细胞中的分布和定位进行初步研究。结果显示大鼠食管上皮细胞出现不同程度的Ｐ４５０２Ｅ１和ＧＳＴ，特别是ＧＳＴμ的表达。后者与细胞的增生状况有明显的关系。在非上皮性组织中未见到Ｐ４５０２Ｅ１和ＧＳＴ的表达。证实了大鼠食管上皮Ｐ４５０２Ｅ１和ＧＳＴ表达的存在及其与细胞形态学变化的关系，有助于加深对食管癌变中的Ｐ４５０和ＧＳＴ酶功能变化作用的了解。

P53基因蛋白表达研究中的抗体选择与存在问题

采用免疫过氧化氢酶法，分析９种Ｐ５３蛋白不同抗体的特性以及Ｐ５３蛋白水平分析中存在的技术问题，结果提示不同的固定方法和抗体可影响Ｐ５３蛋白的测定，目前尚不能用免疫组化的方法区分出野生型和突变型Ｐ５３蛋白。

食管癌高发区人群多灶性食管癌前病变的P53肿瘤抑制基因变化研究

采用聚合酶链反应－单链构型多态分析－ＤＮＡ序列测定（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－ＤＮＡ）和免疫组化技术，对食管癌高发区河南辉县居民食管上皮多灶性癌前病变的Ｐ５３肿瘤抑制基因突变和Ｐ５３蛋白聚集的变化进行初步研究。结果：组织学发现在５５例非癌患者中２例出现多灶性间变，２６例多灶性基底细胞增生。免疫组化发现多灶性癌前病变的Ｐ５３蛋白聚集的一致性发生率为９３％；Ｐ５３基因突变发生率为３１％。其中一例中、下段病变均发生Ｐ５３基因突变，但突变部位不同（中段发生在１６１密码子，下段在１５９密码子）。所有观察到的突变均发生在第５外显子。结果提示：Ｐ５３蛋白异常和基因改变可发生在食管癌变的早期阶段，多灶性病变可能起源于不同克隆细胞和肿瘤细胞的多中心性发生。

中国和美国人食管上皮肿瘤抑制基因P53变化与细胞增生关系的比较研究

为比较我国食管癌高发区与食管癌发生率低的美国人食管上皮Ｐ５３蛋白水平的变化及其与细胞增生的关系，采用免疫过氧化氢酶法，测定Ｐ５３蛋白和细胞增生核抗原（ＰＣＮＡ）的变化。结果表明：中国和美国人食管上皮细胞核均出现不同程度的Ｐ５３蛋白聚集和ＰＣＮＡ的表达。中国人和美国人食管正常上皮和病变组织ＰＣＮＡ免疫反应类型相似，Ｐ５３免疫阳性细胞数从基底细胞增生到间变均出现升高；但是，与中国人相比，美国人食管上皮不同病变阶段Ｐ５３免疫阳性细胞数和Ｐ５３蛋白聚集的发生率非常低。这一比较研究将有助于了解Ｐ５３变化在食管癌变中的作用。

中国与美国人食管和贲门粘膜上皮中谷胱甘肽S转移酶表达的对比研究

利用免疫过氧化氢酶法，对中国人和美国人食管上皮和中国人贲门上皮谷胱甘肽Ｓ转移酶ＧＳＴ三种亚型的表达进行测定。中国人食管上皮ＧＳＴα、ＧＳＴπ和ＧＳＴμ的阳性表达率分别为５３％、８０％和２０％；贲门上皮的表达率分别为９２％、７７％和３１％。与中国人相比，美国人食管上皮三种ＧＳＴ亚型表达率均低于中国人。在贲门上皮，从正常到慢性浅表性胃炎和慢性萎缩性胃炎，ＧＳＴπ和ＧＳＴμ的阳性表达率也逐渐升高；在中国人食管，从正常上皮到基底细胞增生到间变，ＧＳＴπ和ＧＳＴα的阳性表达率逐渐升高。这些结果将有助于加深对ＧＳＴ在食管和贲门上皮中的表达及其作用的了解。

林州市人民医院9a间食管、贲门癌3933例分析

为进一步了解林州市人群贲门癌和食管癌的发病构成状况及其特征，分析１９８７～１９９５年９ａ间林州市（原林县）人民医院食管和贲门癌收治记录。结果显示：９ａ间，该市医院每年平均行食管和贲门癌手术４３７例，其中，来自林县当地居民１９８例，占４５％。食管癌１１８例，占６０％；贲门癌８０例，占４０％。提示：这一地区贲门癌占有较高的比例。

贲门癌原发性病灶和淋巴结转移病灶 P53 和 nm23 的变化

应用免疫组织化学方法对河南省食管癌高发区林州市居民贲门癌原发病灶和淋巴结转移病灶肿瘤抑制基因Ｐ５３和肿瘤转移抑制基因ｎｍ２３的变化进行研究。结果：在３７例贲门腺癌中，１８例原发病灶和转移病灶配对组织中一致性Ｐ５３免疫阳性反应的发生率为６７％（１２／１８）；定量分析表明，原发病灶中Ｐ５３蛋白聚集阳性细胞明显高于淋巴结转移病灶中Ｐ５３的表达；Ｐ５３免疫阳性的贲门腺癌淋巴结转移率（７８％）明显高于Ｐ５３免疫阴性的贲门腺癌淋巴结转移率（２９％，Ｐ＜０．０５）。３７例贲门癌组织中，ｎｍ２３免疫阴性者为２４例，占６５％，ｎｍ２３阴性者淋巴结转移率（７５％）明显高于ｎｍ２３表达阳性者淋巴结转移率（３１％，Ｐ＜０．０５）。在１０例贲门癌淋巴结转移组织中，淋巴结周边部转移病灶Ｐ５３阳性细胞数明显高于中心部。提示：Ｐ５３和ｎｍ２３在贲门癌转移过程中起一定作用。

食管癌前病变和癌组织中增生细胞核抗原与细胞凋谢变化的关系

为探讨细胞凋谢与细胞增生在食管癌变过程中变化的关系，计数１９４例食管粘膜活检组织切片单位面积（ｍｍ２）中增生细胞核抗原（ＰＣＮＡ）免疫阳性细胞数和凋谢细胞数，对其进行定量分析。结果：在食管正常上皮，ＰＣＮＡ免疫阳性细胞数量低，从食管正常上皮到基底细胞增生，ＰＣＮＡ免疫阳性细胞数稍有升高，到间变时明显升高，到癌时升高最显著，为正常上皮的近７倍（Ｐ＜０．０１）。在各级病变组织中，凋谢细胞数较低，在正常上皮中更低。随病变加重（基底细胞增生→间变→癌），单位面积凋谢细胞数均逐渐升高（Ｐ＜０．０１）。细胞凋谢指数与细胞增生指标ＰＣＮＡ呈显著正相关（ｒ＝０．３６３，Ｐ＜０．０１）。提示：细胞凋谢不仅可以反映食管癌变过程中上皮细胞的死亡状况，而且能反映细胞增生状况。

食管癌和癌旁组织 P16 和 P53 的变化

采用免疫组织化学方法分析食管癌组织和癌旁组织中肿瘤抑制基因Ｐ１６的变化，并与肿瘤抑制基因Ｐ５３蛋白聚集的变化进行比较研究。结果：２２例食管鳞癌组织中，３例出现Ｐ１６蛋白的免疫阳性反应（１４％），此３例均为高分化鳞癌。在３例Ｐ１６免疫阳性组织中，２例同时出现Ｐ５３蛋白聚集的改变。２２例手术切除癌标本中的各级癌前病变均未出现Ｐ１６阳性反应。癌组织和癌旁上皮各级病变均出现较高的Ｐ５３蛋白改变。提示：肿瘤抑制基因Ｐ１６的变化可能主要发生在食管癌变的终末阶段，Ｐ１６与Ｐ５３有较高的一致性改变。

食管癌及癌前病变组织中WAF-1和P53的变化

采用卵白素生物素过氧化物酶复合物（ＡＢＣ）法，检测食管癌高发区居民食管癌变过程中肿瘤抑制基因ＷＡＦ１和Ｐ５３的变化。结果：在食管正常上皮和各级不同病变组织中，均可见ＷＡＦ１和Ｐ５３在细胞核内的表达，随病变进展到间变和鳞癌，ＷＡＦ１免疫阳性率逐渐降低。从正常到基底细胞增生，ＷＡＦ１免疫阳性细胞数轻度升高，但到间变和鳞癌阶段，ＷＡＦ１免疫阳性细胞数未见进一步升高。在正常上皮和基底细胞增生阶段，ＷＡＦ１免疫阳性细胞数少于Ｐ５３免疫阳性细胞，在间变和癌阶段更低。ＷＡＦ１免疫阳性细胞主要位于基底细胞第３、４层，比Ｐ５３免疫阳性细胞高２～４个细胞层。提示：间变时低水平的ＷＡＦ１可能与Ｐ５３功能丧失有关。在间变和癌时ＷＡＦ１低表达的机理尚需进一步研究。