人水通道蛋白4胞外区的原核表达及纯化

目的:利用原核表达系统融合表达人水通道蛋白4(AQP4)胞外区,并进行纯化及鉴定。方法:根据大肠埃希菌密码子偏嗜性及后续实验需要设计并人工合成AQP4胞外区序列,退火形成双链后克隆至pET32a(+)载体,构建原核重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的融合蛋白经Ni2+亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果:重组表达质粒经双酶切和测序鉴定构建正确;表达的融合蛋白pET32a(+)-AQP4胞外区相对分子质量约为26 000,可与鼠抗组氨酸单克隆抗体特异性结合,可以可溶性形式存在于上清液中,纯化的融合蛋白纯度达70%以上。结论:成功构建了重组表达质粒pET32a(+)-AQP4胞外区,并成功表达融合蛋白。

抗N-甲基-D-天冬氨酸受体脑炎三例报告并文献复习

目的分析抗N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptors,NMDAR)脑炎的临床特点,提高临床医生对抗NMDAR脑炎的认识。方法回顾性分析3例抗NMDAR脑炎患者的临床资料,并结合文献总结分析其临床特点。结果 3例患者均有上呼吸道感染的前驱症状,主要临床表现为典型的精神症状、口-面-舌不自主运动、持续性癫痫,NMDAR抗体检测均阳性,给予免疫治疗后症状好转。结论早期诊断并积极治疗是改善抗NMDAR受体脑炎预后的关键。

重症肌无力患者肌细胞分拣微管连接蛋白17的表达及作用

目的 比较分拣微管连接蛋白17（SNX17）在重症肌无力（MG）组和对照组肋间肌肌细胞中的表达,探讨其在乙酰胆碱受体（AChR）聚集中的作用.方法 取MG组和对照组肋间肌,分离出单根肌丝,用免疫荧光法观察肌丝AChR、SNX17分子形态及分布;实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）、Western blot法比较两组肌细胞SNX17含量.结果 AChR位于肌纤维纵轴的中部,呈连续光滑的红色椭圆形突起.对照组AChR呈曲奇饼干样,内部有精细分支的网络状结构;MG组仅可观察到呈不连续完整的红色外周轮廓线,内部网状结构破碎,呈空泡样,但可观察到SNX17呈同样形状蓝色椭圆形突起,两者位置、形态一致.MG组SNX17 mRNA和蛋白含量（n=10,0.85±0.08;0.83 ±0.08）均明显高于对照组（n=14,0.57±0.09;0.65±0.06）,差异有统计学意义（t=5.75 ,P ＜0.05;t=3.03 ,P ＜0.05）.结论 MG患者肋间肌肌细胞SNX17表达增高,与AChR在神经肌肉接头处共定位,可能是促进AChR聚集,维护神经肌肉接头信号通路完整的重要分子.

高浓度常压氧对缺血性脑水肿的影响

目的探讨61%常压氧对缺血性脑水肿的影响。 方法选用雄性SD大鼠，随机分为假手术组、模型组及吸氧组，每组分为再灌注后0.5、3.0、6.0、12.0和24.0 h 5个亚组。采用大脑中动脉缺血再灌注大鼠模型，聚合酶链反应（PCR）检测脑组织水通道蛋白4（AQP4） mRNA相对表达量。 结果与假手术组（1.003±0.003）相比，模型组（4.808±1.091）与吸氧组（4.268±1.032）大鼠脑组织缺血再灌注各时间点AQP4 mRNA相对表达量明显增加（P＝0.000）；与模型组相比，吸氧组再灌注3 h（P＝0.011）、6 h（P＝0.008）、12 h（P＝0.019）及24 h（P＝0.014）时AQP4 mRNA表达水平降低。 结论61%常压氧可能通过抑制AQP4 mRNA表达减轻缺血性脑水肿。