免疫沉淀分析抗人DR5单克隆抗体激活白血病细胞caspase8/10

目的:分析抗人死亡受体5(death receptor 5,DR5)单克隆抗体mDRA-6对白血病细胞系Jurkat及U937细胞caspase8、caspase10激活变化。方法:采用Western blot方法检测mDRA-6对Jurkat及U937细胞caspase-8、caspase-10、caspase-3的激活改变;免疫沉淀方法分析mDRA-6诱导的Jurkat及U937细胞DISC的caspase-8、caspase-10分子;定量-PCR检测Jurkat、U937细胞caspase-8、caspase-10 mRNA表达。MTT法检测caspase-8、caspase-10和caspase-3抑制剂对mDRA-6抑制Jurkat及U937细胞生长增殖的影响;AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术检测caspase-8、caspase-10抑制剂对mDRA-6诱导细胞凋亡作用的影响;结果:Western blot检测显示,mDRA-6作用Jurkat细胞,导致细胞caspase-8分子激活降解,但对caspase-10无激活改变;mDRA-6作用U937细胞,激活细胞caspase-10分子,但对caspase-8无激活表现;mDRA-6作用Jurkat和U937细胞,caspase-3及PARP均表现出激活降解。免疫沉淀检测发现,mDRA-6作用白血病细胞4h,Jurkat细胞DISC的caspase-8条带明显,caspase-10条带无明显显示;相反,U937细胞DISC的caspase-10条带出现,而caspase-8无明显条带显示。定量-PCR检测发现,Jurkat和U937细胞caspase-8 mRNA表达无明显差异,但U937细胞caspase-10 mRNA表达水平明显高于Jurkat细胞(P<0.01)。预先使用caspase-8、caspase-10、caspase-3抑制剂孵育细胞1小时,mDRA-6所致的Jurkat细胞生长抑制率分别降低了72.94%(t=20.27,P<0.01)、8.09%(t=1.82,P>0.05)和31.20%(t=8.06,P<0.01);mDRA-6所致U937细胞生长抑制率分别降低了4.53%(t=0.90,P>0.05)、69.09%(t=17.25,P<0.01)和50.20%(t=13.06,P<0.01)。AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术检测发现,预先使用caspase-8、10抑制剂孵育细胞1小时,mDRA-6诱导的Jurkat细胞凋亡率分别降低了80.82%和8.34%;mDRA-6诱导的U937细胞凋亡率分别降低2.50%和48.47%。结论:mDRA-6激活不同起始caspase诱导细胞凋亡,激活caspase-8启动Jurkat细胞凋亡,激活caspase-10启动U937细胞凋亡;U937细胞caspase-10激活可能与细胞caspase-10mRNA高表达有关。

耐阿霉素人骨肉瘤细胞株的建立及其生物学特性

目的:诱导并建立耐阿霉素(Adriamycin,ADM)的人骨肉瘤细胞株,观察耐药细胞系(Saos-2/ADM1,Saos-2/ADM4)的生物学特性.方法:以ADM为诱导剂,采用逐步增加药物剂量冲击诱导方法,诱导人成骨肉瘤原代Saos-2细胞株,建立不同药物浓度耐药系(Saos-2/ADM1,Saos-2/ADM4);MTT法检测原代与耐药细胞株对ADM、顺铂(Cispla-tin,DDP)、甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)、异环磷酰胺(Ifos-famide,IFO)、表柔比星(Epirubicine,EPI)、比柔比星(Pirarubi-cin,THP)、紫杉醇(Paclitaxel,PTX)药物敏感性;光学显微镜、透射电镜观察细胞形态及超微结构变化;细胞生长曲线检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期比例.结果:经167d的诱导,建立了Saos-2/ADM1,Saos-2/ADM4细胞株,其对ADM的耐药指数(Resistant drug index,RI)分别为原代细胞株49.8和74.6倍;耐药细胞株对MTX,EPI,THP,PTX亦产生不同程度的交叉耐药,对DDP仍然敏感;光镜观察Saos-2/ADM1,Saos-2/ADM4细胞株细胞体积增大,多核现象较原代Saos-2细胞株明显增加;透射电镜显示Saos-2/ADM1,Saos-2/ADM4细胞株表面突起较原代Saos-2细胞株减少、且核仁增大增多;细胞生长曲线显示耐药细胞株增殖能力下降,S期细胞所占比例减少.结论:建立了耐ADM人骨肉细胞株Saos-2/ADM1,Saos-2/ADM4并观察了耐药细胞株的生物学特性.

交联抗人DR5单抗-YM366EC诱导Jurkat细胞凋亡机制研究

目的:探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单抗-YM366EC引起Jurkat细胞凋亡信号传导通路,阐明抗DR5抗体的抗肿瘤效应机制,为相关肿瘤治疗提供依据。方法:光镜下观察交联366EC作用下Jurkat细胞形态变化,并利用MTT法检测Jurkat细胞的增殖,利用FITC-AnnexinV及PI标记流式细胞仪检测交联YM366EC对Jurkat细胞凋亡率影响。进一步用Western blot法检测交联YM366EC作用于Jurkat细胞2、4、6、8、10、12小时时Bcl-2、Cyt-C、Bax、caspase3、caspase9的表达变化。结果:DR5抗体YM366EC单独应用无凋亡作用,但应用抗小鼠IgG交联366EC后可致Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成,并可直接诱导TRAIL敏感的Jurkat细胞凋亡改变。Western blot检测到随着抗体诱导时间的延长Jurkat细胞Bcl-2蛋白表达减少;Cyt-C、Bax、有活性的caspase3和caspase9蛋白的表达增加。结论:交联抗DR5抗体YM366EC对Jurkat细胞增殖有明显的抑制作用,诱导的Jurkat细胞凋亡的分子机制涉及到Cyt-C、Bax、caspase3、caspase9。

抗人DR5抗体mDRA-6细胞毒作用机制分析

目的:探讨鼠抗人DR5单克隆抗体(mAb)mDRA-6对Jurkat细胞的细胞毒作用及其机制。方法:以流式细胞术测定mAbmDRA-6对Jurkat细胞的细胞毒作用和细胞凋亡作用,以及caspase8、9的抑制剂对mAbmDRA-6诱导的Jurkat细胞凋亡的影响。在荧光显微镜下,观察mAbmDRA-6对Jurkat细胞形态的影响。以琼脂糖凝胶电泳检测Jurkat细胞中的DNA片段化。结果:mAbmDRA-6对Jurkat细胞具有显著的细胞毒作用,并呈剂量和时间依赖性。经mAbmDRA-6处理后,Jurkat细胞可出现典型的细胞凋亡的形态特征:细胞膜皱缩,出泡,染色质浓缩,形成凋亡小体等。经mAbmDRA-6处理后,Jurkat细胞膜表面高表达丝氨酸磷脂,并可导致Jurkat细胞中的DNA片段化。caspase8的抑制剂可明显抑制mAbmDRA-6诱导的Jurkat细胞凋亡,caspase9的抑制剂的影响很小。结论:mAbmDRA-6可通过死亡受体信号传导途径诱导Jurakt细胞凋亡,对Jurkat细胞产生细胞毒作用,其在以TRAIL/DR5系统进行的肿瘤治疗和探讨DR5功能结构域方面具有广阔的应用前景。

抗人DR5单抗与阿霉素联合对人肝癌细胞SMMC-7721协同杀伤效应

目的:探讨mDRA-6对肝癌细胞系SMMC-7721致凋亡作用,及阿霉素与mDRA-6联合协同杀伤效应与机制。方法:常规培养肝癌细胞SMMC-7721,流式细胞术检测细胞表面DR5的表达率。Hoechst 33258染色观察SMMC-7721细胞形态变化;MTT法检测细胞毒性作用;流式细胞术定量分析凋亡细胞率。结果:(1)mDRA-6能够诱导SMMC-7721细胞凋亡,在1.89μg/m l浓度下可杀伤36%的细胞,增加mDRA-6浓度,凋亡作用无明显增加;(2)SMMC-7721细胞对阿霉素敏感,存在浓度依赖性;(3)阿霉素与mDRA-6联合对SMMC-7721细胞具有协同杀伤作用,2μg/m l的mDRA-6与40 ng/m l的阿霉素联合杀伤60%SMMC-7721,Hoechst 33258染色和Annexin V/PI染色证实杀伤作用是通过细胞凋亡实现的。结论:mDRA-6能够诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡,阿霉素与mDRA-6联合具有协同作用。

Foxp3对肺癌细胞增殖及成瘤的影响

目的:研究转录因子Foxp3在肺癌细胞中的高表达对肺癌细胞增殖及成瘤的影响。方法:利用脂质体转染法建立稳定高表达Foxp3的NCIH-h Foxp3肺癌细胞株。MTT法观测NCIH-h Foxp3及对照细胞的增殖。ELISA法检测NCIHh Foxp3及对照细胞IL-8、IL-10的分泌。建立移植瘤小鼠模型,观察成瘤情况。结果:成功建立高表达Foxp3的NCIH-h Foxp3肺癌细胞株;与阴性对照相比,NCIH-h Foxp3细胞增殖减慢,但成瘤能力强。NCIH-h Foxp3细胞培养上清IL-8表达量减低,IL-10表达量升高。结论:高表达Foxp3的肺癌细胞可能通过表达细胞因子改变局部生长的微环境,逃逸免疫监视,而促进肿瘤细胞的成瘤和发展。

抗人DR5单克隆抗体对人肝癌细胞系HepG2的凋亡作用

探讨抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)对人肝癌细胞系HepG2致凋亡的作用。常规培养人肝癌细胞系HepG2,流式细胞术定量分析检测HepG2细胞表面DR5的表达。MTT法检测mDRA-6的细胞毒性作用;Annexin V-FITC/PI双色标记HepG2细胞,流式细胞术定量分析检测细胞凋亡率;在荧光显微镜下观察mDRA-6对HepG2细胞形态变化的影响。结果显示,HepG2细胞表面有DR5表达,其平均表达百分率为40%。MTT法检测显示在40 mg/L mDRA-6浓度下可杀伤42%的细胞;Hoechst33258染色证实杀伤作用是通过细胞凋亡实现的经流式细胞术检测显示,3 mg/L的mDRA-6作用HepG2细胞6 h导致24.61%的细胞发生凋亡;在荧光显微镜下可观察到mDRA-6诱导导致HepG2细胞呈现典型细胞凋亡的形态特征。上述结果表明,mDRA-6能够诱导人肝癌细胞系HepG2凋亡。

食管癌细胞表面DR5的表达分布与细胞铺展状态的关系

目的:探讨食管癌鳞癌EC9706细胞系细胞表面DR5的表达分布与细胞铺展状态的关系。方法:免疫细胞化学技术分析食管癌EC9706细胞的DR5表达分布;流式细胞术检测食管癌细胞表面DR5的表达及细胞的凋亡率。结果:DR5分布在食管癌EC9706细胞的细胞质和细胞膜表面,主要在细胞质,但在细胞核没有DR5分布,而且在悬浮的食管癌细胞表面DR5表达高于铺展者。悬浮的食管癌细胞对抗DR5功能性抗体诱导的细胞凋亡敏感性高于铺展者。结论:食管癌细胞表面DR5的表达与细胞铺展状态具有密切的关系,细胞铺展状态的变化直接影响细胞表面DR5的表达分布以及对抗DR5功能性抗体诱导的细胞凋亡敏感性。该研究结果对进一步探讨DR5表达分布的机制以及TRAIL和DR5的功能性抗体的抗肿瘤临床应用有一定的指导意义。

死亡受体5在肝癌细胞系及肝细胞系表面的表达

目的:利用抗死亡受体5(DeathReceptor5)单克隆抗体(mAb),检测DR5在肝癌细胞系的表达。方法:sDR5免疫BALB/c小鼠,小鼠脾细胞与SP2/0-Ag14细胞在50%PEG条件下融合,获得能够分泌抗DR5单克隆抗体的杂交瘤细胞株,利用杂交瘤细胞株分泌的抗DR5特异性单克隆抗体,采用流式细胞仪技术测定抗DR5mAb结合至细胞表面的量来分析死亡受体DR5在肝癌细胞系及肝细胞表面的表达情况。结果:不同细胞表面DR5的表达水平分别为:人肝癌SMMC7721细胞95%、人肝细胞癌HepG2细胞40%,人正常肝细胞HL-770220.3%。结论:抗DR5mAb能够特异性与DR5结合。DR5在人肝癌SMMC7721细胞高水平表达,人肝细胞癌HepG2细胞中度表达,人正常肝细胞HL-7702细胞低表达。该特异性mAb在研究TRAIL受体的生物功能上是一种有用的工具,对研究DR5在组织和细胞系表达十分有价值。

抗人DR5单克隆抗体诱导Jurkat和U937细胞凋亡的线粒体信号通路

目的:探讨抗人死亡受体5(Death receptor 5,DR5)单克隆抗体mDRA-6诱导Jurkat和U937细胞凋亡的线粒体信号通路。方法:MTT法检测mDRA-6对Jurkat和U937细胞生长增殖的影响,以及caspase-9、3抑制剂对mDRA-6抑制Jur-kat和U937细胞生长增殖的影响;琼脂糖凝胶电泳检测Jurkat和U937细胞DNA片段化降解;Western blot检测mDRA-6对Jurkat和U937细胞bax、bcl-2、bcl-xl、Cyt c及caspase-9、3的激活改变。结果:mDRA-6呈时间、浓度依赖性地抑制Jurkat和U937细胞的生长增殖,10 mg/L的mDRA-6作用6、8和10小时,Jurkat细胞增殖抑制率分别达59.38%、72.56%和76.28%,U937细胞增殖抑制率分别达38.67%、47.54%和50.59%。琼脂糖凝胶电泳显示,10 mg/L的mDRA-6作用6小时,Jurkat和U937细胞均呈现凋亡细胞特有的DNA梯形条带;Western blot检测结果发现,随着mDRA-6作用时间延长,Jurkat和U937细胞内促凋亡分子bax增多,抗凋亡分子bcl-2及bcl-xl减少,Cyt c释放明显增多,同时caspase-9、caspase-3也显示明显的激活表现。预先使用caspase-9抑制剂孵育细胞1小时,mDRA-6所致Jurkat和U937细胞生长抑制率分别降低了24.36%(t=5.44,P﹤0.01)和20.82%(t=4.29,P﹤0.01),mDRA-6所致Jurkat和U937细胞凋亡率分别降低了32.89%和23.97%。结论:线粒体信号通路激活是抗人死亡受体5(Death receptor 5,DR5)单克隆抗体mDRA-6诱导Jurkat和U937细胞凋亡的途径之一。

mDRA-6与尼美舒利对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞的协同杀伤效应

背景与目的:mDRA-6为本实验室制备的具有肿瘤细胞杀伤作用的抗人死亡受体5(death receptor5,DR5)的单克隆抗体,尼美舒利作为特异性环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂,近年来发现其对某些肿瘤细胞系的细胞具有促凋亡作用,本研究探讨mDRA-6与尼美舒利对肝癌细胞系SMMC-7721的杀伤作用,及二者有无协同效应。方法:流式细胞术检测细胞表面DR5的表达率;分别用一定浓度的mDRA-6、尼美舒利、mDRA-6联合200μmol/L尼美舒利处理SMMC-7721细胞,MTT法检测细胞毒性作用,Hoechst33258染色观察SMMC-7721细胞核形态变化,流式细胞术定量分析凋亡细胞率。结果:SMMC-7721细胞表面DR5的表达率为95.0%,mDRA-6能够诱导SMMC-7721细胞凋亡,存在浓度依赖性(r=0.984,P=0.002),25ng/mL作用12h可杀伤10.5%的细胞,1600ng/mL作用12h可杀伤35.0%的细胞。尼美舒利能够诱导SMMC-7721细胞凋亡,200μmol/L作用12h可使5.0%的细胞凋亡,800μmol/L作用12h可杀伤34.0%的细胞,存在浓度依赖性(r=0.929,P=0.002)。尼美舒利与mDRA-6联合对SMMC-7721细胞具有协同杀伤作用(q=1.23),200μmol/L的尼美舒利协同25ng/mL与1600ng/mL的mDRA-6作用12h可分别杀伤31.2%与91.1%的SMMC-7721细胞,Hoechst33258染色和Annexin V/PI染色证实杀伤作用是通过诱导细胞凋亡实现的。结论:mDRA-6与尼美舒利均有杀伤SMMC-7721细胞的作用,二者具有协同作用,该作用是通过诱导凋亡实现的。

食管鳞癌恶性表型相关蛋白的蛋白质组学研究

目的:利用蛋白质组学技术探讨与人食管鳞癌细胞(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)恶性表型转化相关的差异表达的蛋白质谱。方法:采用二维双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionisation time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)法鉴定人食管上皮永生化细胞株NECA-E6E7-hTERT和ESCC细胞株EC1、EC18、EC109差异表达的蛋白质分子,采用Western印迹法和免疫细胞化学法验证annexinA2在人食管上皮永生化细胞和ESCC细胞中的差异表达,实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)分析annexin A2 mRNA的表达水平。结果:鉴定出5倍以上差异表达的蛋白质分子15个,其中3个蛋白质在ESCC细胞中表达下调,12个蛋白质表达上调;Western印迹法和免疫细胞化学法验证了ESCC细胞中annexin A2蛋白的表达低于人食管上皮永生化细胞;而annexin A2 mRNA表达与其蛋白表达模式不一致。结论:本研究鉴定出的差异表达蛋白质谱为建立食管癌高发区高危人群筛查和早期诊断的分子指标和生物预防提供了重要线索。annexin A2翻译后调控可能是导致ESCC中annexin A2蛋白表达下调的主要原因。

去黏附化增强抗DR5抗体介导食管癌细胞凋亡及其作用机制

目的:探讨去黏附化对抗死亡受体5(DR5)抗体诱导的食管癌鳞癌EC9706细胞系凋亡的影响及作用机制。方法:用EDTA消化对蓝菌素A预处理或未处理的贴壁生长的食管癌细胞,制备悬浮细胞;利用流式细胞术检测食管癌细胞表面DR5表达及人抗DR5功能抗体诱导的细胞凋亡;利用免疫荧光技术观察食管癌EC9706细胞DR5表达分布。结果:悬浮食管癌细胞对抗DR5的功能性抗体诱导的细胞凋亡的敏感性明显高于铺展者;未经蓝菌素A预处理制备的悬浮食管癌细胞的表面DR5表达明显高于经蓝菌素A处理制备的悬浮者。在铺展的食管癌EC9706细胞,DR5分布于细胞质和细胞膜表面,主要在细胞质,在细胞核没有DR5分布,但在悬浮的食管癌细胞表面DR5表达明显增强。结论:去黏附化增强食管癌细胞对抗DR5功能性抗体诱导细胞凋亡的敏感性,该作用是通过去黏附化增强DR5向细胞表面转运实现的,DR5的膜转运与高尔基体有关。该研究结果对进一步探讨DR5表达分布的机制以及TRAIL和DR5的功能性抗体的抗肿瘤临床应用有一定的指导意义。

抗人DR5单克隆抗体对白血病U937细胞凋亡的作用

目的:研究鼠抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)对白血病细胞U937的凋亡诱导作用。方法:光镜下观察mDRA-6作用后U937细胞的形态变化;流式细胞术检测U937细胞表面DR5表达率;MTT法检测mDRA-6对U937细胞生长的影响;An-nexinV-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳检测U937细胞DNA的片段化降解;JC-1单染流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位改变。结果:mDRA-6作用U937细胞后呈现典型的细胞凋亡特征;MTT法检测显示mDRA-6作用U937细胞24小时死亡率为61·09%,并呈时间、浓度依赖性;流式细胞仪检测显示10mg/L的mDRA-6作用4小时,U937细胞凋亡率为79·12%;琼脂糖凝胶电泳显示DNA呈现明显梯状带型;mDRA-6作用U937细胞后线粒体膜电位明显下降。结论:mDRA-6能够诱导白血病U937细胞凋亡,是具有诱导细胞凋亡活性的功能性抗体。

抗人DR5抗体mDRA-6诱导EC109细胞自噬和凋亡

目的：探讨鼠抗人D1L5单克隆抗体（mAb）mDRA-6对ECl09细胞自噬和凋亡诱导作用。方法：MTY法检测mDRA-6细胞毒性；MDC染色和Hoechst33258染色，观察mDRA-6诱导细胞自噬、凋亡形态学变化；流式细胞术定量分析mDRA-6诱导细胞自噬率和凋亡率。结果：mDRA-6具有细胞毒性，0．024～25mg／LmDRA-6作用细胞呈时间剂量依赖性．各组间差异具有统计学意义（P〈0．01），10h的IC50值为0．78mg／L；经mDRA-6处理ECl09细胞出现核固缩、染色质边缘化和形成凋亡小体等；同时细胞浆中出现自噬体；流式细胞术测定结果显示，2．0mg／LmDRA-6作用细胞10h，细胞自噬率和凋亡率分别为19．44％和54．88％。结论：mDRA-6可引起ECl09细胞自噬和凋亡；mDRA-6通过诱导ECl09细胞自噬和凋亡抑制细胞生长。

尼美舒利对人小细胞肺癌细胞株NCL-H446增殖的抑制作用

目的研究尼美舒利对人小细胞肺癌细胞株NCL-H446增殖的抑制作用,为临床治疗提供实验室依据。方法常规培养人小细胞肺癌细胞株NCL-H446,MTT法检测尼美舒利的细胞毒性作用;倒置显微镜与Hoechst33258荧光染色观察细胞形态学变化;流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率。结果MTT显示尼美舒利呈剂量与时间依赖性抑制人小细胞肺癌细胞株NCL-H446的增殖;倒置显微镜下可见细胞变小、变圆、皱缩、部分细胞脱落飘浮于培养基中。荧光显微镜下可见细胞核染色质致密浓缩、荧光强度增强、染色质边集、核破碎,凋亡小体形成等。FCM检测结果表明尼美舒利既可诱导NCL-H446细胞凋亡,又可引起坏死,400μmol/L的尼美舒利作用细胞24h后,细胞早期凋亡率为7.65%,晚期凋亡率为29.76%,细胞坏死占23.9%。结论尼美舒利对体外培养的人小细胞肺癌细胞株NCL-H446有较显著的抑制作用,该作用与诱导细胞凋亡与坏死有关。

柚皮素增强乙肝疫苗免疫效果的探讨

目的探讨柚皮素作为佐剂增强HBV疫苗的体液免疫效果。方法用柚皮素作为免疫佐剂免疫Balb/c小鼠,以佐剂铝盐作为阳性对照,在免疫3次后取小鼠血清做ELISA检测HBsAb滴度,比较各组的免疫效果。结果与无佐剂组小鼠对比,柚皮素和铝盐作为佐剂均可有效地引起小鼠对HBsAg的体液免疫应答。结论柚皮素可以增强乙肝疫苗的免疫效果,和铝盐相比没有统计学意义。

热休克蛋白-肽复合物与肿瘤免疫

热休克蛋白（heat shock protein,HSP）是一类在生物进化过程中高度保守,广泛表达于所有生命机体组织细胞并具有管家功能的蛋白质。根据分子量的差异,HSP可分为10个家族,包括HSP110/grp170、gp96/grp94、HSP90、HSP70/grp78、HSP65、HSP25/27等,每个家族有1~5个成员[1]。在正常生理状态下,

mDRA-6与尼美舒利对Jurkat细胞的杀伤效应

目的:探讨mDRA-6与尼美舒利对Jurkat细胞有无杀伤作用及二者有无协同效应。方法:常规培养Jurkat细胞,流式细胞术检测细胞表面DR5的表达率,MTT法检测细胞毒性作用,Hoechst33258染色观察Jurkat细胞核形态变化,流式细胞术定量分析凋亡细胞率。结果:①Jurkat细胞表面DR5的表达率为84.83%。②mDRA-6与尼美舒利均能杀伤Jurkat细胞,存在浓度依赖性。400μmol/L的尼美舒利作用细胞10小时,细胞凋亡率为11.51%;0.5ng/ml与1ng/ml的mDRA-6作用细胞10小时,细胞凋亡率分别为3.67%和6.3%;③二者联合具有较好的协同促凋亡作用,400μmol/L的尼美舒利联合0.5ng/ml与1ng/ml的mDRA-6作用细胞10小时,细胞凋亡率分别为50.38%和63.79%。结论:mDRA-6与尼美舒利均有杀伤Jurkat细胞的作用,二者具有较强的协同作用,杀伤作用是通过诱导凋亡实现的。

顺铂通过活性氧协同抗hDR5抗体诱导食管癌细胞凋亡

目的:探讨顺铂与抗死亡受体5(DR5)激动性抗体mDRA-6联合应用对食管癌细胞系EC9706细胞凋亡的影响及作用机制.方法:顺铂、抗体mDRA-6单独或联合作用于食管癌细胞,用流式细胞术检测药物的细胞毒作用、食管癌细胞表面DR5表达、细胞凋亡、细胞内活性氧水平、以及线粒体膜电位的变化;在荧光显微镜下观察细胞凋亡的形态学变化及DR5表达.结果:顺铂和抗体mDRA-6对食管癌细胞均具有细胞毒作用,并具有剂量依赖性,而且顺铂明显提高食管癌细胞对抗体mDRA-6细胞毒的敏感性.顺铂、抗体mDRA-6单独或联合应用均导致食管癌细胞呈现典型细胞凋亡特征.流式细胞术分析结果显示,mDRA-6和顺铂均诱导食管癌细胞凋亡,而且顺铂明显提高细胞对mDRA-6诱导细胞凋亡的敏感性;顺铂增强食管癌细胞表面及胞内的DR5表达,提高细胞内活性氧水平,降低线粒体膜电位.结论:顺铂主要通过活性氧激活细胞内线粒体细胞凋亡信号传导途径以及增强DR5表达,与抗体mDRA-6联合协同诱导食管癌细胞凋亡.研究结果对进一步探讨抗DR5激动性抗体及TRAIL的抗肿瘤临床应用有一定的指导意义.