2010—2020年河南省某三甲医院临床病原菌分布及耐药性分析

目的探讨2010—2020年河南省某三甲医院临床病原菌的分布情况及耐药性,为医院感染的防控及临床合理使用抗菌药物提供参考。方法收集2010年1月至2020年12月医院临床分离病原菌分布及耐药性相关数据,根据美国临床和实验室标准化协会标准判读药敏结果,用WHONET 5.6软件进行数据分析。结果2010—2020年共收集细菌总数为166776株,其中革兰氏阴性菌113284株(67.93%),革兰氏阳性菌53492株(32.07%)。排名前5位的分别是大肠埃希菌30456株(18.26%),肺炎克雷伯菌22643株(13.58%),铜绿假单胞菌17477(10.48%),鲍曼不动杆菌17157(10.29%),金黄色葡萄球菌14687(8.81%)。金黄色葡萄球菌对青霉素平均耐药率达96.10%(95.60%~96.60%),几乎未检测出耐万古霉素的金黄色葡萄球菌,利奈唑胺的耐药率小于1.0%。2010-2020年大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌对亚胺培南和美罗培南的平均耐药率分别是1.88%(0.50%~3.50%)、24.29%(1.60%~48.60%)、25.20%(21.80%~25.90%)、84.27%(70.20%~92.50%),尤其是肺炎克雷伯菌的耐药率逐年上升。结论细菌耐药情况日趋严重,其中肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类的耐药率持续上升,为临床抗感染治疗带来很大挑战,医院临床应高度重视,加强防控措施和抗菌药物的合理使用,做好细菌的耐药监测,保障医疗安全。

动态监测血清PCT、SAA、IgE对ICU脓毒症急性肾损伤患儿病情程度的评估价值及临床意义

目的 观察血清降钙素原(PCT)、淀粉样蛋白A(SAA)、免疫球蛋白E(IgE)动态水平对ICU脓毒症急性肾损伤(AKI)患儿病情程度的评估价值及临床意义。方法 回顾性选取2022年3月至2023年3月河南省儿童医院重症监护室(ICU)收治的180例脓毒症患儿,根据是否发生AKI,分为AKI组(112例)、非AKI组(68例)。比较两组一般临床资料[性别、年龄、诱因、感染部位、急性生理学及慢性健康Ⅱ(APACHEⅡ)评分、序贯器官衰竭评估(SOFA)评分],比较两组血清PCT、SAA、IgE水平,分析脓毒症患儿发生AKI的影响因素,ROC分析血清PCT、SAA、IgE水平联合检测对发生AKI的预测价值。结果 AKI组APACHEⅡ、SOFA评分高于非AKI组(P<0.05);两组不同时间点血清PCT、SAA、IgE水平比较,AKI组高于非AKI组,入院第1天>入院第3天>入院第7天,且各指标水平与APACHEⅡ评分、SOFA评分呈正相关(P<0.05);APACHEⅡ评分、SOFA评分、入院第7天血清PCT、SAA、IgE水平是脓毒症患儿发生AKI的危险因素(OR>1,P<0.05),且入院第7天血清各指标水平联合预测脓毒症患儿发生AKI的AUC为0.859。结论 血清PCT、SAA、IgE水平与AKI病情严重程度密切相关,各指标联合检测对脓毒症患儿发生AKI具有较高预测价值,可作为临床判断病情、预测是否发生AKI的有效指标。

临床微生物检验自动化流水线应用专家共识

全自动微生物自动化流水线在我国的应用尚处于起步阶段, 缺乏临床微生物检验自动化流水线应用的相关标准。为推进自动化技术的发展, 中华医学会检验医学分会和中国医学装备协会检验医学分会组织制定了《临床微生物检验自动化流水线应用专家共识》。共识围绕自动化流水线的临床应用问题, 讨论了应用前期需要考虑的实际要素, 评价了应用过程中流水线的技术特点, 特别指出应用后实验室面临的检验流程再造等问题, 最后提出实施微生物自动化流水线的挑战和展望。该共识为推动医学检验自动化仪器的应用, 临床微生物检验由传统手工操作转向自动化检测的变革提供指导。

X连锁慢性肉芽肿病临床特征与基因诊断

目的分析X连锁慢性肉芽肿病(X⁃CGD)的临床特征与实验室诊断方法。方法分析郑州大学附属儿童医院河南省儿童医院血液肿瘤科2015年10月至2019年5月间收治的11例X⁃CGD患者的临床资料,对患者与家系成员进行中粒细胞呼吸爆发及基因检查。结果患者中性粒细胞呼吸爆发试验显示中性粒细胞活化率均<10%,其中6例患者母亲及3例患者姐姐呈现双峰表型;所有患者经Sanger测序均显示为CYBB基因突变,其中5例为自发突变、6例为X连锁突变;家系分析显示CYBB基因突变来自母亲,由母亲X染色体遗传,其中女儿为携带者,男性多发病;随访结果显示控制感染可延长存活,造血干细胞移植治疗可恢复中性粒细胞呼吸爆发功能。结论X连锁慢性肉芽肿病临床起病早,反复感染常见;可采用流式细胞术行中性粒细胞呼吸爆发实验有助于疾病的快速筛查,但临床确诊仍依赖基因诊断,同时基因诊断有助于明确患者家系成员基因型,明确遗传方式,为遗传咨询及产前诊断提供依据。

2015-2017年河南省主要革兰阴性菌耐药性变迁

目的了解河南省医院临床分离革兰阴性菌的分布及对常用抗菌药物的耐药性。方法收集2015—2017年河南省89家细菌耐药监测网成员单位上报的细菌鉴定和常规药敏的试验结果数据,用whonet5.6软件分析细菌流行及耐药情况。结果3年共收集到296293株革兰阴性菌的细菌鉴定和常规药敏的试验结果数据,前5位分离菌株依次为:大肠埃希菌(27.6%,81850株)、肺炎克雷伯菌(20.5%,60598株)、铜绿假单胞菌(13.1%,38894株)、鲍曼不动杆菌(11.4%,33766株)和阴沟肠杆菌(3.2%,9545株)。大肠埃希菌的耐药性呈下降趋势,肺炎克雷伯菌耐药率呈上升趋势,肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类耐药株由12.4%上升至23.4%。铜绿假单胞菌耐药率有所下降。鲍曼不动杆菌耐药率持续较高,尤其对碳青霉烯类的耐药率一直维持在75%以上。阴沟肠杆菌耐药率呈现下降趋势。结论河南省2015—2017年临床分离的肠杆菌科对碳青霉烯类抗菌药物的耐药率呈上升趋势。

高通量技术在重症肺炎患者呼吸道病原体快速检测中的应用

目的探讨不依赖序列的单引物扩增技术结合Ion Torrent高通量测序平台对重症肺炎患儿呼吸道肺泡灌洗液进行病毒病原体宏基因组检测的效果。方法取临床重症肺炎患者肺泡灌洗液标本,进行病毒基因组核酸DNA/RNA的提取,随机引物扩增建库后,进行Ion Torrent高通量测序分析,测序结果进行本地blast分析筛选病毒序列,运用MetaVir数据库进行病毒归类分析。结果一共获得591 593条序列读长,病毒序列3 545条,占0.6%,其中主要病毒及序列有腺病毒1 760条(49.6%),淋巴囊肿疾病病毒1 422条(40.1%),Taterapox病毒65条(1.8%),智利巨型病毒37条(1.0%),云杉卷蛾雕背姬蜂病毒33条(0.9%),猫白血病病毒32条(0.9%),网状内皮组织增生证病毒30条(0.8%),RD114逆转录病毒18条(0.5%);呼吸道病原体荧光定量聚合酶链反应结果为腺病毒7型,提示患者腺病毒7型感染。结论该研究初步建立的病毒宏基因组分析技术平台可用于呼吸道相关已知和未知病毒病原体鉴定。

牛乳蛋白敏感的婴儿湿疹患者生长发育过程中体内牛乳蛋白sIgE及血清总IgE的变化

目的:分析对牛乳蛋白过敏的婴儿湿疹患者在生长发育过程中特异性牛乳蛋白sIgE、血清总IgE和皮损表现的变化。方法:回顾性分析2015年7月至2020年7月57例严重婴儿湿疹患儿,观察期间(30个月)食用乳蛋白配方奶粉(氨基酸配方),严格规避牛乳蛋白及其制品,于入组开始和结束时评估患儿皮损积分,检测患儿血清牛乳蛋白sIgE和总IgE表达水平。结果:观察结束时,患儿皮损SCORAD积分从入组时的(56.98±10.24)分下降至(6.17±5.03)分,差异有统计学意义(t=29.08,P<0.01);牛乳蛋白sIgE值从入组时的(16.50±9.87)kU/L下降至(2.05±1.70)kU/L,差异有统计学意义(t=11.04,P<0.01);血清总IgE较同龄儿童正常值高限升高倍数从(11.99±5.35)倍下降至(4.50±1.08)倍,差异有统计学意义(t=10.51,P<0.01);45例患儿转常规奶粉成功,平均用时4.57个月。结论:大部分对牛乳蛋白过敏的严重湿疹患儿,经过正确治疗以及长时间规避牛乳蛋白后,其症状会减轻或消退,体内特异性牛乳蛋白sIgE水平和血清总IgE下降。

保存温度和时间对外周血样本染色体制备的影响

目的 探索外周血样本保存温度和保存时间对染色体G显带核型制备效果的影响。方法 以有核细胞数、有丝分裂指数和分裂相细胞数作为评价指标,分别对4℃和室温(RT,18~22℃)条件下,保存不同时间(0、3、5、7 d)的外周血样本染色体制备效果进行评估。结果 4℃或RT条件下,收获的有核细胞数量均随着样本保存时间的延长而减少。与新鲜外周血样本相比,4℃保存7 d以内或RT保存3 d以内的样本,有丝分裂指数分别为6.2 (1.8)%vs 7.2(1.9)%、8.2(2.0)%vs 7.2(1.9)%;4℃条件下保存3 d的样本,有丝分裂指数为9.7(2.9)%vs 7.2(1.9)%,以上差异均没有统计学意义(P>0.05)。4℃保存7 d以内或RT保存3 d以内的样本,均可获得足够数量的分裂相细胞用于染色体核型分析,其中4℃保存3 d以内的样本收获的分裂相细胞与新鲜样本相比,差异没有统计学意义[10.7(3.2)×104vs 11.4(3.5)×104,P>0.05]。结论 4℃保存7 d以内或RT保存3 d以内的外周血样本,均可以进行染色体核型制备。

感染相关床旁即时检验

快速诊断是防控感染性疾病的重要环节。床旁即时检验(point-of-care testing,POCT)具有便携、快速、易操作、智能灵敏等特点,近年来已广泛用于感染性疾病病原微生物、宿主生物标记物、微生物药物敏感性检测等方面,对疾病流行病学的监测与管理、合理使用抗生素意义重大。本文概述了POCT在儿科感染性疾病诊治中的应用。

单纯性肥胖儿童血糖、血脂及内分泌激素水平分析

目的探讨单纯性肥胖儿童血糖、血脂及内分泌激素水平变化。方法选取2017年10月至2019年6月间本院收治的单纯性肥胖儿童180例为观察组;同期在本院体检的正常体重健康儿童180例为对照组。测定两组空腹血糖、糖化血红蛋白、胰岛素、皮质醇、游离甲状腺激素、促甲状腺素、生长激素以及血脂指标水平,计算胰岛素抵抗指数。结果观察组空腹血糖、糖化血红蛋白、胰岛素水平以及胰岛素抵抗指数均明显高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。观察组总胆固醇(4.80±0.74)mmol/L、甘油三酯(1.72±0.45)mmol/L、低密度脂蛋白(3.59±0.54)mmol/L均明显高于对照组,高密度脂蛋白明显低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。观察组皮质醇水平明显高于对照组,生长激素水平明显低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论单纯性肥胖儿童体内存在糖脂代谢异常、内分泌紊乱及生长激素减少的现象,可对儿童生长发育和慢性病的防控带来不利影响。

结核分枝杆菌多表位诊断抗原的制备

将结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)多个B细胞预测表位串联表达(命名为B102),并初步评价其作为诊断抗原的血清学诊断价值。将MtbPstS1、ESAT6、CFP10、Ag85B、Ag85A及PPE54等6个蛋白的11个B细胞预测表位串联,加入合适的连接臂后全基因合成;将多表位片段插入带有TRX标签的表达质粒中,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并利用Ni^(2+)-Chelating亲和层析和DEAE阴离子交换层析纯化目的蛋白;利用Western blotting (WB)技术对目的蛋白抗原性进行鉴定,并建立Mtb抗体检测竞争法ELISA技术,初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力。目的蛋白以包涵体形式存在,其表达量约占菌体总蛋白的31.25%,经纯化及复性后蛋白B102可溶性存在,浓度为3.124mg/mL,纯度为96.71%;WB实验表明目的蛋白能与Mtb阳性血清相应抗体发生反应。对60份Mtb阳性血清及60份Mtb阴性血清进行检测得出其灵敏度为90.00%,特异性为93.33%,阳性预测值为93.10%,阴性预测值为90.32%,符合率为91.67%,McNemer检验的结果提示与"金标准"诊断结果无差异,Kappa=0.833,提示两种方法诊断结果一致性优异。原核表达与层析纯化可以获取抗原性优异的Mtb多表位诊断抗原,作为诊断抗原可以应用于Mtb的血清学检测中。

风疹病毒结构蛋白多免疫显性区域诊断抗原的制备及其诊断效能评价

对串联风疹病毒(Rubella virus,RV) 3个结构蛋白6个免疫显性区域进行制备(命名为B103),并将其应用于血清学诊断中。选取RV C aa 1–30 & aa 96–123、E2 aa 31–105和E1 aa 11–39 & aa 154–277 & aa 389–412等6个免疫显性区域,将其串联并基因合成;将此基因片段插入TRX和His标签之间构建表达质粒;蛋白B103在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并利用Streamline Chelating亲和层析和DEAE阴离子交换层析纯化目的蛋白,Sephadex G-25分子筛分析其折叠情况及均一性;利用免疫印迹技术对蛋白B103的抗原性进行鉴定,并建立RV-IgM抗体捕获法ELISA检测技术,初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力。蛋白B103以可溶性形式表达,其表达量约占菌体总蛋白的18.57%,经纯化后蛋白B103浓度为3.026 mg/mL,纯度为95.35%;免疫印迹实验表明蛋白B103能与RV急性期血清发生反应;对40份RV急性期血清及40份RV阴性血清进行检测发现可以很好地鉴别阴阳性血清标本;其灵敏度为92.50%,特异性为95.00%,阳性预测值为94.87%,阴性预测值为92.68%,符合率为93.75%,McNemer检验的结果提示与“金标准”诊断结果无差异,kappa=0.900,提示两种方法诊断结果一致性优异。原核表达与层析纯化可以获取抗原性优异的RV血清学诊断抗原,可以应用于RV早期诊断中。

全外显子组测序检测先天性外胚层发育不良一例及家系分析

目的对1例反复高热疑似为少汗型外胚层发育不良的患儿进行基因检测,以明确其病因。方法应用医学全外显子组测序技术(whole exome sequencing,WES)检测患者基因组内的单核苷酸变异,用低深度全基因组测序技术(low-coverage massively parallel copy number variation sequencing,CNV-seq)对WES检测的结果进行验证,应用PCR和实时荧光定量PCR技术检测患者及母亲EDA基因第3~8外显子的缺失情况。结果WES检测提示患儿chrX:69243016-69395730区可能存在半合子缺失。CNV-seq检测提示患儿Xq13.1区存在约0.12 Mb的缺失,缺失范围涉及EDA基因。PCR检测确认患儿EDA基因第3~8外显子存在半合子缺失,其母亲未见相同缺失。结论患儿为EDA基因第3~8外显子半合子缺失变异所致的少汗型外胚层发育不良患者,可能为新发变异或其母亲为生殖腺嵌合体。WES和CNV-seq技术对于诊断罕见疾病中具有较高的价值。

不同分子检测策略诊断手足口病住院患儿肠道病毒的一致性

目的本研究旨在了解单纯实时荧光定量逆转录聚合酶链式扩增技术(fluorescence-based quantitative real-time reverse transcription-polymerase chain reaction,qRT-PCR)及qRT-PCR联合巢式聚合酶链式反应(nested polymerase chain reaction,nested PCR)测序两种检测策略在检测手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)住院患儿肠道病毒的一致性及其相关因素。方法2017年2月―2018年2月在河南省建立以医院为基础的HFMD住院患儿前瞻性队列,收集研究对象相关信息并采集生物标本,分别开展单纯qRT-PCR及qRT-PCR联合nested PCR测序的肠道病毒核酸检测。结果两种检测策略总体的一致性较好(kappa>0.60)。标本类型、肠道病毒A组71血清型(enterovirus-A71,EV-A71)疫苗接种史、发病到采样时间、疾病严重程度以及年龄与肠道病毒的检出收益相关。qRT-PCR联合nested PCR测序的样本采样时间≥4 d、不同检测策略的样本采样时间差>2 d会降低两种检测策略EV-A71矫正机遇后的一致性,而重症与EV-A71矫正机遇后的高一致性有关。标本类型(P=0.033)及疾病严重程度(P=0.020)是两种检测策略柯萨奇病毒A组16(coxsackievirus-A16,CV-A16)矫正机遇后一致性的独立相关因素。结论qRT-PCR及qRT-PCR联合nested PCR测序的两种检测策略的一致性较好,患儿个体情况及标本采集时间会影响分子检测的检出收益及一致性。

不同促甲状腺激素切值对新生儿先天性甲状腺功能减退症筛查的意义

目的分析不同促甲状腺激素(TSH)切值对新生儿先天性甲状腺功能减退症(甲减)筛查的意义。方法抽取郑州市第一人民医院2017年4月至2020年4月出生的活产新生儿1 650例,采血检测TSH。检查结果参与卫生部临床检验中心干血片TSH室间质量评价,结果是是成绩合格。分析新生儿血样TSH水平分布情况,观察新生儿TSH水平统计学。参考WHO制定的先天性甲状腺机能减退症(CHT)诊断标准判定CHT,并分析CHT水平。最后分析活体新生儿TSH不同切值的敏感度及特异度。结果 1 650例中0.00~1.00 mU/L 362例(21.94%)、1.00~2.00 mU/L 495例(30.00%)、2.00~3.00 mU/L 401例(24.30%)、3.00~4.00 mU/L 231例(14.00%)、4.00~5.00 mU/L 30例(1.82%)、5.00~6.00 mU/L 28例(1.70%)、6.00~7.00 mU/L 23例(1.39%)、7.00~8.00 mU/L 20例(1.21%)、8.00~9.00 mU/L 14例(0.84%)、9.00~10.00 mU/L 10例(0.61%)、10.00~11.00 mU/L 9例(0.55%),>11.00 mU/L7例(0.42%)。1 650例中1624例为正常新生儿,TSH水平均值3.24 mU/L,中位数2.68 mU/L,最小值0.04 mU/L,最大值30.81mU/L ,90%分位数值5.93 mU/L,95%分位数值7.41 mU/L,99%分位数值10.75 mU/L。1 650例中26例为CHT,TSH水平分布情况为9.00~10.00 mU/L 1例( 3.85%)、10.00~30.00 mU/L 5例(19.23%)、30.00~40.00 mU/L 4例(15.38%)、40.00~50.00 mU/L 2例(7.69%)、50.00~60.00 mU/L1例(3.85%)、60.00~70.00 mU/L 1例(3.85%)、70.00~80.00 mU/L 2例(7.69%)、80.00~90.00 mU/L 1例(3.85%)、90.00~100.00 mU/L 2例(7.69%)、>100.00 mU/L 7例(26.92%)。TSH水平9.00 mU/L敏感度、1-特异性、敏感度+特异度最高,其次是10.00 mU/L、11.00 mU/L、12.00 mU/L、13.00 mU/L、14.00 mU/L、15.00 mU/L。结论 9.00 mU/L作为TSH切值能获得较好的筛查结果,建议临床应用。