食源性致病菌O157:H7的生物检测研究

根据致病性大肠杆菌O157:H7的致病基因rfbE设计特异性引物扩增出致病性O157:H7特异性序列,然后分别用常规的琼脂糖电泳技术和Agilent 2100 Bioanalyzer对PCR产物进行检测,并比较两种检测方法的灵敏度、准确度和重复性。结果表明,Bioanalyzer的灵敏性较琼脂糖凝胶电泳法高;其能准确地确定片段的大小(误差率小于5%),可提供PCR目的片段的质量浓度和摩尔浓度。Bioanalyzer芯片分析系统结合PCR方法可对食源性大肠杆菌O157:H7进行特异、准确、稳定、灵敏的检测和鉴定,具有重要的推广价值。

基于生物信息学诺如病毒多表位抗原的构建及鉴定

目的:基于生物信息学技术设计诺如病毒(NoV)的多表位抗原并进行制备及鉴定。方法:采用生物信息学方法构建NoV多表位抗原NoV-ZH并进行分析。通过原核表达系统制备重组蛋白并鉴定,经动物免疫、杂交瘤技术制备单克隆抗体,并在胶体金平台初步应用。结果:设计的多表位抗原二级结构中无规卷曲占比较大,理论分子质量及等电点(PI)为13.1 ku、7.16,性质稳定,亲水性较好。免疫评估显示具有良好的免疫原性,可激活体液免疫应答和细胞免疫应答。抗原序列连接pET-28a(+)、pET-32a载体后制备的蛋白分别以包涵体蛋白、可溶性蛋白的形式表达。经动物免疫、杂交瘤技术获得一对配对抗体,应用于胶体金试纸条灵敏度达0.5 ng/ml,试纸条可特异性结合两种基因型NoV重组衣壳蛋白。结论:成功制备诺如病毒多表位抗原并鉴定,为后续NoV通用型检测靶点探究及诊断原材料开发提供参考。

利用ISSR标记鉴别玉米品种的初步研究

采用CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)法从10个玉米品种种子胚中提取全基因组DNA,用正交实验法优化ISSR-PCR反应体系,筛选扩增条带清晰的引物,然后用所筛引物对10个玉米品种DNA扩增,分析其扩增带纹差异,找出能够鉴别10个玉米品种的合适引物。研究结果表明:①优化的ISSR-PCR反应参数为:1.5mmol/LMg2+、0.375mmol/LdNTP、0.5μmol/L引物、2.5UTaqDNA聚合酶;②从40条ISSR引物筛选出11条扩增条带清晰、多态性较高的引物,它们共扩增出101条条带;③利用引物UBC808能将10个供试玉米样品区分开。

流感病毒检测方法研究进展

近些年,流感在全球范围的频繁暴发,使科研工作者关注的焦点转移到对流感病毒进行方便、快速、准确的鉴定上。论文介绍了国内外流感病毒的检测方法,重点介绍了免疫学检测方法,尤其是酶联免疫法和胶体金免疫标记法。通过对各方法优缺点的比较,提出了免疫学检测方法在方便、快速检测流感病毒方法中的特有优势,尤其是胶体金免疫标记法和酶联免疫检测法,旨在为研制方便、快速的流感病毒检测方法提供思路,并为流感的预防、诊断提供一定的参考。

杆状病毒的生态学和流行病学研究进展

杆状病毒作为杀虫剂应用,已成为生物防治中不可缺少的环节,也是一类重要的生物防治因子,但杆状病毒相对低的毒力和较长的杀虫时间是制约其推广应用的原因之一。文中就杆状病毒与宿主的关系,杆状病毒在环境中的存活、滞留与扩散等方面的流行病学研究进展做一总结。

用于检测小分子靶标的电流型识体传感器研究进展

综述了电流型识体传感器在检测小分子靶标方面的研究进展:通过目标分子与电极上固定的核酸识体结合引起电流或电阻的变化和通过改变电活性物质与电极之间的距离2种方法均可检测目标靶分子.指出提高电流型识体传感器的灵敏度和适用性将是未来的发展方向.

Flag标签抗原的偶联及其单克隆抗体的应用研究

探讨不同免疫原制备抗Flag标签单克隆抗体的效果,以及Flag标签单克隆抗体在融合蛋白纯化中的应用。通过碳化二亚胺分别合成Flag-BSA、Flag-OVA、Flag-KLH3种完全抗原,采用SDS-PAGE和免疫效价对比方法确定偶联效果,选最优者利用杂交瘤技术制备抗Flag标签单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备腹水,并对其纯化、分析和鉴定。制备交联抗Flag-mAb的亲和层析柱,纯化带Flag标签的融合蛋白,经SDS-PAGE电泳后薄层扫描分析纯度,用Western blot检测mAb对融合蛋白的反应性。Flag-KLH偶联效果最好,小鼠免疫效价在104以上,共制备3株抗Flag标签单克隆抗体杂交瘤细胞株2B-7、3C-5、5F-2,分泌抗体均为IgG1类型,与其他融合蛋白标签无交叉反应,经亲和层析纯化融合蛋白纯度达85%,且都可用于融合蛋白的Western blot检测,建立了带Flag标签的融合蛋白纯化和检测方法。成功偶联了Falg完全抗原并制备单克隆抗体,为带Flag标签的融合蛋白纯化提供重要工具。

高纯丙酮制备工艺研究

以分析纯丙酮为原料,采用亚沸蒸馏技术,来制备高纯丙酮,纯度可超过99.95%。该技术的关键在于精确控制蒸馏温度和蒸馏次数。

非洲猪瘟病毒衣壳五邻体顶点蛋白(H240R)原核表达及免疫原性研究

【目的】原核表达非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)次要衣壳五邻体顶点蛋白(H240R),并研究其免疫原性。【方法】运用生物信息学软件初步预测分析H240R蛋白的理化性质、二级和三级结构。目的基因序列密码子优化后全基因合成,利用基因重组技术构建重组载体pET28a/H,通过原核系统表达目的蛋白,筛选最优的诱导温度和诱导时间。目的蛋白(包涵体)通过含2M尿素洗涤缓冲液洗涤和亲和层析进行纯化。利用梯度透析对纯化的目的蛋白进行复性,Western和Dot-ELISA鉴定复性的目的蛋白。复性蛋白和佐剂ISA201乳化后免疫小鼠,评价H240R蛋白免疫原性及其在小鼠体内诱导的抗体消长规律。【结果】生物信息学分析显示H240R蛋白分子量约为27 kDa,等电点为9.40,无跨膜结构域,抗原指数较高。成功构建大肠杆菌工程菌株BL21(DE3)/pET28a/H,在不同温度诱导条件下H240R蛋白均以包涵体形式表达。包涵体蛋白经过洗涤和亲和层析纯化后,纯度达85%以上。大约65%纯化蛋白可通过梯度透析进行复性。Western显示His抗体可以和融合蛋白结合显色,表明目的蛋白表达正确,Dot-ELISA显示阳性血清和复性的目的蛋白反应,表明复性的H240R蛋白具有正确的构象。复性蛋白免疫小鼠后,可刺激小鼠产生抗体,二免后10 d达到平台期,可以稳定持续30 d左右。【结论】ASFV衣壳五邻体顶点蛋白H240R在原核系统中以包涵体形式表达,纯化复性的目的蛋白具有良好的免疫原性,并且可以和阳性血清反应。这些可为进一步研究H240R蛋白的结构和功能,以及ASFV亚单位疫苗研制提供参考和思路。

RNAi技术干扰人喉癌Hep-2细胞PTTG1基因的初步研究

目的:探索对人PTTG1基因mRNA序列有较高干扰效率的位点,构建对PTTG1基因的表达有较高抑制效率的重组质粒。方法:筛选、合成1对互补DNA单链,退火为双链后与双酶切后的质粒载体连接,构建了表达短发夹RNA的1种重组质粒plk0.1-puro/PTTG1。重组质粒以不同浓度转染,并于转染后不同时间收集细胞,以β-actin为内参,采用RT-PCR和Western blot技术分别检测PTTG1基因的mRNA、蛋白质的相对表达水平。结果:与空白对照组相比,6孔板中每孔转染质粒plk0.1-puro/PTTG 11000ng以上、转染超过12d时,PTTG1基因mRNA、蛋白质的相对表达水平下降70%以上。结论:重组质粒plk0.1-puro/PTTG1,在6孔细胞培养板中以1000ng/孔转染12d以上时,有效抑制了人PTTG1基因的表达,在关于PTTG1基因的研究中具有较好的应用价值。

甲型H1N1流感病毒血凝素基因的原核表达及用于胶体金检测方法的研究

根据GenBank公布的甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因序列,合成HA全长基因,构建原核表达载体pET-30 Xa/LIC-HA。阳性质粒转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达。对表达蛋白进行SDS-PAGE和Western blot检测的结果表明,HA基因获得表达,产物具有免疫学活性,分子质量约64 ku,以包涵体形式存在。以纯化的重组蛋白作为抗原初步建立了双抗原夹心检测甲型H1N1流感HA抗体的胶体金方法。该方法能检测出甲型H1N1流感阳性血清,为疫苗效果的评价奠定了基础。

肠道病毒71型的诊断方法及疫苗研究述评

对肠道病毒71型的诊断方法及疫苗研究进行了综述.EV71的诊断有病毒分离培养、中和抗体滴度检测、核酸检测和免疫学检测;EV71的疫苗研究主要为国内流行的C4型毒株,经过动物模型评价研发减毒活疫苗、病毒样颗粒疫苗和针对VP1位点的重组疫苗.采用两种或两种以上诊断方法联合使用为EV71的快速诊断提供一种有效方法;而建立合适的动物模型,筛选免疫原性和交叉保护水平高的毒种,以及不同类型疫苗免疫原性比较是疫苗研究的方向.

利用冷冻切割和微量蛋白电泳技术对两种蝗虫卵细胞中蛋白质分布的研究

利用我们首创的冷冻切割和微量蛋白电泳技术及改良的超敏感染色方法，成功地对东亚飞蝗和长翅黑背蝗未受精卵细胞中蛋白质的分布进行了研究。结果表明，两种蝗虫卵细胞中的一些蛋白质存在着明显的梯度分布和区域化分布。其中，东亚飞蝗卵细胞被冷冻切割成３１份之后，对每一份样品进行微电泳。电泳图谱显示出１８条蛋白带，而其中一条表现出区域化分布；长翅黑背蝗卵细胞电泳图谱则显示出１４条蛋白带，其中有６条蛋白带呈现梯度分布，２条蛋白带呈现出区域化分布，提示这些蛋白质也许具有成形素的功能。结果还表明，冷冻切割和微量蛋白电泳技术结合改良的超敏感染色方法的建立，对于细胞水平上的生化分析和发育生物学研究尤其是性细胞的发育研究具有重要意义，它将为发育生物学研究提供强有力的工具。

食品工业有害菌检测技术研究

介绍了与食品工业有关的细菌种类,并对其检测方法进行综述。

基于高职药品生物技术专业群的虚拟仿真实训平台设计与探索

2019年1月,国务院印发《国家职业教育改革实施方案》(以下简称“职教20条”),强调要“坚持以习近平新时代中国特色社会主义思想为指导,把职业教育摆在教育改革创新和经济社会发展中更加突出的位置”,为新时代职业教育改革发展制定了总体方略。“职教20条”第一次提出要“适应‘互联网+职业教育’发展需求,运用现代信息技术改进教学方式方法,推进虚拟工厂等网络学习空间建设和普遍应用”。

应用DPO技术检测食源性致病菌的多重PCR的研究

DPO是经特殊设计的特异性引物,本研究根据单增李斯特菌的prfA gene、O157的rfb Egene和副溶血弧菌的tlgene和志贺氏菌的ipaH gene设计四对DPO引物,采用多重PCR的方法,建立了检测单增李斯特菌、大肠杆菌O157:H7、副溶血弧菌和志贺氏菌的快速检测体系。实验结果表明:该体系特异性强,操作简单,为食源性致病菌的检测提供了新型的有效手段。

荧光层析定量检测tPSA和fPSA方法研究

采用碳二亚胺(EDC)活化荧光微球,再将荧光微球与抗体进行偶联,制备同时定量检测总前列腺特异性抗原(t PSA)和游离前列腺特异性抗原(f PSA)的荧光层析试纸条,并进行性能分析和方法论对比.结果表明:该方法检测t PSA和f PSA的灵敏度分别为0.08 ng/m L和0.06 ng/m L;批内差异均小于10%,批间差异均小于15%;回收率均为95%~105%;特异性良好.该方法检测结果与电化学发光法相关性较好,可满足小型医院辅助诊断需要.

小鼠白血病细胞(MSL株)核型和SCE频率的研究

本文报道了小鼠白血病细胞(MSL株)的染色体数目和分布及形态特征。指出MSL是亚二倍体类型,其染色体众数为38(25.3%),标记染色体有三种:LM、LSM、SM。从核型特征看,MSL同已报道的小鼠肿瘤细胞有较大区别。对SCE频率的研究表明,在MSL细胞中平均每条染色体具有0.552个交换。比正常骨髓细胞的0.144个高出3.8倍。

稗属光呼吸特性的基础研究

本文对水稻和稗属植物光呼吸特性进行了比较研究。结果表明:稗属植物乙醇酸氧化酶活性较低,净光合速率较高,同室效应筛选时对低浓度CO_2的耐受力强,具有C_4植物的特点,属于低光呼吸高光效植物。可望作为选育低光呼吸植物的原始材料。

植物基因工程载体—Ri质粒

植物基因工程的发展,要求有一种简便、快速而有效的方法,以便把外源基因导入宿主植物细胞中,并尽快从转化细胞再生出完整的工程植株。为此,既要求探寻合适的外源基因载体和相应的受体,又要建立有效的转化系统。目前,这两方面都已取得了很大的进展。