Aptamer-siRNA核酸复合物对人CML K562细胞增殖与凋亡诱导作用研究

目的:探讨aptamer-siRNA核酸复合物对人慢性粒细胞K562细胞系的凋亡诱导作用。方法:以SELEX技术筛选人融合蛋白BCR-ABL核酸适体,合成aptmer-siRNA核酸复合物,在荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、JEM-4000EX透射电镜下观察K562细胞形态结构改变,MTT法检测aptamer-siRNA核酸复合物对K562细胞的生长抑制作用,琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡DNA断裂情况。结果:在荧光显微镜和电子显微镜下,经200μmol/L核酸复合物作用的K562细胞形态和结构发生明显改变;Aptamer-siRNA核酸复合物对K562细胞生长具有明显的抑制作用,与对照组相比,差异具有显著的统计学意义(P<0.05)。MTT实验结果显示,aptamer-siRNA核酸复合物对K562细胞的IC50值为150μmol/L,统计学分析证明,差异有显著的统计学意义(P<0.05)。经琼脂糖凝胶电泳显示,在aptamer-siRNA核酸复合物作用K562细胞中可见明显DNA凋亡梯带。结论:aptamer-siRNA核酸复合物可显著诱导人K562细胞的凋亡,为治疗人慢性髓系白血病提供参考。

T-钙黏蛋白基因启动子 CpG 岛甲基化与胃癌的关系

目的：通过检测胃癌组织中 T-钙黏蛋白（T-cadherin）基因启动子的 CpG 岛甲基化状态及其表达情况，并分析其甲基化改变与临床病理特征的关系。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测28例胃癌组织及正常胃黏膜组织中 T-cadherin 基因启动子 CpG 岛甲基化状态，并采用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测其 mRNA 的表达水平。分析 T-cadherin 基因启动子 CpG 岛异常甲基化与其 mRNA 表达水平的关系。结果胃癌组织中 T-cadherin 基因启动子CpG 岛甲基化率为78．6％（22／28），明显高于正常胃黏膜组织（17．9％，5／28）。T-cadherin 基因mRNA 在胃癌中的表达水平明显低于正常胃黏膜组织，差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论胃癌中存在较高比例的 T-cadherin 基因启动子 CpG 岛甲基化，并与肿瘤的淋巴结转移、血管生成及TNM分期相关（P ＜0．05），提示 T-cadherin 基因在胃癌的发生、发展中起着重要作用。

抑瘤素M对人胃癌细胞迁移及COX-2表达的影响

研究抑瘤素M(oncostatin M,OSM)对人胃癌细胞株MKN-28体外侵袭能力和环氧合酶-2(COX-2)表达的影响,探讨其在胃癌浸润转移中的作用及可能机制。运用Transwell小室法检测OSM对胃癌细胞迁移的影响;将靶向COX-2基因的小分子干扰RNA(siRNA)瞬时转染胃癌细胞,采用蛋白印迹法(western blot)和MTT法分析转染后胃癌细胞COX-2蛋白表达情况和细胞生长情况;荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和western blot分别检测25 ng/ml的OSM对胃癌细胞COX-2 mRNA和蛋白表达的影响。研究发现,25 ng/ml OSM能促进胃癌细胞的迁移(P<0.05)。用针对COX-2的siRNA转染胃癌细胞后,COX-2蛋白表达降低,细胞生长变慢。经25 ng/ml OSM作用的胃癌细胞COX-2 mRNA及蛋白的表达升高(P<0.05)。结果提示,一定剂量的OSM可能通过诱导COX-2的表达,促进胃癌细胞侵袭和转移。