构建C5orf13基因慢病毒载体对SGC-7901细胞恶性生物学行为的影响

目的构建5号染色体开放阅读框13(chromosome 5 open reading frame 13,C5orf13)基因siRNA慢病毒载体,探讨其对胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法针对人C5orf13基因设计3个不同的siRNA靶点,构建重组质粒,包装GV115慢病毒。取对数生长期SGC-7901细胞,分为KD1组、KD2组、KD3组和阴性对照组,前3组分别转染3个不同siRNA靶点的GV115慢病毒,阴性对照组转染阴性对照慢病毒。转染72 h,用嘌呤霉素筛选稳转细胞株,4组转染效率均>90%时,采用实时荧光定量PCR法检测4组细胞C5orf13 mRNA相对表达量,筛选出表达最低的KD2组细胞为C5orf13敲低组。取SGC-7901细胞为空白对照组。采用MTT实验检测空白对照组、阴性对照组、C5orf13敲低组转染后培养0、24、48、72、96 h时细胞增殖吸光度(optical density,OD)值,采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力,采用Transwell小室实验检测细胞侵袭能力。结果KD1组(0.45±0.04)、KD2组(0.25±0.02)、KD3组(0.49±0.04)细胞C5orf13 mRNA相对表达量均低于阴性对照组(1.00±0.04)(P<0.05),KD1组、KD3组均高于KD2组(P<0.05),KD1组与KD3组比较差异无统计学意义(P>0.05)。空白对照组、阴性对照组、C5orf13敲低组转染后培养0 h时细胞增殖OD值比较差异无统计学意义(P>0.05);C5orf13敲低组转染后培养24、48、72、96 h时细胞增殖OD值(0.30±0.01、0.51±0.03、0.62±0.03、0.93±0.13)均低于空白对照组(0.36±0.03、0.64±0.03、0.81±0.04、1.39±0.10)和阴性对照组(0.36±0.02、0.63±0.02、0.79±0.05、1.30±0.07)(P<0.05),空白对照组与阴性对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。C5orf13敲低组细胞迁移率[(0.24±0.01)%]及侵袭率[(3.07±0.13)%]均低于空白对照组[(0.41±0.05)%、(4.91±0.66)%]和阴性对照组[(0.38±0.03)%、(4.70±0.23)%](P<0.05),空白对照组与阴性对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论构建的C5orf13基因siRNA慢病毒载体可明显下调SGC-7901细胞C5orf13表达,抑制SGC-7901细胞增殖、迁移及侵袭能力。