磺胺二甲嘧啶在黄河鲤体内的代谢动力学研究

为探究磺胺二甲嘧啶在黄河鲤体内的药物代谢动力学特征,在(23±2)℃水温条件下,以20 mg/kg剂量给黄河鲤进行单次静脉注射和口灌磺胺二甲嘧啶,分别于给药后0.25、0.5、1、2、4、6、12、24、48、72 h采集血液和各组织,利用高效液相色谱测定血液和各组织中磺胺二甲嘧啶及其代谢物N^(4)-乙酰化磺胺二甲嘧啶质量浓度,采用DAS 2.0软件分析血液中磺胺二甲嘧啶代谢动力学参数。结果显示,黄河鲤静脉注射磺胺二甲嘧啶后,血液中的药物代谢过程符合零级吸收二室开放模型,表观分布容积为0.911L/kg,消除半衰期为19.964 h;口灌磺胺二甲嘧啶后,血液中的药物代谢过程符合一级吸收二室开放模型,表观分布容积为1.406 L/kg,吸收半衰期为0.02 h,消除半衰期为16.927 h,达峰时间为1 h,峰质量浓度为17.90 mg/L,生物利用度为93.30%。黄河鲤口灌磺胺二甲嘧啶后,磺胺二甲嘧啶在肌肉、肝脏、肾脏和脑各组织器官均有分布,N^(4)-乙酰化磺胺二甲嘧啶除了在脑中未检出,在其他组织中均有检出。以上结果表明,口灌磺胺二甲嘧啶在黄河鲤体内吸收较快,消除也较快,组织分布广,生物利用度较高。结合磺胺二甲嘧啶对主要致病菌的体外抑菌浓度,依据其在黄河鲤体内的药物代谢动力学特点,提出口服给药方案:按照138 mg/kg剂量,每日1次,连续给药5~7 d。

鲤池塘养殖中后期藻华动态与水环境特征

于2016年9—11月对比观测2个鲤养殖池塘藻华动态,并结合池塘藻类组成、水华营养因子分析水环境特征。结果显示,1#、2#池塘的藻华优势种整体为铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa),密度范围分别为1. 03×106～3. 20×106cells/m L、0. 72×105～7. 54×105cells/m L,均值分别占各池塘藻类总量的88. 15%、56. 22%。1#池塘蓝藻一直占优势,而2#池塘在10月中下旬硅藻占据最大比重。2个池塘在p H值、温度、电导率、盐度、碱度、平均总氮浓度等水环境指标方面没有明显差异,而磷酸盐浓度等指标差异明显。营养因子与藻类CCA分析结果显示,养殖池塘秋季藻类动态主要与总氮(TN)、总磷(TP)、活性磷(PO4-P)、氨态氮(NH3-N)、硝态氮(NO3-N)浓度相关,其中活性磷(PO4-P)浓度是主要影响因子,有必要在养殖中后期从内源和外源进行调控。

养殖池塘黄河鲤肠道硫酸盐还原菌群落特征解析

为探究鱼类肠道硫酸盐还原菌(sulfate-reduction bacteria,简称SRB)的群落特征,本研究选用黄河鲤(Cyprinus carpio L.)为研究对象,通过SRB功能基因(dsrB)高通量测序技术,对黄河鲤前、中和后肠SRB功能群进行检测。研究结果显示:黄河鲤肠道SRB主要分布在中肠和后肠,中肠SRB主要包括变形菌门(Proteobacteria)的脱硫球茎菌属(Desulfobulbus)、脱硫弧菌属(Desulfovibrio)、互营杆菌属(Syntrophobacter),厚壁菌门(Firmicutes)的脱亚硫酸菌属(Desulfitobacterium)和绿弯菌门(Chloroflexi)的暖绳菌属(Caldilinea);后肠SRB主要分布在变形菌门的脱硫球茎菌属、脱硫弧菌属、脱硫菌属(Desulfotalea)、互营杆菌属、脱硫念珠菌属(Desulfomonile)和鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)。依据高通量测序结果的FAPROTAX(Functional Annotation of Prokaryotic Taxa)数据库代谢功能预测显示,黄河鲤肠道SRB主要参与硫化合物呼吸、硫酸盐呼吸和化能异养功能。

维生素C对氨氮胁迫下大鳞鲃幼鱼存活及鳃抗氧化酶活性的影响

为探究维生素C(Vc)对大鳞鲃幼鱼抗氨氮胁迫能力的影响,在水温(23.50±0.41)℃、pH值8.03±0.07条件下,选取体质量(3.71±0.60)g的大鳞鲃幼鱼,测定了氨氮对大鳞鲃幼鱼的24、48、72、96 h半致死质量浓度,分析了水体添加Vc对大鳞鲃幼鱼死亡率以及鳃抗氧化酶活性的影响。结果显示,氨氮对大鳞鲃幼鱼的24、48、72、96 h半致死质量浓度(LC 50)分别为34.95、33.84、31.42、30.02 mg/L,安全质量浓度(SC)为3.00 mg/L。在96 h氨氮全致死质量浓度胁迫下,大鳞鲃幼鱼死亡率随水体Vc添加量增加呈显著下降趋势。在1/2的96 h LC 50氨氮胁迫下(胁迫组),水体添加50 mg/L Vc后,大鳞鲃幼鱼超氧化物歧化酶(SOD)活性在24、96 h显著高于胁迫组(P<0.05),且与对照组无显著差异(P>0.05),过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)活性在48~96 h显著高于胁迫组(P<0.05);水体添加80 mg/L Vc后大鳞鲃幼鱼SOD活性在24~96 h显著高于胁迫组(P<0.05),且与对照组无显著差异(P>0.05),CAT和GSH-px活性在48~96 h均显著高于胁迫组(P<0.05),其中GSH-px活性在24~96 h与对照组无显著差异(P>0.05)。综上,氨氮胁迫下,大鳞鲃幼鱼的死亡率随氨氮质量浓度增加和胁迫时间延长呈线性增加,水体添加Vc可提高大鳞鲃幼鱼鳃抗氧化酶活性,增强其耐氨氮胁迫能力,降低大鳞鲃幼鱼死亡率。

花[魚骨]抗缪勒氏管激素基因克隆、抗体制备及其对外源雌激素的响应

【目的】克隆花[魚骨]抗缪勒氏管激素基因Amh,分析其序列特征及亚细胞定位,检测不同浓度雌二醇处理下的表达变化规律,为后续研究Amh基因的功能及其在卵巢发育中分子机制提供理论参考。【方法】基于花[魚骨]转录组文库测序结果,克隆Amh基因cDNA序列,并对其进行生物信息学分析。构建重组表达质粒pET32a-Amh,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,用纯化的重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。通过免疫荧光技术检测荧光信号确定蛋白的亚细胞定位情况。同时,利用实时荧光定量PCR检测Amh基因在雌二醇处理后的表达情况。【结果】克隆的花[魚骨]Amh基因cDNA序列全长为1849 bp,开放阅读框(ORF)为1671 bp,编码556个氨基酸残基。系统进化分析结果显示,花[魚骨]Amh基因与斑马鱼、鲤鱼等鲤科鱼类Amh基因聚为一支,表明其亲缘关系较近。将纯化的AMH重组蛋白免疫小鼠以制备AMH多克隆抗体,通过酶联免疫方法(ELISA)检测其抗体效价为2.4×106以上,Western blotting检测显示抗体具有特异性。AMH蛋白在花[魚骨]卵巢颗粒细胞表达。利用不同浓度的雌二醇处理花?60 d后发现,低浓度雌二醇(100μg/g)促进花?卵母细胞生长,卵巢内皮质液泡数量增多。经雌二醇处理后,卵巢中Amh基因的表达量降低,说明雌激素在卵巢发育中对Amh基因表达具有抑制作用。【结论】Amh基因含有TGF-β家族典型的结构域,在卵巢颗粒细胞表达,且响应雌激素的调控,可能在花?卵巢发育中发挥调控作用。

基于SCoT分子标记的黄河鲤抗嗜水气单胞菌不同群体遗传多样性分析

【目的】基于SCoT分子标记探讨黄河鲤遗传多样性与其抗嗜水气单胞菌能力的关系,为黄河鲤的抗病育种提供理论依据。【方法】通过腹腔注射对300尾黄河鲤进行人工感染嗜水气单胞菌,按死亡顺序分为最先死亡群体(FP)、最后死亡群体(LP)和存活群体(SP),每个群体选取30尾。从80条SCoT引物中筛选出多态性好、重复性高、条带清晰的引物,对3个黄河鲤群体进行多态性扩增,采用PopGene32和Arlequin 3.5计算3个群体的等位基因数(Na)、有效等位基因数(Ne)、Nei’s基因多样性指数(H)及Shannon’s信息指数(I)等遗传参数,基于Nei’s遗传距离(Ds)利用MEGA 7.0中的非加权组平均法(UPGMA)构建系统发育进化树,并以Structure 2.3进行群体间的遗传结构分析。【结果】黄河鲤感染嗜水气单胞菌的死亡率为40.0%。从80条SCoT引物中筛选出18条扩增条带清晰、多态性好的引物,从3个黄河鲤群体中共扩增出103条条带,其中多态性条带97条,占94.17%。3个黄河鲤群体的Na范围为1.7961~1.8155,Ne范围为1.3828~1.4029,H范围为0.2258~0.2467,I范围为0.3453~0.3804;群体间的遗传分化指数(Gst)为0.0972,即90.28%的遗传多样性分布在群体内部。3个黄河鲤群体的遗传分化指数(Fst)为0.1299,属于轻度遗传分化;群体间的Ds分布在0.0248~0.0835,其中FP群体与SP群体的遗传距离最大。基于Ds的UPGMA聚类分析结果显示,FP群体和LP群体聚为一支,SP群体单独聚为一支;遗传结构分析结果表明,3个黄河鲤群体可分为2个亚群[抗病群体(SP)和易感群体(FP和LP)]。可见,通过黄河鲤死亡时间划分的群体与通过聚类分析及遗传结构分析得出的群体基本一致。【结论】黄河鲤抗嗜水气单胞菌的能力随着群体遗传多样性的增大而增强。因此,在黄河鲤抗病品种(系)选育过程中应保证足够的群体数量,在提高生长、营养等经济性状的同时保证一定的基因杂合度。

淮河流域板桥水库大型底栖动物群落结构及水质生物学评价

为了解板桥水库大型底栖动物群落结构动态特征并对其水质进行生物学评价,在该水库设置15个采样点,于2014年1—11月按季节进行调查.结果表明:在板桥水库采集到大型底栖动物17种,隶属于3门4纲5科,其中摇蚊幼虫8种、寡毛类4种、软体动物5种.铜锈环棱螺、河蚬、苏氏尾鳃蚓、粗腹摇蚊和雕翅摇蚊为现阶段板桥水库的重要物种.大型底栖动物密度、生物量和多样性指数存在空间和时间差异性.ANOSIM分析显示,大型底栖动物群落结构在不同区域和季节间均存在显著差异,其主要贡献物种为雕翅摇蚊、粗腹摇蚊和苏氏尾鳃蚓.经丰度-生物量比较曲线(ABC曲线)分析,板桥水库大型底栖动物群落稳定,结合物种多样性指数、生物学污染指数(BPI)和Hilsenhoff生物指数(BI)评价结果,板桥水库的水质处于轻度污染水平.