miR-375靶向调控YAP表达对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:探讨miR-375靶向调控Yes相关蛋白(Yes-associated protein, YAP)的表达对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:收集2015年1月至2016年12月河南中医药大学第二附属医院普外二科行手术切除的70例肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)患者的癌组织及对应的癌旁组织标本,以及肝癌细胞系SMMC-7721、Hb611、HepG2和BEL-7405,用qPCR法检测HCC癌组织和肝癌细胞中miR-375的表达水平。双荧光素酶报告基因检测miR-375与YAP的相互作用;分析miR-375和HCC患者的临床病理特征之间的关系,MTT法检测miR-375对肝癌细胞增殖能力的影响,Transwell小室法检测抑制miR-375表达后HCC细胞侵袭能力的变化;Western blotting检测HepG2细胞中YAP的表达。建立裸鼠肝癌皮下移植瘤模型,观察抑制miR-375表达后移植瘤体积和质量的变化,免疫组化法和Western blotting检测裸鼠移植瘤中YAP的表达情况。结果:HCC组织中miR-375和YAP表达水平明显高于癌旁组织(均P<0.05),肝癌HepG2细胞中miR-375的表达水平最高(P<0.05)。miR-375能与YAP的3’UTR特异性结合,调控YAP的表达活性。抑制miR-375的表达后,HepG2细胞增殖、侵袭的能力显著减弱(均P<0.05),裸鼠移植瘤体积和质量都明显减小(均P<0.05),移植瘤组织细胞中YAP的表达水平相应下调(P<0.05)。结论:miR-375在肝癌的发生发展过程中起重要作用,可以通过靶向调控YAP的表达影响肝癌细胞的恶性生物学行为。

连翘提取物对实验性自身免疫性甲状腺炎大鼠甲状腺损伤的影响

目的:探讨连翘提取物(FSE)对实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)的影响及其可能的作用机制。方法:将90只SD大鼠分为对照组、模型组、FSE 25 mg/kg组、FSE 50 mg/kg组、FSE 100 mg/kg组和硒酵母片组(Selenious组,300μg/kg),除对照组外,其余各组大鼠均采取皮下注射含猪甲状腺球蛋白的不完全弗氏佐剂制备EAT模型,末次注射完成后FSE25 mg/kg组、FSE 50 mg/kg组、FSE 100 mg/kg组分别给予25、50、100 mg/kg FSE灌胃,Selenious组灌胃300μg/kg硒酵母片,模型组和对照组灌胃等体积生理盐水,连续灌胃2周。HE染色观察甲状腺病理学变化,放射免疫法测定甲状腺功能血清学指标,qRT-PCR检测甲状腺组织炎症相关因子的mRNA水平,ELISA检测血清氧化应激指标,Western blot检测NLRP3/Caspase-1通路蛋白表达情况。结果:对照组甲状腺泡呈椭圆形或圆形,甲状腺组织无淋巴浸润现象,模型组甲状腺泡萎缩、损伤,且伴有上皮增生和间质淋巴浸润现象,FSE(50、100 mg/kg)组、Selenious组甲状腺泡损伤、生皮质增生和炎症细胞浸润改善明显。模型组血清TgAb、TPOAb、TSH、T3、T4、蛋白质羰基、8-OHdG和MDA水平均明显高于对照组(P<0.05),甲状腺组织IL-17、IFN-γmRNA水平和NLRP3、ASC、cleaved-Caspase-1/Pro-Caspase-1及cleaved-IL-1β/Pro-IL-1β蛋白表达均高于对照组(P<0.05),而甲状腺组织中IL-4和IL-10 mRNA水平均低于对照组(P<0.05)。FSE 50 mg/kg组、FSE 100 mg/kg组和Selenious组血清TgAb、TPOAb、TSH、T3、T4、蛋白质羰基、8-OHdG及MDA水平均明显低于模型组(P<0.05),甲状腺组织中IL-17、IFN-γmRNA水平和NLRP3、ASC、cleavedCaspase-1/Pro-Caspase-1及cleaved-IL-1β/Pro-IL-1β蛋白表达均低于模型组(P<0.05),而甲状腺组织中IL-4和IL-10 mRNA水平均高于模型组(P<0.05)。结论:FSE可改善EAT大鼠甲状腺损伤,可能与调节NLRP3炎症小体和免疫失调有关。

过表达miR-149对胃癌SGC-7901细胞干样特性和肿瘤微环境以及裸鼠成瘤的影响

目的探讨miR-149对胃癌细胞干细胞样特性、炎症反应和体内裸鼠成瘤的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-149在不同的人胃癌细胞系和健康胃上皮细胞中的表达;胃癌细胞系SGC-7901分为3组:对照组(未转染组)、miR-NC组(转染miR-NC)和miR-149 mimics组(转染miR-149 mimics序列),qRT-PCR检测miR-149的表达;CCK-8检测各组SGC-7901细胞的活力;流式分选乙醛脱氢酶(ALDH)阳性细胞;Western blotting检测SGC-7901细胞中性别决定相关基因簇2(SOX2)和八聚体结合蛋白4(OCT4)的蛋白表达以及NF-κB p65的磷酸化;ELISA检测细胞上清液中白细胞介素(IL)-6和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的含量。转染miR-NC和miR-149 mimics的胃癌SGC-7901细胞分别在裸鼠皮下接种,每5 d测量肿瘤体积并记录,30 d后称量瘤重量,qRT-PCR检测瘤组织中miR-149的表达;免疫组化检测瘤组织中OCT4的表达。结果与健康人胃上皮细胞GES-1比较,胃癌细胞中miR-149的表达显著下调(P<0.05)。与对照组比较,miR-149 mimics组SGC-7901细胞中miR-149的表达明显上调,细胞活力显著下降,ALDH阳性细胞数目明显减少,SOX2和OCT4蛋白表达显著下调,NF-κB p65的磷酸化水平明显降低,细胞上清液中IL-6和iNOS的含量明显降低,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-149 mimics组裸鼠移植瘤的体积和重量明显减小(P<0.05),瘤组织中OCT4阳性细胞数目明显减少(P<0.05)。结论miR-149在胃癌中可能通过抑制干细胞样特性、细胞因子分泌和NF-κB p65的磷酸化发挥抑癌功能。