LncRNA GAS5靶向调控miR-144-3p对结核分枝杆菌感染的巨噬细胞凋亡和炎性反应的影响

目的:探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(LncRNA GAS5)靶向调控miR-144-3p对结核分枝杆菌(MTB)感染的巨噬细胞凋亡和炎性反应的影响。方法:qRT-PCR检测2019年3月31日至2022年3月31日在河南省商丘市胸科医院确诊的结核病患者75例、同期健康体检者75名血清中LncRNA GAS5、miR-144-3p水平;将巨噬细胞(160 nmol/L佛波酯诱导分化后的贴壁THP-1细胞)分为8组,即MTB组、MTB+pcDNA组、MTB+pcDNA-GAS5组、MTB+inhibitor NC组、MTB+miR-144-3p inhibitor组、MTB+pcDNA-GAS5+mimic NC组、MTB+pcDNA-GAS5+miR-144-3p mimic组,另取正常培养的巨噬细胞作为对照组(NC组)。检测巨噬细胞中LncRNA GAS5、miR-144-3p表达(qRT-PCR法)及细胞上清中炎性细胞因子水平(ELISA法);分别检测巨噬细胞增殖(CCK-8法)、凋亡(流式细胞术)及检测巨噬细胞中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达(Western blot)水平;验证LncRNA GAS5与miR-144-3p的关系(双荧光素酶报告基因实验)。结果:结核病患者血清中LncRNA GAS5表达量为0.24±0.02,低于健康体检者(1.00±0.00);结核病患者血清中miR-144-3p表达量为2.35±0.12,高于健康体检者(1.00±0.00),差异均有统计学意义(t值分别为329.090、97.428,P值均<0.001)。MTB组LncRNA GAS5表达量为0.22±0.02、细胞凋亡能力为(3.84±0.24)%、Bax蛋白表达量为0.22±0.02,均低于NC组[1.00±0.00、(9.79±0.23)%、1.21±0.12],miR-144-3p表达量(2.46±0.13)、炎性细胞因子水平[γ-干扰素(IFN-γ):(212.26±9.65)pg/ml;白细胞介素-6(IL-6):(123.35±5.12)pg/ml;肿瘤坏死因子α(TNF-α):(325.58±12.28)pg/ml]、细胞增殖能力(1.45±0.14)及Bcl-2蛋白表达量(1.53±0.15),均高于NC组[1.00±0.00、(35.58±1.23)pg/ml、(25.46±1.18)pg/ml、(51.12±2.03)pg/ml、0.86±0.07、0.56±0.05],差异均有统计学意义(q值分别为41.205、73.979、36.403、31.876、61.384、66.990、81.580、13.484、22.943,P值均<0.001)。MTB+pcDNA-GAS5组LncRNA GAS5表达量(0.86±0.07)、细胞凋亡能力[(7.62±0.17)%]及Bax蛋白表达量(0.94±0.08),均高于MTB+pcDNA组[0.23±0.01、(3.82±0.21)%、0.23±0.01];miR-144-3p表达量(1.35±0.10)、炎性细胞因子水平[IFN-γ:(96.63±4.17)pg/ml;IL-6:(41.93±2.19)pg/ml;TNF-α:(118.85±6.03)pg/ml]、细胞增殖能力(0.96±0.08)及Bcl-2蛋白表达量(0.81±0.07),均明显低于MTB+pcDNA组[2.48±0.14、(210.63±9.78)pg/ml、(125.52±4.86)pg/ml、(327.73±10.15)pg/ml、1.44±0.13、1.54±0.14],差异均有统计学意义(q值分别为33.281、47.247、26.107、24.671、57.204、61.448、62.087、10.970、17.266,P值均<0.001)。MTB+miR-144-3p inhibitor组细胞凋亡能力[(7.51±0.19)%]及Bax蛋白表达量(0.89±0.08),均高于MTB+inhibitor NC组[(3.86±0.22)%、0.24±0.02];miR-144-3p表达量(1.21±0.09)、炎性细胞因子水平[IFN-γ:(103.36±5.11)pg/ml;IL-6:(39.95±1.62)pg/ml;TNF-α:(120.26±6.67)pg/ml]、细胞增殖能力(0.92±0.08)及Bcl-2蛋白表达量(0.78±0.07),均低于MTB+inhibitor NC组[2.47±0.12、(214.45±10.03)pg/ml、(126.05±4.77)pg/ml、(326.69±8.33)pg/ml、1.46±0.12、1.54±0.12],差异均有统计学意义(q值分别为45.382、23.901、27.509、58.921、61.029、61.359、12.341、17.976,P值均<0.001)。结论:过表达LncRNA GAS5可能通过靶向下调miR-144-3p抑制MTB感染的巨噬细胞炎性反应,并诱导细胞凋亡。