非洲猪瘟病毒K205R蛋白特异性纳米抗体的筛选与鉴定

【目的】利用噬菌体展示技术筛选非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)K205R蛋白的特异性纳米抗体。【方法】将原核表达、纯化的ASFV K205R蛋白免疫双峰驼,采集全血,分离外周血淋巴细胞,提取总RNA并反转录,巢式PCR扩增VHH基因,构建VHH噬菌体文库,利用噬菌体展示技术筛选K205R特异性纳米抗体。【结果】成功构建库容量为5×10^(8)的VHH噬菌体文库,然后利用噬菌体展示技术经过3轮淘选,特异性VHH噬菌体得到明显富集,氨基酸序列比对显示共筛选出5株K205R蛋白的特异性纳米抗体,分别为ASFV-K205R-Nb1、ASFV-K205R-Nb14、ASFV-K205R-Nb35、ASFV-K205R-Nb64和ASFV-K205R-Nb82。【结论】筛选的5株纳米抗体均具有良好的特异性,其中ASFV-K205R-Nb1、ASFV-K205R-Nb35和ASFV-K205R-Nb82具有更好的亲和力,为以纳米抗体作为灵敏探针建立的特异性强、灵敏度高、成本低的新型ASFV血清学诊断方法提供依据。

液相色谱-质谱/质谱法检测生鲜乳中雌二醇方法的建立

为了建立生鲜乳中17β-雌二醇的液相色谱-质谱/质谱检测方法,试验采用甲醇提取生鲜乳样品后,经固相萃取柱富集净化,采用液相色谱-质谱/质谱法测定,外标法定量。结果表明：17β-雌二醇在1-50 ng/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数为0. 998 3,建立方法的检测限为0. 15μg/kg,定量限为0. 50μg/kg;在1-10 ng/mL加标浓度范围内,方法的回收率为76. 1%-99. 8%,相对标准偏差≤9. 7%。本试验建立方法的样品处理比较简单,使用等度洗脱,提高了方法的灵敏度,明显降低了检测限和定量限,提高了方法的准确度。本试验建立的方法适用于实验室检测牧场生鲜乳中17β-雌二醇残留。