骨桥蛋白对细胞生存的多重作用

骨桥蛋白(osteopontin,OPN)作为一种分泌性蛋白质广泛存在于多种组织细胞中,不仅调控肿瘤细胞的转移、侵袭和增殖,也在炎症反应、血管再生等生理过程中发挥作用。OPN通过与受体结合直接或间接地激活细胞内信号途径,介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质之间的相互作用,从而参与调控细胞的生存。大量实验证实,OPN能够促进细胞的增殖,抑制细胞凋亡,尤其是对于肿瘤细胞。但在有些细胞中,OPN对细胞命运的影响却恰恰相反。本文综述了OPN在不同条件下对细胞存活、活化和增殖,细胞自噬和细胞凋亡的多重作用及其作用途径,为进一步研究OPN对不同细胞作用的受体及其信号网络机制提供重要理论基础。

人脐带间充质干细胞的分离、培养及其肝细胞生物学特性分析

目的:分离、培养人脐带基质来源的间充质干细胞(h UC-MSCs),观察其部分肝细胞生物学特性。方法:利用组织块贴壁培养法从脐带基质中分离培养h UC-MSCs,观察细胞形态,采用细胞免疫荧光法检测表面标记物CD44,通过RT-PCR法检测肝细胞标志基因ALB、CK18、G6P、GLUL、MET、TAT的表达情况,并进行PAS糖原染色。结果:从脐带基质分离出成纤维样细胞形态的h UC-MSCs,CD44表达阳性;RT-PCR结果表明培养的h UC-MSCs表达成熟肝细胞的标志基因ALB、CK18、G6P、GLUL和MET,而不表达TAT,PAS糖原染色呈阳性反应。结论:组织块贴壁培养法可有效获得稳定、均质性良好的h UC-MSCs,其具备部分肝细胞生物学特性。

5种核碱丙氨酸的合成及其抑制大鼠肝癌细胞RH35增殖的作用机制

目的合成5种核碱丙氨酸,探讨其细胞毒性及机制。方法用丝氨酸-内酯亲核开环方法合成5种核碱丙氨酸,用MTT法检测它们对大鼠正常肝细胞BRL-3A和大鼠肝癌细胞RH35活性的影响,流式细胞术检测它们对上述BLR-3A和RH35细胞周期进程和凋亡的影响,用Real-time PCR检测它们对上述两种细胞增殖/凋亡相关基因表达的影响。结果合成了1-尿嘧啶-L-丙氨酸、1-胸腺嘧啶-L-丙氨酸、1-胞嘧啶-L-丙氨酸、9-腺嘌呤-L-丙氨酸和9-鸟嘌呤-L-丙氨酸等5种核碱丙氨酸。其中,1-胞嘧啶-L-丙氨酸和9-鸟嘌呤-L-丙氨酸对RH35的半数抑制浓度(IC50)值显著低于对BRL-3A的IC50值,它们促进RH35凋亡的作用显著强于对BRL-3A作用,它们促进RH35凋亡相关基因CASP3、CASP9和Bax的表达上调幅度,抑制细胞增殖相关基因CCNA2和PCAN的表达下调幅度和抑制抗凋亡相关基因Bcl-2的表达下调幅度均显著高于对BRL-3A作用。结论1-胞嘧啶-L-丙氨酸和9-鸟嘌呤-L-丙氨酸通过显著抑制RH35增殖相关基因表达,促进凋亡相关基因表达而抑制其活性和促进其凋亡。

FoxA3和Hnf4α对原代大鼠肝细胞体外增殖的促进效应

为研究Fox A3和Hnf4α组合对原代大鼠肝细胞体外增殖的作用,构建了Fox A3和Hnf4α基因的慢病毒载体,共转染体外培养的原代大鼠肝细胞;倒置荧光显微镜下观察转染细胞是否增殖;反转录PCR(Reverse transcription PCR,RT-PCR)检测外源基因和肝细胞特异基因的表达情况;PAS(Periodic acidschiff)染色和吲哚菁绿(Indocyanine green,ICG)摄取检测转染细胞功能。结果表明,慢病毒转染4 d后表达绿色荧光蛋白的部分肝细胞呈现上皮样形态并增殖成簇,与正常培养的肝细胞相比增殖能力明显增强;PCR分析表明增殖的肝细胞除表达外源Fox A3和Hnf4α外,还表达肝细胞的标志基因Alb、CK18和G6p;功能检测结果表明增殖的肝细胞具有成熟肝细胞糖原合成和吲哚菁绿摄取的能力。以上结果表明,Fox A3和Hnf4α能促使体外培养的原代大鼠肝细胞进行增殖,并维持肝细胞的基本生物学特性。

大鼠肝再生中环状RNA表达谱的变化及其对自噬的影响

目的探讨大鼠肝再生中环状RNA(circ RNA)的表达变化以及对自噬的影响。方法以60只大鼠2/3肝切除0 h、2 h、6 h、12 h、24 h、30 h、36 h、72 h、120 h和168 h后的再生肝circRNAs、微小RNAs(miRNAs)、mRNA的高通量测序数据为基础,分析其在肝再生中的表达变化,进一步用miRanda aug 2010软件预测circRNAmiRNA和miRNA-mRNA靶标关系,并根据基因功能→miRNA功能→circRNA功能反向推测得到支配大鼠肝脏自噬的肝再生相关circRNAs和miRNAs,并构建它们的相互作用网络。结果与肝再生自噬相关的circRNAs、miRNAs、mRNA分别有102、42、153种。利用生物信息学分析,发现44种circRNAs、13种miRNAs及17种mRNA之间有相互作用关系,并以此构建了它们的共表达网络。结论筛选出了与肝再生自噬相关的circRNAs、miRNAs和mRNA,并构建了相互作用网络图谱。

CDR1as与疾病的相关性

环状RNA(circular RNA,circRNA)是存在于真核细胞中的一种非线性RNA,具有稳定性、特异性以及进化保守性等特征,通过发挥microRNA的海绵作用,对其靶基因进行调控。与线性RNA相比,环状RNA自身的闭合环状结构使其更具优越性。小脑变性相关蛋白1反义转录物(cerebellar degeneration-related protein 1 antisense,CDR1as)作为一种竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)间接调控miR-7靶标,通过多种途径影响多种疾病的发生和发展。本文就CDR1as的发现、来源及特征、功能以及与不同疾病的相关性作一概述。

长非编码RNA THOR在肿瘤中的作用

长非编码RNA(long non?coding RNA,lncRNA)是一类长度超过200 nt并且缺乏蛋白质编码潜能的RNA分子。最初lncRNA被认为是由RNA聚合酶Ⅱ转录的副产物,且无生物学功能。随着转录组测序技术的发展,大规模的lncRNA被鉴定出来。越来越多的证据表明,lncRNA参与多种生物学过程,包括基因印记、基因组重排、染色质修饰、细胞周期调控、转录、剪接、mRNA降解和翻译。lncRNA异常表达与人类多种疾病相关,尤其是增生性疾病,包括胃癌、肝癌和直肠癌等。其中,睾丸相关的高度保守的致癌长非编码RNA(testis?associated highly?conserved oncogenic long non?coding RNA,THOR)是一种非常保守的非编码RNA,在睾丸中特异性表达,并广泛存在于人的多种肿瘤组织中,如肝癌、胃癌、鼻咽癌、肾细胞癌、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、黑色素瘤、非小细胞肺癌和舌鳞状细胞癌中,在其发生和发展过程中发挥重要作用。在鼻咽癌、肾细胞癌、骨肉瘤、黑色素瘤、非小细胞肺癌和舌鳞状细胞癌中,THOR主要通过与胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(insulin?like growth factor 2 mRNA?binding protein 1,IGF2BP1)相互作用,促进肿瘤细胞的增殖。在肝癌中,THOR分别通过PTEN在胃癌和骨肉瘤中,THOR主要通过提高SOX9的表达增强癌细胞的干性。在视网膜母细胞瘤中,THOR主要通过提高c?myc的表达促进癌细胞增殖。在鼻咽癌中,THOR主要通过提高YAP的表达增强癌细胞的干性。