肝硬化患者发生的肝细胞癌差异表达基因文库的构建及初步筛选

目的 与肝硬化对比 ,研究肝细胞癌中差异表达的基因 ,构建在肝硬化基础上发生癌变的肝细胞之差异表达的cDNA消减文库。方法 采用抑制性消减杂交获得差异表达基因片段 ,T/A克隆 ,蓝白斑筛选 ,在自动测序仪上进行基因测序 ,做同源性分析。结果 经过巢式PCR扩增后 ,得到差异表达的cDNA ,琼脂糖凝胶电泳显示为一弥散条带 ;3 5个差异表达的克隆被分离 ,基因表达序列标签长度在 112～ 75 5bp之间。序列分析揭示 2 8个克隆是来自以前描述过的基因 ,而另外 7个在GenBank/EMBL/DDBJ数据库没有匹配序列 ,可能代表新基因。结论 实验结果表明从肝硬化发展至肝细胞癌涉及到多个基因的差异表达 ;本研究在成功地构建出消减基因文库的同时 ,也证明了抑制性消减杂交技术对寻找差异表达基因是十分适用的。