新基因NtTKR及其同源物LeTKR的生物信息学分析

驱动蛋白是一类与微管结合的ATPase,在细胞内执行着多种功能.序列对比分析表明,烟草不同发育时期胚cDNA文库的差异筛选分离到的在叶和发育各时期胚中优势表达的驱动蛋白家族新成员NtTKR与番茄驱动蛋白LeTKR(AF242356.1)高度同源.运用生物信息学方法对二者编码产物的同源性、功能结构域特点和可能的翻译后修饰等进行了比较分析,结合目前已知的实验结果预测了该基因可能参与的生物学过程.这些分析和预测将对进一步实验证实NtTKR在烟草的形态发生及胚胎发生中的提供有益的指导.

烟草新驱动蛋白NtTKR过表达对酵母生长的影响

为了解烟草新驱动蛋白NtTKR功能信息,构建了EGFP融合的NtTKR基因酵母表达载体并转入酿酒酵母W303诱导表达,荧光显微镜观察结果表明,诱导条件下的转化细胞发出明亮的绿色荧光,表明转入的NtTKR得到了高效表达.转化株在诱导和非诱导条件下培养3d,可见NtTKR过表达菌落比对照小的多;但通过绘制8h内生长曲线发现二者细胞数目无显著差别;表明NtTKR过表达对酵母细胞生长的抑制可能更多的是因为抑制其体积增大,而非分裂速度减慢引起的细胞数目降低.已知NtTKR在烟草受精卵、发育各个时期的胚、幼叶、根尖及茎尖等细胞分裂旺盛部位均优势表达,推测该基因在烟草中可能与上述各部位新生细胞的体积增大相关.

猪冠状动脉平滑肌细胞的分离、培养及鉴定

目的，建立体外分离培养猪冠状动脉血平滑肌细胞（PCASMC）的技术方法并观察其生长特征．方法：酶联合消化法原代分离猪冠状动脉来源的CASMC，利用倒置显微镜观察细胞生长情况；免疫荧光染色法鉴定细胞；台盼蓝法、绘制生长曲线法测定冠状动脉PCASMC传代细胞的成活率和生长特征．结果：分离培养的细胞3d后呈梭形生长，7～8d后生长迅速可传代；第2代细胞在显微镜下观察3～5d即可见典型“峰-谷”状生长；免疫荧光染色显示胞浆内α-平滑肌肌动蛋白表达阳性，细胞成活率为97．5％；细胞生长曲线近似“s”形．结论：本研究建立了高效分离和培养PCASMC的方法，细胞均稳定地表达α-平滑肌肌动蛋白，为血管疾病的研究提供了理想的细胞模型．

禽畜粪肥对农田蔬菜中抗生素抗性内生菌的影响

选取常食农田茎叶类蔬菜——上海青和芹菜为研究对象,探讨禽畜粪肥对蔬菜抗生素抗性内生菌的影响.结果表明:施加粪肥的农田上海青及芹菜样品的根、茎、叶中抗阿莫西林、头孢氨苄、四环素的单抗性内生细菌的数量均比未施加粪肥组高,它们的相对百分比含量比未施加组高出9~19倍.其中,从施加禽畜粪肥上海青中分离获得的多重抗生素抗性细菌-嗜麦芽寡养单胞菌,可能引起多种人类疾病,尤其值得关注.

发根农杆菌T-DNA诱变怀地黄突变体或品系的遗传学分析

主要采用紫外吸收光谱法、高效液相色谱法、3,5-二硝基水杨酸比色法,PCR和SRAP技术,从叶绿素含量、还原糖和总糖含量、梓醇含量、毛蕊花糖苷含量和T-DNA片段的稳定性和基因组DNA的变化方面,对发根农杆菌转化怀地黄突变体或品系的变异性状进行了分析.发现怀地黄突变体或品系的叶片形态、植高、叶绿素含量、糖含量、梓醇和毛蕊花糖苷的含量均有变异,一个SRAP引物组合从其基因组DNA中扩增出一个对照中没有的约400bp的DNA片段,T1-T7代突变体或品系中均检测到rolB基因的存在.这些结果表明发根农杆菌T-DNA可以诱导怀地黄产生变异,并且稳定遗传.