抗程序性死亡因子-1与OK432联合治疗在小鼠肝细胞肝癌中的抗肿瘤作用

目的观察抗程序性死亡因子-1(PD-1)与OK432联合治疗在小鼠肝细胞肝癌中的抗肿瘤作用, 并探索其抗肿瘤机制。方法 8~10周龄C57BL/6雄性小鼠分别构建H22小鼠肝癌皮下移植瘤模型和腹水瘤模型, 监测小鼠肿瘤大小和生存, 流式细胞术、ELISPOT和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测腹水中干扰素γ(IFN-γ)、CD8^(+)T、NK和程序性死亡因子配体1(PD-L1)^(+)细胞, 评价肿瘤微环境中免疫活化与淋巴细胞浸润;使用NK1.1和CD8a抗体清除荷瘤小鼠NK和CD8^(+)T细胞, 监测小鼠生存, 评价CD8^(+)T和NK细胞在治疗中的作用。生存统计使用Log-rank检验, 组间计量数据统计采用One-way ANOVA方法。结果 OK432+抗PD-1组与CON组、OK432组和抗PD-1组比较肿瘤生长显著抑制(F=19.000, P<0.01);OK432+抗PD-1组小鼠中位生存期35 d显著长于CON组的15 d、OK432组的21 d和抗PD-1组的21 d(χ^(2)=21.680, P<0.01)。OK432+抗PD-1组IFN-γ斑点数量[(319.7±48.4)个]远多于CON组[(8.8±8.9)个]、OK432组[(173.2±38.6)个]和抗PD-1组[(172.2±18.9)个, F=82.330, P<0.01];OK432+抗PD-1组腹水中CD8^(+)T和NK细胞比例分别为(14.57±2.52)%和(6.52±1.43)%远高于CON组[(1.35±0.46)%和(0.85±0.54)%]、OK432组[(8.62±2.87)%和(4.04±0.7)%]、抗PD-1组[(5.57±2.23)%和(2.86±1.37)%, CD8^(+)T:F=31.240, P<0.01和NK:F=23.870, P<0.01];OK432+抗PD-1组腹水中IFN-γ浓度为(1 434±407) pg/ml, 显著高于CON组[(306±151) pg/ml]、OK432组[(1 180±565) pg/ml]和抗PD-1组[(649±130) pg/ml, F=9.837, P<0.01];OK432+抗PD-1组腹水中PD-L1^(+)细胞的比例为(22.68±5.43)%, 显著高于CON组[(2.09±0.64)%]、OK432组[(15.16±3.17)%]和抗PD-1组[(9.03±0.97)%, F=37.670, P<0.01]。NK或CD8^(+)T细胞清除后OK432+抗PD-1+抗NK1.1组和OK432+抗PD-1+抗CD8a组小鼠生存期分别为32 d和21 d、CON组18 d、OK432+抗PD-1组34 d, OK432+抗PD-1+抗NK1.1组与OK432+抗PD-1组比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.004, P>0.05), OK432+抗PD-1+抗CD8a组与OK432+抗PD-1组比较差异有统计学意义(χ^(2)=14.520, P<0.01)。结论 OK432与抗PD-1联合治疗能够显著抑制小鼠肝癌移植瘤的生长, 延长小鼠生存期, 增强抗PD-1治疗的有效性;OK432与抗PD-1联合治疗抗肿瘤作用主要依赖于CD8+T细胞。