微小RNA-3619-5p通过靶向作用于p21基因对卵巢癌细胞生长的影响

目的:探讨微小RNA-3619-5p(miR-3619-5p)过表达对卵巢癌细胞系A2780和SKOV3中p21基因的上调作用及对卵巢癌细胞生长的影响。方法:使用Lipofectamine 3000分别向卵巢癌细胞系A2780和SKOV3瞬时转染miR-3619-5p(实验组)或者dsControl(对照组)。通过实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测p21、细胞周期依赖性激酶4(CDK4)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)mRNA的表达情况。蛋白质印迹(Western blotting)检测p21、CDK4和Cyclin D1蛋白的表达情况。流式细胞术检测对照组和实验组细胞周期分布差异和细胞凋亡情况。EdU增殖实验和集落形成实验检测细胞增殖能力。结果:与对照组相比,转染miR-3619-5p后2种细胞系中p21 mRNA均显著升高(P<0.01),而CDK4和Cyclin D1 mRNA的表达均明显降低(P<0.01)。Western blotting实验结果与qRT-PCR结果一致。与对照组相比,转染miR-3619-5p后,位于S期和G_2/M期的细胞比例明显下降,位于G_0/G_1期的细胞比例明显增大,细胞凋亡率明显升高。EdU增殖实验和集落形成实验均显示,与对照组相比,转染miR-3619-5p的卵巢癌细胞的增殖能力明显下降(P<0.05)。结论:miR-3619-5p可通过激活卵巢癌细胞中p21蛋白的表达抑制卵巢癌细胞的生长。

miR-3619-5p对乳腺癌细胞MCF-7和T47D增殖、凋亡的影响及分子机制

目的探讨miR-3619-5p转染对乳腺癌细胞系MCF-7和T47D增殖和凋亡的影响及可能的分子机制。方法乳腺癌培养至对数生长期,根据对其不同处理分为2组:对照组(转染ds Control)和实验组(转染miR-3619-5p)。5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(Ed U)增殖实验和集落形成实验检测乳腺癌细胞增殖能力变化;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测乳腺癌细胞周期分布和凋亡情况;实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测p21、CDK6和Cyclin D1 mRNA的表达;Western blot法检测p21、CDK6和Cyclin D1蛋白的表达变化。结果与dsControl组相比,转染miR-3619-5p的乳腺癌细胞增殖能力显著降低(P<0.05)。转染miR-3619-5p后,位于G_0/G_1期的细胞比例明显升高,位于S期和G_2/M期的细胞比例明显降低,细胞凋亡率显著上升。与ds Control组相比,转染miR-3619-5p后两种细胞系中p21 mRNA均明显上调(P<0.01),而CDK6和Cyclin D1 mRNA的表达均明显下调(P<0.01)。Western blot检测结果与qRT-PCR结果一致。结论 miR-3619-5p可显著抑制乳腺癌细胞的增殖能力,促进细胞凋亡,其分子机制可能是通过激活乳腺癌细胞中抑癌基因p21的表达。