黄芩苷对多囊卵巢综合征大鼠颗粒细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨黄芩苷对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠颗粒细胞增殖和凋亡的影响及对磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路的调节作用。方法48只大鼠成功建立PCOS模型,并随机分为模型组、黄芩苷低剂量组、黄芩苷高剂量组和阳性对照组,每组12只,另取12只大鼠作为对照组。黄芩苷低剂量组、黄芩苷高剂量组大鼠分别灌胃25、50 mg∙kg^(−1)黄芩苷,阳性对照组大鼠灌胃0.3392 mg∙kg^(−1)炔雌醇环丙孕酮片(达英-35),对照组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水,每日1次,连续3周。用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immuno⁃sorbent assay,ELISA)检测黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、睾酮(testos⁃terone,T)以及雌二醇(estradiol,E2)含量;用HE染色观察卵巢组织病理损伤,细胞增殖检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测颗粒细胞存活率;用流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测PI3K、磷酸化磷脂肌醇3-激酶(phospho PI3K,p-PI3K)、Akt以及p-Akt蛋白相对表达量。结果对照组大鼠可见黄体,未见囊状扩张卵泡;模型组大鼠卵巢体积变大,少见黄体,可见囊状扩张卵泡;黄芩苷低剂量组、黄芩苷高剂量组及阳性对照组大鼠卵巢体积变小,可见黄体,囊状卵泡扩增不明显。与对照组比较,模型组FSH和E2水平、颗粒细胞存活率以及p-PI3K和p-Akt蛋白相对表达量降低,LH、T水平和颗粒细胞凋亡率升高(P<0.05);与模型组比较,黄芩苷低剂量组、黄芩苷高剂量组和阳性对照组FSH、E2水平,颗粒细胞存活率及p-PI3K和p-Akt蛋白相对表达量升高,LH、T水平及颗粒细胞凋亡率降低,其中阳性对照组各指标水平变化最显著,其次是黄芩苷高剂量组(P<0.05)。结论黄芩苷可促进PCOS大鼠卵巢颗粒细胞增殖,抑制凋亡,改善卵巢组织病理损伤,其可能是通过激活PI3K/Akt信号通路发挥作用的。

丹皮酚通过内质网应激和线粒体损伤途径促进卵巢癌细胞凋亡

【目的】探讨丹皮酚对卵巢癌细胞凋亡的影响及其机制。【方法】用不同剂量(0、1、2、3、4、5、6、7、8 mmol/L)丹皮酚处理人正常卵巢表面上皮细胞HOSEpiC和人类卵巢癌细胞SKOV3。应用细胞计数试剂盒8(CCK8)测定丹皮酚对HOSEpiC和SKOV3细胞的毒副作用,选择低剂量丹皮酚(1、2、5 mmol/L)进行后续实验。用丹皮酚(1、2、5 mmol/L)处理SKOV3细胞,溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)染色法观察SKOV3细胞的增殖能力,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测SKOV3细胞Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2、Bax、葡萄糖调控蛋白78(GRP78)、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)同源(CHOP)、cleaved Caspase-12、cleaved Caspase-3、细胞色素c(Cyto-c)、细胞凋亡诱导因子(AIF)、细胞色素c氧化酶4(COX IV)、cleaved Caspase-9的表达,流式细胞术检测细胞SKOV3凋亡和Ca2+水平。【结果】丹皮酚(2、5 mmol/L)对正常细胞无害,可剂量依赖性地降低SKOV3细胞存活率。丹皮酚(2、5 mmol/L)抑制SKOV3细胞增殖,促进SKOV3细胞凋亡。与空白对照组比较,丹皮酚(2、5 mmol/L)均升高内质网应激相关的凋亡通路蛋白GRP78、CHOP、cleaved Caspase-12、cleaved Caspase-3表达水平及Ca2+含量(均P<0.05)。与空白对照组比较,丹皮酚2、5 mmol/L均降低线粒体损伤相关的凋亡通路Cyto-c、AIF(线粒体内)水平,升高Cyto-c、AIF(胞质)的表达水平,升高cleaved Caspase-9表达水平,下调Bcl-2及上调Bax表达水平(均P<0.05),且呈剂量依赖性。【结论】丹皮酚剂量依赖性地调控SKOV3细胞中内质网应激和线粒体损伤相关的凋亡通路蛋白,可促进卵巢癌细胞凋亡。

miR-188-5p靶向PTEN对宫颈癌细胞SiHa顺铂化疗敏感性研究

目的探讨miR-188-5p对宫颈癌细胞SiHa顺铂(DDP)化疗敏感性的影响。方法 RT-PCR检测宫颈癌细胞株SiHa、耐药细胞株SiHa/顺铂(DDP)miR-188-5p、蛋白酪氨酸磷酸酶基因(PTEN)表达量,通过TargetScan/TargertScanS预测miR-188-5p靶基因PTEN并采用双色荧光素酶实验进行验证,构建miR-188-5p过表达(mimic组)、PTEN过表达(PTEN组)、miR-188-5p和PTEN双过表达(mimic+PTEN组)SiHa/DDP细胞并设置对照组(Control组),3-(4,5)-双甲基-2-噻唑-(2,5)-二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)、5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)法、Transwell法、蛋白质印迹法检测DDP处理下细胞活力、增殖、侵袭能力及其相关蛋白表达。构建裸鼠移植瘤模型,比较30d存活率和肿瘤质量,免疫组化检测肿瘤组织Ki-67、P-糖蛋白(P-gp)蛋白表达。结果 Control组DDP的IC50值为49.80μmol/L、mimic组为24.96μmol/L、PTEN组为58.81μmol/L和mimic+PTEN组为40.66μmol/L。P-gp表达Control组(0.020±0.010)、mimic组(0.003±0.002)、PTEN组(0.100±0.030)和mimic+PTEN组(0.015±0.007)比较差异有统计学意义,Fmimic=30.952、P=0.001,FPTEN=24.836、P=0.001,Fmimic×PTEN=13.801、P=0.006;mimic组P-gp表达低于Control组,t=3.059,P=0.038;mimic+PTEN组P-gp表达低于PTEN组,t=4.867,P=0.008。mimic组与Control组比较,增殖阳性细胞数目、侵袭细胞数目、Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达均降低(P<0.05),E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达升高,P<0.05;PTEN组与Control组比较,增殖阳性细胞数目、侵袭细胞数目、Ki-67、PCNA和N-cadherin蛋白表达均升高(P<0.05),E-cadherin蛋白表达降低,P<0.05;mimic+PTEN组与mimic组比较,增殖阳性细胞数目、侵袭细胞数目、Ki-67、PCNA和N-cadherin蛋白表达均升高(P<0.05),E-cadherin蛋白表达降低,P<0.05。Control组裸鼠存活率(46.67%)低于mimic组(86.67%),差异有统计学意义,χ2=5.136,P=0.023;mimic组Ki-67阳性率[(25.67±10.48)%]低于Control组[(76.17±15.84)%],差异有统计学意义,t=6.512,P<0.001;mimic组P-gp阳性率[(14.83±4.96)%]低于Control组[(46.67±8.69)%],差异有统计学意义,t=7.796,P<0.001;mimic组移植瘤质量[(0.40±0.02)g]低于Control组[(1.70±0.06)g],差异有统计学意义,t=49.399,P<0.001。结论 miR-188-5p可降低P-gp蛋白表达减弱SiHa细胞DDP耐药性,抑制细胞增殖和侵袭,可能与靶向抑制PTEN表达有关。