浅析基层动物流行病学调查工作现状

通过开展基层动物流行病学调查工作,我们不仅可以对动物疫病发生的时间和范围进行及时的统计与数据分析,还能根据其分析结果,进行系统性的评估,从而提出有效的防控措施。所以,我们应当明确动物流行病学调查工作的概念和目的,在此基础上对这一工作的现状进行分析,发现工作人员在调查在工作中出现的种种问题,并提出一系列的优化策略,完善对于这一调查工作的相关法律法规,加强相关的保障体系建设。

犬细小病毒TaqMan MGB荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为建立一种特异、灵敏、快速检测犬细小病毒(CPV)的TaqMan MGB荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,本研究根据GenBank中CPV的VP2基因保守区域序列设计1对特异性引物和1条TaqMan MGB荧光探针,经反应条件优化,建立了CPV TaqMan MGB FQ-PCR方法。对建立的TaqMan MGB FQ-PCR检测方法进行了灵敏度、特异性、重复性试验,对疑似CPV感染临床样品进行了应用检测,并与常规PCR方法进行了比对。结果表明,成功建立了检测CPV的TaqMan MGB FQ-PCR方法,标准曲线的循环阈值(Ct值)与模板浓度有良好的线性关系,相关系数(R2)为0.9978;最低检出限为1×101拷贝/μL,是常规PCR的100倍;特异性高,对pGEM-T/CPV重组质粒扩增呈现阳性反应曲线,而对5个对照病原的扩增曲线均呈现阴性反应;对不同浓度的pGEM-T/CPV重组质粒分别重复检测3次结果良好;对46份临床疑似CPV感染样品进行了应用检测,阳性检出率为50%,高于常规PCR方法。本研究成功建立了CPV的TaqMan MGB FQ-PCR检测方法,可用于临床上犬细小病毒病的早期快速诊断。

猪瘟病毒巢式RT-PCR检测方法的建立与应用

为建立一种快速、特异、灵敏的检测猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)巢式RT-PCR(nested RTPCR)方法,本研究参照GenBank中公布的CSFVE2基因保守区域序列设计2对特异性引物,以CSFV总RNA为模板,优化反应条件,建立CSFV nested RT-PCR方法,对其进行特异性、敏感性和重复性试验;利用所建立的方法对35份临床疑似CSFV感染样品进行了应用检测,并对阳性PCR产物进行克隆测序鉴定。结果表明,本研究成功建立了CSFV nested RT-PCR检测方法,能够特异性地扩增CSFV,但对ST正常细胞对照和其他8种病原对照未扩增出任何条带;稳定性和重复性好;敏感性高,最低检测病毒含量为1TCID50;自35份疑似CSFV感染样品中检出19份阳性样品,PCR阳性产物克隆测序结果表明均为CSFV E2基因片段。本研究成功建立了CSFV nested RT-PCR检测方法,可用于CSFV的快速检测,为CSF的早期检测诊断提供了特异、灵敏的方法。

猪伪狂犬病病毒gB蛋白抗体竞争化学发光酶联免疫检测方法的建立

为了建立一种快速定量检测猪伪狂犬病病毒(PRV)gB蛋白抗体的竞争化学发光酶联免疫检测方法,以大肠杆菌表达并纯化的猪伪狂犬病病毒gB重组蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记的抗gB蛋白单克隆抗体作为酶标抗体,以国家参考品稀释制备的校准品绘制标准曲线实现定量检测,成功建立的PRV-gB-CLEIA在45 min内即可完成检测,可检测到最大稀释倍数为1∶2 048稀释的国家参考品;与猪瘟等其他5种病毒抗原的标准阳性血清无交叉反应;批内变异系数为1.13%~9.47%,批间变异系数为2.43%~14.07%,重复性和稳定性较好。通过对采集的180份临床血清检测结果进行比较,该方法与中和试验阳性符合率为94.00%,阴性符合率为96.92%,总符合率为96.11%,明显优于商品化ELISA试剂盒。本研究建立的PRV-gB-CLEIA检测方法可以用于PRV gB抗体的快速定量检测。

猪伪狂犬病病毒变异毒株HeNZK-2014的分离鉴定及gE基因序列分析

为了解猪伪狂犬病病毒(PRV)变异毒株的特点,本研究采集临床疑似PRV感染发病猪的淋巴结等组织样品进行PCR鉴定,选取仅PRV阳性的组织样品经研磨除菌后取上清接种于PK-15细胞进行病毒分离培养、蚀斑纯化、PCR和间接免疫荧光法(IFA)鉴定,采用Reed-Muench法测定PRV的TCID50,接种小鼠并观察临床症状,对纯化的PRV和死亡小鼠脑组织样品进行gE基因PCR扩增及测序分析。结果显示,PRV阳性病料接种于PK-15细胞24h后出现典型细胞病变(CPE),经3轮蚀斑纯化后PCR和IFA鉴定结果均为阳性,分离株命名为HeNZK-2014,其TCID50为10-9.77/0.1mL;以1×108个TCID50病毒悬液接种小鼠22h后可引起小鼠出现奇痒、撕咬、死亡等典型猪伪狂犬病症状,死亡小鼠脑组织样品PRV PCR检测结果为阳性;纯化病毒和死亡小鼠脑组织样品gE基因核苷酸序列同源性为100.0%,与GenBank中2011年以前登录的经典毒株位于不同分支,与2011年之后中国流行毒株位于同一分支,在第48和496位各有1个天冬氨酸(D)的插入,具有变异毒株的典型特征。本研究成功分离了1株PRV变异毒株,为进一步开展针对PRV变异毒株的疫苗及其防控研究奠定了基础。

重组鸡白细胞介素-6/2融合蛋白对新城疫(LaSota株)活疫苗免疫增强作用研究

为探究重组鸡白细胞介素-6/2融合蛋白(rChIL-6-Linker-ChIL-2,重组融合蛋白)对新城疫病毒(NDV)活疫苗(LaSota株)的免疫增强作用,本研究将90只SPF鸡随机分为6组,分别为PBS对照组、NDV弱毒苗对照组、rChIL-6-Linker-ChIL-2免疫增强组、rChIL-6蛋白免疫增强组、rChIL-2蛋白免疫增强组及rChIL-6+rChIL-2混合蛋白免疫增强组,将鸡白细胞介素重组融合蛋白水剂与LaSota株联合接种于SPF鸡,分别采用MTS法、流式细胞术、ELISA和HA/HI法检测接种前后不同时间各组鸡外周血及脾淋巴细胞增殖活性、鸡外周血中CD3+CD4+/CD3+CD8+T淋巴细胞的百分含量、血清中Th1/Th2型细胞因子表达水平及免疫抗体水平等指标。结果显示,接种后7～21d时,与NDV弱毒苗对照组相比,同时接种重组融合蛋白组鸡淋巴细胞增殖活性、外周血CD3+CD4+/CD3+CD8+T淋巴细胞的百分含量比值及血清中重组鸡IL-4蛋白(rChIL-4)、ChIL-6、ChIL-2、重组鸡IFN-α蛋白(ChIFN-α)、ChIFN-γTh1/Th2型细胞因子表达水平明显提升;HI免疫抗体较NDV弱毒苗对照组提高了1.0～1.9个滴度,较单一rChIL-6、rChIL-2对照组分别提高了0.2～0.7、0.2～1.1个抗体滴度。综上所述,rChIL-6-Lin-ker-ChIL-2融合蛋白对NDV(LaSota株)活疫苗在鸡体内具有明显的免疫增强效果。

浅谈标准化猪舍建设及应用

1背景 在科学技术日益发展的今天,传统的集约化养猪模式普遍存在着猪舍建设相对简单,饲养管理混乱及生产水平不高、效益低等问题,为了彻底改变这种现状,我们应大力提倡标准化养猪。

对“瘦肉精”事件的反思

2011年3月15日，中央电视台3．15特别节目播出了《“健美猪”真相》，对河南孟州等地部分养猪场饲喂“瘦肉精”的生猪流人济源双汇食品有限公司进行了报道，在河南乃至全国引起了轩然大波。什么是瘦肉精呢？瘦肉精是一类动物用药，

重组鸡白细胞介素-6(rChIL-6)对传染性法氏囊灭活疫苗的免疫增强机理研究

为了评价重组鸡白细胞介素-6（rChIL-6）蛋白在鸡体内的免疫增强作用机理,本研究将40只7日龄健康SPF鸡随机平均分为4组以进行rChIL-6蛋白对鸡传染性法氏囊病毒（IBDV）灭活疫苗免疫增强作用试验,于14日龄时进行免疫接种和rChIL-6蛋白注射。分别检测4组鸡免疫前和免疫后不同时间血清中IBDV抗体水平、不同细胞因子表达水平、脾淋巴细胞增殖活性和外周血T淋巴细胞增殖活性等指标以揭示rChIL-6蛋白在机体内对疫苗的免疫增强机理。结果表明：免疫后7~49d,rChIL-6蛋白与IBDV灭活疫苗共免疫组（第4组）鸡血清中IBDV抗体水平极显著高于IBDV灭活疫苗对照组（P〈0.01）;免疫后7~35d,第4组鸡血清中的白细胞介素-4、6、2（ChIL-4、ChIL-6、ChIL-2）和γ干扰素（ChIFN-γ）等4种细胞因子的表达水平极显著高于其他3组对照组（P〈0.01）,α干扰素（ChIFN-α）的表达水平于免疫后14~35d期间极显著高于其他3组对照鸡（P〈0.01）;rChIL-6蛋白单独应用后可显著提高机体的ChIL-4、ChIL-6和ChIL-2的表达水平,但对ChIFN-γ、ChIFN-α的表达水平无明显影响。免疫后7~14d,第4组鸡的脾淋巴细胞增殖活性显著高于其他3组对照鸡（P〈0.01）;免疫后7~21d,第4组鸡的外周血T淋巴细胞的增殖活性稍高于其他3组对照组（P〉0.05）。结果表明,rChIL-6在体液免疫和细胞免疫水平对鸡传染性法氏囊灭活疫苗免疫后均具有免疫增强作用;对机体体液免疫应答的增强能力高于细胞免疫应答。

重组鸡白细胞介素-6-2融合蛋白对鸡T淋巴细胞和B淋巴细胞免疫活性的影响

为研究重组鸡白细胞介素-6-2融合蛋白（rChIL-6-Linker-ChIL-2）对鸡体免疫功能的影响,采用MTS法检测重组融合蛋白在28日龄SPF鸡体内接种后不同时间对外周血淋巴细胞（PBLC）中T淋巴细胞和脾B淋巴细胞增殖活性的影响,采用流式细胞术检测它对鸡PBLC中CD3＋CD4＋T淋巴细胞、CD3＋CD8＋T淋巴细胞百分含量及CD4＋/CD8＋比值的影响。结果显示,接种后第7~35天,重组融合蛋白可显著提高鸡体PBLC中T淋巴细胞和脾中B淋巴细胞的增殖活性,两者活性分别高于单一rChIL-2蛋白或单一rChIL-6蛋白对照、低于或接近于rChIL-6蛋白＋rChIL-2蛋白混合物。接种后第7~21天,重组融合蛋白可显著提高CD3＋CD4＋T淋巴细胞百分含量、降低CD3＋CD8＋T淋巴细胞百分含量,显著提高CD4＋/CD8＋比值,其活性显著高于单一rChIL-6蛋白或单一rChIL-2蛋白对照,但与rChIL-6蛋白＋rChIL-2蛋白混合组差异不显著。结果表明,重组融合蛋白在鸡体内可显著促进T、B淋巴细胞增殖,提高CD3＋CD4＋T淋巴细胞百分含量和CD4＋/CD8＋比值,从而增强鸡体的体液免疫和细胞免疫功能;重组融合蛋白在体内发挥了ChIL-6和ChIL-2的协同作用活性。

豫北某猪场猪萎缩性鼻炎的流行现状调查

引言猪萎缩性鼻炎(atrophicrhinitis,AR)是猪群的一种重要呼吸系统传染病,病原为支气管败血波氏杆菌和多杀性巴氏杆菌[1]。疾病的最严重形式是单独感染了产毒性巴氏杆菌或者同时还感染了波氏杆菌(渐进性萎缩性鼻炎)。波氏杆菌单独引起的感染只能引起温和的病变,又称非渐进性萎缩性鼻炎,特点是鼻甲骨轻度中度萎缩(de Jong,1999)[2]。该病早期临床表现以浆液性或者脓性鼻涕。

鹅曲霉菌病的诊断与治疗

曲霉菌病由真菌中的曲霉菌引起,主要侵害禽类的呼吸及消化道器官,如果不能及时进行有效治疗,就会造成免疫抑制,继发感染其他疾病,使家禽的死亡率急剧上升。笔者通过分析实际病例,介绍了曲霉菌病的临床症状和预治方案,保证鹅群的健康生长,提升养殖者的经济效益。