CRISPR/Cas9全基因组筛选技术在疾病治疗中的应用及在眼科应用中的展望

CRISPR/Cas9全基因组筛选技术可在全基因组范围内快速筛选具有特定生物学功能的DNA片段,不仅能反映疾病发生、发展过程中目的基因表达的变化,还能为药物进一步开发与应用提供重要依据。目前,该技术已经在肿瘤治疗、耐药性研究及病毒感染等方面得到广泛的应用。在眼科疾病研究中,CRISPR/Cas9基因编辑技术能够对目的基因进行快速精准的编辑,但目前大量编码或非编码序列的功能及疾病耐药机制仍有待进一步探究,全基因组筛选技术的应用将为其发展开辟新的道路。

恶性青光眼患者不确定感体验的质性研究

描述恶性青光眼患者的不确定感体验。采用目的抽样,解释性现象学的方法,对14名患者进行访谈,以疾病不确定性理论为理论框架,并使用Grbich的批评性话语分析(CDA)方法进行分析。恶性青光眼患者存在不同程度的心理问题,此外,信息缺乏,情绪的改变,日常生活及社会功能的改变,不确定感和生活质量下降为主要问题。青光眼患者受心理和情绪影响较大,心理症状较重,及时进行心理干预,减轻其不确定感可能会改善这类人群的生活质量。

RNA干扰抑制BAG-1基因表达对皮肤鳞状细胞癌增殖及凋亡的影响研究

目的:探讨抑制BAG-1(Bcl-2-associated athanogene-1)基因表达对皮肤鳞状细胞癌增殖及凋亡的影响。方法:采用LipofectamineTM2000将BAG-1的siRNA转染皮肤鳞状细胞癌A431,转染后48 h,RT-PCR检测BAG-1的mRNA表达,Western blot检测BAG-1的蛋白表达;CCK8和流式细胞仪分别检测细胞增殖和凋亡情况;Western blot检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)家族促凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)及Wnt/β-catenin信号通路β-连环蛋白(β-catenin)、Survivin的蛋白表达;ELISA试剂盒检测白介素6(IL-6)、血管内皮生长因子(VEGF)含量。结果:与空白组和阴性对照组比较,转染BAG-1的siRNA可明显抑制BAG-1在转录和翻译水平上的表达;与空白组比较,BAG-1-siRNA组细胞增殖显著降低,细胞凋亡率显著增加,Bax蛋白表达上调,β-catenin、Survivin蛋白表达下调,IL-6、VEGF含量均显著降低(P<0.05)。结论:BAG-1表达沉默可降低皮肤鳞状细胞癌增殖,促进细胞凋亡,上调Bax及下调Wnt/β-catenin信号通路表达,降低IL-6、VEGF因子的分泌。

LncRNA-MIAT靶向miR-150-5p对病理性血管化角膜及VEGF、MMP-9的影响

目的探讨长链非编码核糖核酸心肌梗死相关转录本(LncRNA-MIAT)靶向miR-150-5p对病理性血管化角膜血管内皮生长因子(VEGF)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的影响。方法100只大鼠随机分为对照组、模型组、MIAT-NC组、MIAT组和sh-MIAT组,除对照组外,其余大鼠以碱烧伤法建立角膜血管化模型。实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测大鼠角膜组织中LncRNA-MIAT和miR-150-5p相对表达情况;双荧光素酶实验验证LncRNA-MIAT和miR-150-5p的靶向关系;ELISA检测大鼠角膜组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-8水平;HE染色观察大鼠角膜组织中血管病理变化;Western blot检测大鼠角膜组织中VEGF、MMP-9相对表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠角膜组织中LncRNA-MIAT相对表达水平,TNF-α、IL-6、IL-8水平,VEGF和MMP-9蛋白相对表达量均升高,miR-150-5p相对表达水平降低(均为P<0.05);与模型组和MIAT-NC组比较,MIAT组大鼠角膜组织中LncRNA-MIAT相对表达水平,TNF-α、IL-6、IL-8水平,VEGF和MMP-9蛋白相对表达量均升高,miR-150-5p相对表达水平降低(均为P<0.05),sh-MIAT组上述指标与MIAT组呈相反趋势(均为P<0.05)。双荧光素酶实验结果显示,LncRNA-MIAT可靶向调控miR-150-5p表达。结论LncRNA-MIAT可促进VEGF、MMP-9的表达,加速角膜血管化的发生,其机制可能与抑制miR-150-5p的表达有关。

siRNA靶向下调RhoA基因对慢性高眼压小鼠视功能的保护作用

目的探究RNA干扰技术对青光眼视觉功能恢复的可行性。方法通过构建慢性高眼压小鼠模型并进行玻璃体腔注射RhoA siRNA(siRhoA)以干扰RhoA的表达,分别采用闪光视觉诱发电位(f-VEP)、定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot法对小鼠视觉功能、视网膜组织中RhoA基因和RhoA蛋白的表达情况进行检测。结果玻璃体腔注射后,siRhoA组小鼠患眼f-VEP P波、N波潜伏期和P波振幅逐渐恢复,相较NC siRNA和PBS组差异有统计学意义(P<0.05),NC siRNA和PBS组小鼠患眼f-VEP的P波和N波潜伏期延长,P波振幅降低(P<0.05)。此外,qRT-PCR和Western blot结果显示,经siRhoA处理后,慢性高眼压模型小鼠患眼视网膜组织RhoA基因和RhoA蛋白表达量与对侧眼相比差异无统计学意义(P>0.05);而NC siRNA和PBS组视网膜组织RhoA基因和RhoA蛋白表达量相较对侧眼差异有统计学意义(P<0.05)。结论本研究构建了慢性高眼压模型小鼠,并通过siRNA技术干扰了RhoA的活性,有效改善了青光眼模型小鼠视觉功能等,为基因途径治疗青光眼等疾病奠定了初步基础。

lncRNA MEG3对视网膜母细胞瘤细胞增殖与迁移的作用及其机制研究

目的探讨长链非编码RNA母系表达基因3(lncRNA MEG3)对视网膜母细胞瘤(RB)细胞增殖、迁移的作用及其机制研究。方法将对数生长期的人RB细胞分为对照组(不做任何处理)、NC组(含lncRNA MEG3-NC无序干扰序列的pcDNA3.1质粒)、lncRNA MEG3组(含lncRNA MEG3序列的pcDNA3.1质粒)、激活剂组(含lncRNA MEG3序列的pcDNA3.1质粒+Wnt/β-catenin通路激活剂LiCl)。利用RT-qPCR检测各组RB细胞中lncRNA MEG3的相对表达水平;CCK-8法检测lncRNA MEG3对RB细胞增殖的抑制作用;Transwell法检测lncRNA MEG3对RB细胞迁移的影响,RT-PCR检测各组RB细胞中Wnt1、β-catenin、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)mRNA相对表达水平;Western blot检测各组RB细胞中Wnt1、β-catenin、Cyclin D1蛋白相对表达水平。结果对照组、NC组、lncRNA MEG3组和激活剂组RB细胞中lncRNA MEG3相对表达水平分别为0.81±0.27、0.78±0.26、3.88±0.39、3.76±0.38。与对照组和NC组相比,lncRNA MEG3组和激活剂组RB细胞中lncRNA MEG3相对表达水平均升高(均为P<0.05)。与NC组相比,lncRNA MEG3组RB细胞培养24 h、48 h、72 h细胞增殖抑制率逐渐升高(均为P<0.05);与lncRNA MEG3组相比,激活剂组RB细胞培养24 h、48 h、72 h细胞增殖抑制率逐渐降低(均为P<0.05)。NC组、lncRNA MEG3组、激活剂组RB细胞增殖抑制率均随时间延长而升高(均为P<0.05)。与对照组和NC组相比,lncRNA MEG3组和激活剂组RB细胞迁移数均明显减少(均为P<0.05);与lncRNA MEG3组相比,激活剂组RB细胞迁移数增多(P<0.05)。与对照组和NC组相比,lncRNA MEG3组和激活剂组RB细胞中Wnt1、β-catenin、Cyclin D1 mRNA和蛋白相对表达水平均明显降低(均为P<0.05);与lncRNA MEG3组比较,激活剂组RB细胞中Wnt1、β-catenin、Cyclin D1 mRNA和蛋白相对表达水平均有升高(均为P<0.05)。结论过表达lncRNA MEG3可抑制人RB细胞增殖及迁移,其可能是通过阻断Wnt/catenin通路发挥作用的。

急性视网膜坏死综合征患眼视力预后的影响因素分析

目的 探讨急性视网膜坏死综合征(ARNS)患眼视力预后的影响因素。方法 回顾性分析31例(37眼)ARNS患者的临床资料,根据末次随访时最佳矫正视力(BCVA)将患眼分为A组(BCVA≥0.1)24眼和B组(BCVA<0.1)13眼。比较2组人口学特征、基线眼部症状、治疗方式等参数的差异,采用Logistic回归分析明确ARNS患眼视力预后的危险因素,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线进行验证。结果 35.14%(13/37)的患眼末次随访时BCVA<0.1,视网膜脱离(RD)发生率为51.35%(19/37)。行玻璃体切割术治疗的20眼中,远期视网膜解剖结构复位率高达95.00%。相较于视力预后较差的B组,A组初诊BCVA较好,病变较少累及黄斑,RD发生率低,玻璃体炎症程度轻,坏死性视网膜炎多累及3区周边部,且眼底视网膜坏死面积小,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,较差的初诊BCVA(OR=0.066, 95%CI:0.007~0.665,P=0.021)、发生RD(OR=0.011, 95%CI:0.001~0.341,P=0.010)是ARNS患眼视力预后不良的独立危险因素。ROC曲线显示,RD(AUC=0.840, 95%CI:0.709~0.970)预测ARNS患眼视力预后不良的效能优于初诊BCVA(AUC=0.772, 95%CI:0.595~0.950)。结论 初诊BCVA、是否发生RD是ARNS患眼视力预后的影响因素。

低氧诱导小胶质细胞代谢进程紊乱的转录组测序分析

目的利用转录组测序技术和生物信息学分析方法研究低氧对小胶质细胞系BV_(2)细胞基因表达水平的影响,探讨低氧诱导BV_(2)细胞代谢紊乱的分子机制。方法分别对1%(体积分数)低氧和21%(体积分数)常氧处理12 h和24 h的BV_(2)细胞进行转录组测序,采用生物信息学分析方法筛选显著差异表达基因(DEGs),并对显著DEGs进行聚类分析、基因本体(GO)功能注释分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析及蛋白质相互作用网络(PPI)分析。使用Cytoscape软件筛选与代谢相关的排名前10位的关键基因。利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)对关键基因进行验证。结果低氧处理12 h共筛选860个显著DEGs(|log_(2)FC|≥1,Q≤0.05),其中672个上调基因,188个下调基因。KEGG和GO分析发现低氧处理后显著DEGs显著富集在细胞周期、HIF-1信号通路、Rap1信号通路、碳代谢、糖酵解/糖异生、果糖和甘露糖代谢、淀粉和蔗糖代谢及氨基酸等代谢进程。低氧组处理24 h共有587个显著DEGs(|log_(2)FC|≥1,Q≤0.05),其中498个上调基因,89个下调基因。KEGG和GO分析显示低氧处理后显著DEGs显著富集在HIF-1信号通路、TGF-β信号通路、IL-17信号通路、糖酵解/糖异生、果糖和甘露糖代谢、淀粉和蔗糖代谢和氨基酸等代谢进程。低氧分别处理12 h和24 h,显著DEGs中有410个相同基因,410个相同基因中与代谢相关的前10个关键基因是PFKL、TPI1、PFKP、PGK1、ALDOART1、HK2、GPI1、ALDOA、ALDOC、GAPDH。RT-qPCR结果显示,低氧能够促进PFKL、TPI1、PFKP、PGK1、GPI1、ALDOC等代谢相关基因的表达。结论低氧可诱导BV_(2)细胞代谢发生紊乱,这可能主要和PFKL、TPI1、PFKP、PGK1、GPI1、ALDOC等基因表达异常相关。

过敏原对过敏性鼻炎患者外周血CD4^(+)Th17细胞IL-18、IL-18结合蛋白a和IL-18受体α表达水平的影响

目的分析过敏性鼻炎(allergic rhinitis,AR)患者外周血CD4^(+)Th17细胞中IL-18、IL-18结合蛋白a(IL-18-binding protein a,IL-18BPa)和IL-18受体α(IL-18 receptorα,IL-18Rα)的表达水平及过敏原对其表达的影响。方法选择2019年10月—2020年9月锦州医科大学附属第一医院过敏反应科门诊AR患者45例和该医院体检中心体检者23例(健康对照组)为研究对象。根据皮肤点刺试验结果,将患者分为阳性组(AR组,24例)和阴性组(nAR组,21例)。收集受试者血液样本,流式细胞术检测过敏原对CD4^(+)Th17细胞中IL-18、IL-18BPa和IL-18Rα蛋白质表达水平的影响。Bioplex检测血浆中IL-17A水平,并分析其与IL-18^(+)Th17细胞比例的相关性。结果与健康对照组比较,AR组患者CD4^(+)Th17细胞和IL-18^(+)Th17细胞比例均增加(P<0.01),IL-18BPa+Th17细胞比例降低(P<0.01),IL-18BPa的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)增加(P<0.01),IL-18Rα的MFI降低(P<0.01);nAR组患者CD4^(+)Th17细胞IL-18BPa的MFI增加(P<0.0001),IL-18Rα的MFI降低(P<0.0001)。与nAR组患者比较,AR组患者IL-18^(+)Th17细胞比例(P<0.05)和IL-18Rα的MFI均增加(P<0.01)。户尘螨和梧桐花粉过敏原粗提液能分别诱导AR组患者IL-18^(+)Th17和IL-18BPa+Th17细胞比例增加(P<0.05)。户尘螨过敏原粗提液可直接诱导分选后的健康对照者CD4^(+)Th17细胞表达IL-18和IL-18Rα(P<0.05)。AR组患者血浆IL-17A水平升高(P<0.001),并与IL-18^(+)Th17细胞比例中度相关(P<0.05)。结论过敏原可能通过诱导外周血CD4^(+)Th17细胞表达IL-18和IL-18Rα参与AR发病。

真性晶状体囊膜剥脱伴年龄相关性黄斑变性一例

一例77岁男性,双眼视力下降3年。散瞳后双眼前房可见剥脱的、透明的前膜,随眼球转动而飘动,诊断为真性晶状体囊膜剥脱合并有年龄相关性黄斑变性。

头盔式眼球运动训练联合云南白药对眼眶骨折术后视力恢复及疼痛缓解的效果

目的:探讨头盔式眼球运动训练联合云南白药对眼眶骨折术后视力恢复及疼痛缓解的效果。方法:以随机抽签法将2020年3月—2021年4月我院收治的84例眼眶骨折患者分为对照组和观察组,每组42例。两组均行眼眶骨折修复术,对照组术后施以常规的眼球训练方法和抗炎、消肿治疗,观察组则给予头盔式眼球运动训练联合云南白药治疗。比较两组训练前和训练后1周、1个月、3个月的复视分级情况、静态立体视功能以及疼痛程度(VAS评分)。结果:观察组训练后1个月和3个月复视占比低于对照组,阳性占比高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组训练后1周、1个月、3个月VAS评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:头盔式眼球运动训练联合云南白药能有效改善眼眶骨折患者术后的视功能水平,促进静态立体视功能的恢复,同时有利于减轻患者疼痛。

1例纤溶酶原缺乏症合并木样结膜炎患儿的护理

总结1例纤溶酶原缺乏症合并木样结膜炎患儿的护理经验。护理要点:实施个体化用药管理,规范药物配置和使用;设计针对性的病情评估表,持续评估患儿病情;加强营养指导与儿童保健干预,促进患儿生长发育;重视患儿及其家长的心理护理,减轻负性情绪;开展个体化出院指导及延续性护理,提高患儿家长对疾病的管理能力。经过9 d的精心治疗和护理,患儿好转出院,在持续随访的31个月内,患儿病情稳定。

糖尿病视网膜病变的机制和细胞模型研究进展

糖尿病视网膜病变是成年人低视力和致盲的主要原因。一个合理的体外模型不仅能模拟疾病的发生发展机制,而且能减少经济投入,因此筛选和构建合适的体外模型是研究的关键。论文围绕糖尿病视网膜病变探讨了炎症反应、细胞凋亡、血管功能障碍和神经血管单元的破坏等相关机制,总结了内皮细胞、周细胞、视网膜色素上皮细胞、神经胶质细胞等建立的几种模型,以期为糖尿病视网膜病变机制研究及相应的药物研发提供有益的参考。

巴布亚新几内亚视力特异性生活质量量表的汉化及信效度检验

目的汉化巴布亚新几内亚视力特异性生活质量量表(PNG-VS QoL),并检验其信度和效度。方法通过翻译、回译、跨文化调试及预调查,形成中文版PNG-VS QoL。采用便利抽样法,选取2023年7—9月河南省立眼科医院收治的视力损伤患者为研究对象。采用中文版PNG-VS QoL进行调查,检验量表的信度和效度。结果共发放问卷440份,剔除部分不符合逻辑、多项选择的无效问卷后,回收有效问卷435份,问卷有效回收率为98.86%。探索性因子分析结果显示,中文版PNG-VS QoL提取出2个公因子,累积方差贡献率为73.651%。中文版PNG-VS QoL的Cronbach'sα系数为0.934,2个维度的Cronbach'sα系数分别为0.934、0.925。条目水平的内容效度指数(CVI)为0.800~1.000,量表水平的CVI/Ave为0.910。验证性因子分析结果显示,χ2/df为1.533,TLI为0.985,CFI为0.992,RMSEA为0.043。结论中文版PNG-VS QoL具有良好的信效度,适用于评估视力损伤患者的生活质量。