鲍曼不动杆菌噬菌体ZZ1受体结合蛋白gp37的克隆表达

目的为进一步了解噬菌体与宿主菌之间的相互作用机制,对鲍曼不动杆菌噬菌体ZZ1受体结合蛋白gp37进行克隆表达。方法原核表达噬菌体ZZ1重组受体结合蛋白gp37,从分子质量、抗原性以及对ZZ1吸附竞争干扰的功能等对表达的重组受体结合蛋白gp37进行鉴定。结果PCR扩增ZZ1gp37基因后,成功诱导表达了含6×His标签的ZZ1重组受体结合蛋白gp37,SDS-PAGE显示所表达蛋白的相对分子质量约为140×10^(3);使用0.5 mmol/L IPTG 16℃诱导过夜较37℃诱导4 h,蛋白可溶性表达增多;Western blot显示纯化蛋白可分别被his标签抗体和小鼠抗ZZ1多克隆抗体识别;竞争吸附试验显示,在重组ZZ1gp37蛋白存在的情况下,ZZ1对鲍曼不动杆菌AB09V的吸附效率与对照组的63.5%相比下降39.5%。结论成功表达了噬菌体ZZ1的重组受体结合蛋白gp37,蛋白的分子质量、反应原性以及对ZZ1吸附的竞争干扰作用均符合预期,为噬菌体ZZ1与宿主菌相互作用机制研究奠定了基础。

鲍曼不动杆菌噬菌体ZZ1受体结合蛋白gp12的克隆表达及ZZ1 RBP受体性质鉴定

目的 为进一步了解噬菌体与宿主菌之间的相互作用机制,对鲍曼不动杆菌噬菌体ZZ1短尾丝蛋白gp12进行克隆表达并对ZZ1 RBP吸附受体进行鉴定。方法 原核表达噬菌体ZZ1受体结合蛋白gp12,根据分子质量、抗原性以及对ZZ1吸附竞争干扰的功能等对表达的重组受体结合蛋白gp12进行鉴定。分别用细菌膜蛋白提取试剂盒和细菌脂多糖提取试剂盒提取鲍曼不动杆菌表面OMP和LPS,采用ELISA的方法对噬菌体ZZ1作用受体性质进行鉴定。分别用蛋白酶K和高碘酸盐对AB09V菌进行处理以破坏细菌表面的蛋白质和LPS,观察噬菌体ZZ1对两种方法处理AB09V菌的吸附效率。结果 PCR扩增ZZ1gp12基因后,成功诱导表达了含6×His标签的ZZ1重组受体结合蛋白gp12,SDS-PAGE显示所表达蛋白的相对分子质量约为55 ku;使用0.5 mmol/L IPTG诱导4h,蛋白表达基本趋于稳定;Western blot显示纯化蛋白可分别被his标签抗体和小鼠抗ZZ1多克隆抗体识别;竞争吸附试验显示,在ZZ1重组gp12蛋白存在的情况下,ZZ1对鲍曼不动杆菌AB09V的吸附效率与对照组的63.5%相比下降42.4%;当ZZ1重组gp37蛋白和ZZ1重组gp12蛋白均存在的情况下,ZZ1对鲍曼不动杆菌AB09V的吸附率下降55.8%。ELISA和进一步验证试验显示ZZ1重组受体结合蛋白均吸附宿主菌AB09V菌表面的LPS。结论 成功表达了噬菌体ZZ1重组受体结合蛋白gp12,ZZ1重组gp37蛋白和ZZ1重组gp12蛋白均吸附宿主菌AB09V表面的LPS。