FFJ-5下调PKM2抑制MCF7生长及逆转MCF7/DOX细胞耐药性的研究

目的探讨FFJ-5对人乳腺癌细胞MCF7及其耐药细胞MCF7/DOX的作用及其机制。方法采用MTT法检测FFJ-5对MCF7及MCF7/DOX细胞的增殖抑制作用及其对柔红霉素(doxorubicin,DOX)在耐药细胞MCF7/DOX中化疗敏感性的影响;Western blot检测FFJ-5对EGFR、p-EGFR、Akt、p-Akt、PKM2、caspase-3、cleaved caspase-3、PARP、cleaved PARP及P-gp蛋白表达的影响;DNA ladder分析检测FFJ-5对细胞基因组DNA的影响;RT-PCR检测低剂量FFJ-5对多药耐药基因MDR1 mRNA水平的影响。结果 FFJ-5抑制了MCF7细胞生长,降低了MCF7细胞中EGFR、Akt的表达及活性,下调了PKM2水平;FFJ-5可激活caspase-3、促使基因组DNA断裂;同时FFJ-5也能抑制耐药细胞MCF7/DOX生长,并增强DOX在MCF7/DOX细胞中的活性,同时降低了MCF7/DOX细胞中EGFR、p-EGFR及PKM2水平,但对MDR1 mRNA水平无影响。结论 FFJ-5可通过抑制EGFRAkt-PKM2通路及激活线粒体凋亡相关因子caspase-3来抑制MCF7细胞生长,并诱导其凋亡,并可逆转MCF7/DOX的耐药性。

药根碱诱导白血病K562细胞凋亡的研究

目的研究药根碱对白血病K562细胞的生长抑制及凋亡作用,探讨药根碱诱导K562细胞凋亡的可能途径。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测药根碱对K562细胞的生长抑制作用;吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)双染法、碘化丙啶(PI)染色法观察药根碱对K562细胞凋亡的诱导作用;利用活细胞高内涵成像系统检测细胞内线粒体膜电位以及氧自由基的变化。结果药根碱可明显抑制K562细胞的生长(IC50=90μmol.L-1)。AO/EB染色可明显看到凋亡细胞和死亡细胞。PI染色显示,药根碱使K562细胞周期阻滞在G0/G1期。活细胞高内涵成像系统检测结果显示,37、75、150μmol.L-1药根碱作用后,细胞内活性氧荧光强度由1 305.1±15.3上升为26 243.6±165.3、30 106.7±153.2、34 682.6±174.1,线粒体膜电位由1 025.3±20.1下降为484.6±10.2、202.9±6.3、153.1±5.3。结论药根碱能明显抑制白血病K562细胞生长,促进K562细胞凋亡,且其可通过增加细胞内活性氧、降低线粒体膜电位这一线粒体信号传导通路来诱导K562细胞凋亡。

小檗碱增强K562／DOX细胞对多柔比星敏感性的研究

目的探讨小檗碱增强耐药K562/DOX细胞对化疗药多柔比星的敏感性的作用。方法四甲基偶氮唑蓝法检测小檗碱的细胞毒性及其对多柔比星抗肿瘤活性的增强作用;高内涵活细胞成像系统检测无毒剂量小檗碱作用后,多柔比星在K562/DOX细胞内的蓄积量;PI/Hoechst33342双染法检测小檗碱对多柔比星诱导的K562/DOX细胞凋亡的影响;罗丹明123蓄积实验检测小檗碱对P-糖蛋白外排功能的影响。结果 1μmol·L-1为小檗碱的无毒剂量,在此无毒剂量下,小檗碱使多柔比星对K562/DOX细胞的IC50降低了1.5倍;1μmol·L-1小檗碱可使多柔比星在K562/DOX细胞内的蓄积量增加,增强多柔比星诱导的K562/DOX细胞凋亡,增加K562/DOX细胞内罗丹明123的蓄积量,从而抑制P-糖蛋白的外排功能。结论小檗碱可通过抑制K562/DOX细胞膜上P-糖蛋白的外排功能,增加K562/DOX细胞内多柔比星浓度,促进多柔比星对耐药细胞的诱导凋亡作用,逆转K562/DOX细胞的多药耐药性。

STAT3小分子干扰RNA增强多柔比星的抗肿瘤活性

探讨靶向STAT3的小分子干扰RNA(STAT3-siRNA)对多柔比星(doxorubicin,DOX)的抗肿瘤活性的影响。通过RT-PCR及Western blotting检测STAT3在HepG2、HeLa和K562/DOX细胞中的表达水平以及小分子干扰RNA对STAT3表达的影响。采用MTT法和台盼蓝染色法,检测STAT3-siRNA对肿瘤细胞的抑制作用及其对DOX抗肿瘤活性的影响。应用高内涵活细胞成像系统检测STAT3-siRNA对细胞内DOX蓄积量以及细胞凋亡的影响。结果显示,STAT3在HepG2、HeLa和K562/DOX细胞中均有高表达,STAT3-siRNA明显下调STAT3mRNA及STAT3蛋白的表达。STAT3-siRNA可抑制HepG2、HeLa和K562/DOX细胞的生长,STAT3-siRNA与DOX联合应用后对3种细胞的IC50分别降低了3.13倍、5.22倍和1.74倍(与DOX单独应用比较)。STAT3-siRNA使HepG2、HeLa及K562/DOX细胞内DOX的蓄积量分别增加16.8%、12.87%和25.67%,同时明显促进了DOX诱导的细胞凋亡。结果表明,STAT3-siRNA可明显增强DOX的抗肿瘤活性。

薯蓣次苷A通过下调STAT3及糖代谢相关基因表达抑制MCF7细胞生长

肿瘤的发生和发展是一个复杂的过程,肿瘤细胞的失控性生长是肿瘤的重要生物学特征,而肿瘤细胞的快速生长则依赖于葡萄糖代谢提供能量ATP及代谢中间产物用于肿瘤细胞生物大分子的合成。正常组织细胞在有氧时通过糖的有氧分解获取能量,只有在缺氧时才进行无氧糖酵解。但肿瘤细胞即使在供氧充足的条件下,也主要依赖糖酵解进行代谢,肿瘤细胞的这种特性被称为Warburg效应。

内源性胱硫脒-γ-裂解酶/硫化氢调控HepG2细胞凋亡(英文)

探讨内源性胱硫脒-γ-裂解酶/硫化氢(CSE/H2S)对人肝癌HepG2细胞凋亡的调控作用。采用MTT法和台盼蓝染色法检测细胞增殖;亚甲基蓝法检测细胞内源性H2S的产生;PI/Hoechst双染法检测细胞凋亡;荧光探针法检测细胞内超氧阴离子及ROS水平;OxiSelect Total Glutathione Assay试剂盒检测细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)水平;Western blotting检测activated-caspase 3、p-AKT和Nrf2表达。结果显示,CSE抑制剂DL-炔丙基甘氨酸(PAG)和CSE siRNA可明显降低细胞内H2S水平,可呈剂量和时间依赖性地抑制HepG2细胞增殖。PAG和CSE siRNA均可明显增加HepG2细胞凋亡率以及细胞内超氧阴离子和ROS的水平,降低细胞内GSH水平。CSE siRNA引起的ROS水平升高及GSH水平降低可被重组质粒pcDNA 3.1/myc-His()-CSE恢复。CSE siRNA可促进caspase 3的活化,但不会影响p-AKT及Nrf2蛋白的表达。结果表明,内源性CSE/H2S系统可通过氧化应激调控HepG2细胞的增殖及凋亡。