LRRC15影响A549细胞自噬的作用研究

特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一种致病原因不明、进行性、慢性不可逆的间质性肺疾病。为探讨富含亮氨酸重复蛋白15(leucine-rich repeat-containing protein 15,LRRC15)在IPF的作用及调节机制,本研究构建了博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠肺纤维化和A549细胞损伤模型,检测了LRRC15的表达变化。转染siLRRC15后分别采用MTT、GFP-RFP-LC3双荧光标记系统和免疫印迹等方法检测了细胞活性和自噬的变化。结果表明:BLM处理后,小鼠肺组织和A549细胞中LRRC15表达显著上调;将设计和合成的siLRRC15转入A549细胞,LRRC15的表达极显著降低,可以部分恢复BLM引起的细胞损伤;BLM处理A549细胞后,LC3-Ⅱ和P62蛋白呈现上升的趋势;GFP-RFP-LC3双荧光标记检测发现,BLM处理后自噬体数量明显增多;进一步用siLRRC15处理A549细胞后发现,自噬关键蛋白LC3-Ⅱ、ATG5、ATG7的表达增加,P62蛋白表达下调,自噬流的强度增加。以上研究结果说明LRRC15是IPF中上皮细胞损伤的指示剂,可能通过调节自噬参与纤维化过程中的调节,本研究为进一步阐明IPF的机制提供了必要的理论依据。

肝再生细胞周期中增殖启动及其调控研究

肝再生细胞周期中增殖启动及其调控是一个研究热点,到底是何种因素及其涉及到的信号传导途径诱导了Go期肝细胞的启动仍然是一个谜.本文主要以JNK、TNF-α、IL-6、一氧化氮等因子及其可能参与的调控途径综述了肝再生启动的一些最新研究进展.

槲皮素对细菌脂多糖诱导流产小鼠子宫蜕膜巨噬细胞功能的影响

目的:探讨槲皮素对细菌脂多糖(LPS)诱导流产小鼠的免疫抑制机制及其保胎作用。方法:将孕鼠随机分为对照组和实验组,对照组为PBS处理组,实验组分别为LPS流产模型组、槲皮素处理组、槲皮素+LPS处理组。每组小鼠分别在末次注射后的1、3、6、12、24h脱颈椎处死,剖腹取其子宫,观察妊娠结果。免疫组织化学方法检测CD14^+巨噬细胞数量和CD14表达量,ELISA方法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的含量。结果:模型组小鼠流产率和胚胎吸收率均为100%,槲皮素+LPS处理组流产率降低为40%,胚胎吸收率降至36.18%。与对照组相比,槲皮素+LPS组小鼠子宫蜕膜组织CD14^+巨噬细胞数量、CD14表达量、TNF-α和MCP-1的含量均显著增加。与模型组相比,槲皮素+LPS组小鼠各时间点CD14^+巨噬细胞数量及CD14表达量、TNF-α和MCP-1的含量均显著降低。结论:槲皮素通过抑制MCP-1的生成,从而阻止巨噬细胞向子宫内膜迁移,并且下调CD14的表达,减少TNF-α的分泌,是其对抗LPS诱导流产的免疫作用机制之一。

花旗松素、槲皮素对LPS诱导流产小鼠子宫巨噬细胞的抑制作用

目的:探讨花旗松素和槲皮素对细菌脂多糖(LPS)诱导流产小鼠子宫巨噬细胞的免疫抑制作用。方法:昆明种正常孕鼠90只,随机分为对照组(A组);实验组均于孕6天尾静脉注射LPS 0.2 ml诱导流产小鼠,并分为LPS处理组(B组),低浓度花旗松素及LPS双处理组(C1组)、高浓度花旗松素及LPS双处理组(C2组)、低浓度槲皮素及LPS双处理组(D1组),高浓度槲皮素及LPS双处理组(D2组),每组15只。用酶组织化学、免疫组化和ELISA方法检测孕9天子宫角组织非特异性酯酶阳性(α-NAE+)巨噬细胞,CD14+巨噬细胞和TNF-α含量。结果:B组小鼠流产率为100%,胚胎吸收率为100%(P<0.01);灌胃花旗松素和槲皮素可以显著抑制流产模型小鼠的流产率和胚胎吸收率(P<0.01)。B组孕鼠子宫内膜和肌层α-NAE+,CD14+巨噬细胞数量和阳性面积与A组相比均显著增多(P<0.01);各双处理组与B组相比,子宫内膜和肌层α-NAE+巨噬细胞和CD14+巨噬细胞数目和阳性面积显著减少(P<0.01)。B组孕鼠子宫TNF-α含量与A组相比显著增加(P<0.05),而双处理组接近正常水平。结论:通过抑制子宫巨噬细胞的数量、分布、活性和TNF-α分泌量,可能是花旗松素和槲皮素对抗LPS诱导小鼠流产的机理之一。

妊娠早期小鼠子宫巨噬细胞分布和活性的变化

目的:通过研究妊娠早期子宫CD14+巨噬细胞数量、分布及酸性磷酸酶(ACP)活性变化,探讨巨噬细胞与母胎免疫耐受的关系。方法:用免疫组织化学方法和酶细胞化学研究小鼠妊娠早期子宫CD14+巨噬细胞及ACP的变化。结果:对照组CD14+巨噬细胞主要分布在子宫内膜。小鼠妊娠后内膜中数目减少,第3日最少;肌膜和外膜巨噬细胞增加,第2日达到高峰。CD14免疫反应阳性面积变化趋势与此类似。第3～5日期间ACP的活性下降并维持在较低的水平。结论:巨噬细胞在着床期抗原识别和处理能力受到了抑制,参与了妊娠早期母胎免疫耐受的形成。

水红花子对LPS诱导流产小鼠子宫巨噬细胞的抑制效应及其保胎作用

目的:探讨水红花子对细菌脂多糖(LPS)诱导流产小鼠的免疫抑制及其保胎作用。方法:昆明种小鼠55只,随机分为对照组(A组,10只)和实验组。实验组又分为细菌脂多糖(LPS)处理组(B组),水红花子处理组(C组),水红花子及LPS双处理组(D组),每组各15只。观察妊娠结果,用酶组织化学、免疫组化和ELISA方法分别检测非特异性酯酶阳性(α-NAE+)、CD14+和CD204+巨噬细胞、TNF-α的变化。结果:B组小鼠流产率和胚胎吸收率均为100%(P<0.01);而D组流产率降低为13.33%,胚胎吸收率降至10.39%。与A组相比,在B组,α-NAE+、CD14+巨噬细胞数量和阳性面积,以及TNF-α含量均显著增加;在D组,环肌外侧极显著增多(P<0.01),但环肌内侧、功能层均接近正常水平。与A、B组相比,C、D组CD204+巨噬细胞数量和阳性面积均显著增多。结论:通过调节子宫巨噬细胞的表型、活性和TNF-α的分泌,可能是水红花子对抗LPS所致流产效应的机制之一。

孕酮对小鼠子宫巨噬细胞数量及膜受体CD14、CD204表达的影响

目的探讨孕酮对子宫巨噬细胞数量及其膜受体CD14、CD204表达的影响,以及孕酮和巨噬细胞在子宫局部免疫中的作用。方法 1.25只正常非孕鼠随机分为空白对照组、阴性对照组和低、中、高3个不同浓度孕酮处理实验组,每组5只。低、中、高浓度实验组每天分别皮下注射0.4mg、2.0mg、4.0mg孕酮,阴性对照组注射等体积芝麻油,连续注射5d;空白对照组不做任何处理。2.孕4d和5d小鼠各15只,分别随机分为空白对照组、阴性对照组和实验组,每组5只。实验组分别于当天早晨皮下注射4mg孕酮,阴性对照组注射等体积芝麻油,空白对照组不做任何处理。以上各组均于末次注射后6h取子宫,通过非特异性酯酶(α-NAE)染色和免疫组织化学检测子宫α-NAE+、CD14+、CD204+巨噬细胞的变化。结果与对照组相比,注射孕酮后,非孕鼠子宫内膜、肌层和外膜的α-NAE+及CD14+巨噬细胞极显著减少(P<0.01),并与剂量呈正相关,但未检测到CD204+巨噬细胞;孕4d、5d小鼠子宫α-NAE+、CD14+、CD204+巨噬细胞均显著增多(P<0.01)。结论孕酮可通过调节巨噬细胞数量、分布及膜受体的表达影响子宫局部免疫状态,替代途径活化的巨噬细胞可能介导了妊娠期母胎免疫耐受的维持。

镉诱导细胞自噬的研究进展

镉是一种有毒的重金属,其对环境和人类的健康造成巨大危害。越来越多的证据表明镉对多个器官和系统造成损害,甚至引起癌变和肿瘤。自噬是进化上保守的,利用溶酶体途径降解细胞内蛋白质和细胞器的过程。一方面,自噬通过清除受损的细胞器保护细胞免受镉损伤;而当细胞受到的损伤不可逆时,自噬作为一种死亡机制导致细胞死亡。自噬在镉引起的细胞损伤中的作用目前仍有争议,可能是镉的剂量和暴露时间的不同造成了自噬在损伤中的作用不同。目前对自噬在其中的作用机理研究,主要集中在m TOR,Ca2+,Beclin-1等信号分子。对镉与自噬分子机理的研究,可以为治疗和预防镉中毒提供新思路。综述了自噬在镉致细胞毒性中的作用,以及镉诱导细胞自噬的信号调节通路。

红藤对LPS诱导流产小鼠的保胎作用及子宫巨噬细胞的影响

目的:探讨红藤对细菌脂多糖(LPS)诱导流产小鼠的保护作用及其免疫药理机制。方法:昆明种小鼠55只,随机分为对照组(A组,10只)和实验组。实验组又分为LPS处理组(B组)、红藤处理组(C组)、红藤及LPS双处理组(D组),每组各15只。观察妊娠结果,并用酶组织化学、免疫组化、ELISA方法检测子宫非特异性酯酶阳性(α-NAE+)、CD14+、CD204+巨噬细胞和TNF-α的变化。结果:小鼠流产率在B组为100%(P<0.01),胚胎吸收率为100%(P<0.01);而D组流产率降低为13.33%,胚胎吸收率降至12.56%;孕鼠子宫α-NAE+、CD14+巨噬细胞数量,B组子宫各部位与A组相比均显著增多(P<0.01);D组环肌外侧与A组相比显著增多(P<0.01),但环肌内侧、功能层无明显变化,C、D组CD204+巨噬细胞数量与A组、B组相比均显著增多(P<0.01);子宫TNF-α含量B组与A组相比显著增加(P<0.01),而D组接近正常水平。结论:红藤可以对抗LPS所致的小鼠流产,通过影响孕鼠子宫巨噬细胞的数量、分布和亚群,抑制TNF-α的分泌,是其保护胚胎正常发育的机理之一。

MCP-1对LPS致炎小鼠子宫巨噬细胞迁移和功能活性的调节

目的:探讨LPS诱导的炎症小鼠子宫巨噬细胞迁移和功能活性的调节因素。方法:将150只雌性昆明种小鼠随机分为对照组(A组)、LPS模型组(B组)、MCP-1阻断组(C组),于末次注射后的1、3、6、12、24 h取子宫。运用免疫组织化学方法检测CD14^+巨噬细胞数量与CD14表达的变化,ELISA方法检测TNF-α、MCP-1的表达量。结果:(1)与A组相比,B组内膜、肌层、外膜的CD14^+巨噬细胞数目及CD14表达量在各时间点均极显著增加(P<0.01),C组内膜和肌层在1、3、6 h时恢复至正常水平;与B组相比,C组外膜在1、3、6 h时以及C组的内膜和肌层在各时间点时CD14^+巨噬细胞数目及CD14表达量均极显著减少(P<0.01)。(2)与A组相比,B组在各时间点以及C组在12、24 h时TNF-α和MCP-1的含量极显著增多(P<0.01);与B组相比,C组各时间点的TNF-α和MCP-1的含量极显著减少(P<0.01)。结论:LPS诱导的小鼠子宫炎症反应中巨噬细胞的迁移及CD14、TNF-α等关键分子的表达均受MCP-1的调节。

交感神经及其递质去甲肾上腺素对小鼠子宫巨噬细胞CD14和CD204表达的抑制作用

目的:研究交感神经在小鼠子宫局部免疫中的作用.方法:昆明种雌性小鼠,实验组连续5d腹膜腔注射6-羟多巴胺(6-OHDA)进行交感神经阻断实验,分别于注射后第1、3、5、7、9、14天取子宫;所有小鼠腹膜腔注射6-OHDA阻断交感神经,之后实验组每天腹膜腔注射5、10、25 μg去甲肾上腺素(NE)进行NE处理实验,在注射的第5天取子宫.免疫组织化学检测子宫巨噬细胞膜受体CD14和CD204的表达.结果:与对照组相比,交感神经阻断后子宫内膜、肌层和外膜CD14+巨噬细胞均显著增多,CD14表达显著上调;对照组和实验组第1天未检测到CD204的表达,其余各组均有CD204的表达,且表达量随着时间推移而增多,第9天达到高峰.各实验组注射NE后,子宫CD14+、CD204+巨噬细胞显著减少,CD14、CD204表达显著下调,中、高浓度组下调较明显.结论:交感神经及其递质NE可以通过调节巨噬细胞数量和膜受体CD14、CD204的表达参与子宫局部免疫状态的维持.

CBL模式下免疫组化技术在生物教学中的应用

免疫组化是生命科学研究中常用的一种实验技术。基于CBL(以案例为基础的学习)模式设计了"再生肝组织免疫组化"实验并引入细胞生物学实验教学,增强了学生对于免疫组化技术的认知和理论课知识的掌握程度。结果证实,该模式提高了学生的学习兴趣和教学质量,值得在细胞生物学实验教学中进行推广。

环状RNA及其在肝病中的作用

环状RNA(circRNA)是一种不具有5’末端帽子结构和3’末端的poly(A)尾巴的新型非编码RNA,是由非共价键形成的反向连接的闭合环状结构。circRNA由于其具有作为miRNA分子海绵及生物标志物的作用,可用于肝脏疾病的治疗和诊断,因此,circ RNA已逐渐成为当今的研究热点。我们针对circRNA以及circRNA在肝病中的研究进行了综述,以期对未来的肝脏疾病的研究和治疗提供理论基础和新思路。

CBL模式在生物教学中的应用--以“屠呦呦获诺贝尔奖”为例

为了进一步提高教学质量,设计了一堂青蒿素及其衍生物的研究进展课,探索以案例为基础的学习(CBL)模式下学生对理论知识的掌握程度,以期为河南师范大学生命科学学院生物学教学提供参考。结果证实:该教学模式达到了激发学生兴趣和提高教学质量的效果。

乙二醇对体内外源基因表达的作用研究

探索在液压转基因中乙二醇对小鼠肝脏外源基因表达的影响。以小鼠液压转基因的条件从小鼠尾静脉注射含不同浓度乙二醇的pEGFP-C1质粒溶液,分别在尾静脉注射后24 h、48 h和72 h取小鼠肝脏右叶制冷冻切片,在波长488 nm的荧光显微镜下观察,统计绿色荧光蛋白表达率;同时进行苏木素染色,进行小鼠肝脏形态结构观察。结果显示,乙二醇浓度在0.05 mol/L-0.5mol/L范围内,转基因后24 h时随着乙二醇浓度升高,绿色荧光蛋白阳性细胞率呈降低趋势;72 h时绿色荧光蛋白阳性细胞率随着乙二醇浓度升高而升高,且在72 h乙二醇浓度为0.5 mol/L时阳性细胞率较高。乙二醇在液压转基因中能调节外源基因的表达,使表达高峰向后推移。

全基因组染色质相互作用Hi-C文库制备的优化及其质量控制

Hi-C(highest-throughput chromosome conformation capture)技术是近年出现的一种研究染色质相互作用的关键技术。该技术步骤多、耗时长,涉及的试剂耗材繁杂,目前常规流程还有较多可以改进优化的步骤。本研究以GM12878细胞为材料,通过优化常规Hi-C实验中的交联、酶切、限制性内切酶的失活、末端生物素标记、原位连接等关键步骤,建立了稳健的Hi-C流程,制备了相应的Hi-C文库。文库经初步的Sanger测序等质量控制以后,两个生物学重复文库进行了高通量测序。测序结果利用生物信息学处理发现:原始测序数据中可比对率和配对率分别达到90%和72%左右。此外,去除自连片段(self-circular ligation)和dangling-ends片段以后,可获得超过96%的有效相互作用对,其中染色体内相互作用数据达到60%。进一步的染色体相互作用热图分析可见清晰拓扑学相关结构域TADs(topologically associated domains),与已发表的文献报道一致。而两次生物学重复之间的相关性分析则表明bin coverage和all bin pairs的相关性都极强。上述结果表明通过对常规Hi-C流程关键步骤的优化,本研究建立了高效、稳健、可靠的Hi-C流程,对Hi-C技术的进一步使用与推广具有重要的参考价值。

Beclin-1复合物在镉诱导PC12细胞自噬中的作用

PC12细胞培养过程中添加镉和/或PI3K抑制剂LY294002,免疫印迹法检测Beclin-1复合物和LC3-II的表达变化,研究其在自噬中的作用。结果表明:20μmol·L-1镉处理不同时间后,Beclin-1、class III PI3K和Bcl-2的表达总体呈现先升高后降低的趋势;联合LY294002后显著抑制了Beclin-1,class III PI3K、Bcl-2和LC3-II的表达水平(P<0.05或P<0.01)。说明镉暴露PC12细胞后,促使Bcl-2/Beclin-1复合物解离,Beclin-1进一步和class III PI3K结合,参与调节自噬。

大鼠8种肝脏细胞中缺血反应相关基因与肝再生的作用分析

为了解8种肝脏细胞的缺血反应相关基因与大鼠肝再生的相关性,用percol密度梯度离心和免疫磁珠方法分离大鼠部分肝切除后不同时间(0,2,6,12,24,30,3672,120和168h)再生肝中的8种细胞,用Rat Genome 2302.0芯片等方法检测上述8种细胞的缺血反应相关基因在大鼠肝再生中表达变化,用生物学和系统生物学等方法分析上述基因与大鼠肝再生的相关性.结果显示,缺血反应主要在肝再生启动阶段及进展阶段前期发挥作用,且上调占优势,可刺激il6,tnf等肝再生关键基因表达;肝星形细胞、树突状细胞中的缺血反应相关基因具有表达的相似性.缺血反应能推动肝再生的顺利进行,但胆管上皮细胞的基因表达情况特殊,值得进一步研究.

ZNF143调控基因表达的机理

ZNF143(zinc finger protein 143)是由7个锌指结构组成的C2H2型转录因子,其在绝大多数脊椎动物的不同组织、细胞中广泛表达。但通常情况下,ZNF143在癌组织、胚胎发育过程中的表达高于正常组织。研究发现,ZNF143主要通过参与编码和非编码基因的激活,从而在细胞周期、细胞增殖与分裂等细胞活动中发挥重要作用。更为重要的是,近几年研究表明,ZNF143通过与其他调控蛋白质形成转录起始复合物来介导远距离染色质的相互作用,从而参与染色质结构的形成,推测其在细胞身份及命运决定中发挥重要功能。此外,由于ZNF143的表达异常往往伴随着肿瘤的发生,因此,近些年针对ZNF143来设计药物靶点的研究也取得了一定的进展。