吉西他滨对人非小细胞肺癌HCC827活性和凋亡的影响

目的：研究吉西他滨对人非小细胞肺癌HCC827细胞活性以及凋亡的影响,以及与Bcl-2表达的关系。方法：采用cell counting kit-8法、细胞核Hochest33258染色法、流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染法等多种方法,体外研究吉西他滨对人非小细胞肺癌HCC827的活性、凋亡和细胞周期的影响;采用Western blot法,观察药物作用后细胞中Bcl-2蛋白表达的变化。结果：吉西他滨（0.1～1 000 ng/ml）对人非小细胞肺癌HCC827活性具有抑制作用,并有促凋亡效应。此外,可以将细胞阻滞在S期。在吉西他滨诱导的细胞凋亡过程中,凋亡因子Bcl-2蛋白的表达下调。结论：吉西他滨可以抑制人非小细胞肺癌HCC827细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,S期周期阻滞,其诱导的凋亡可能是其杀死肿瘤细胞的主要机制之一,此外,凋亡与相关基因Bcl-2蛋白的表达具有一定关系。

mTORC1信号促进前成骨细胞MC3T3-E1的分化成熟

目的:研究mTORC1信号对前成骨细胞MC3T3-E1向成骨细胞分化成熟的调控作用。方法:通过向MC3T3-E1转染pcDNA3.1-Raptor,对mTORC1信号相关蛋白Raptor进行过表达。向MC3T3-E1转染Raptor siRNA,对mTORC1信号蛋白Raptor进行基因沉默。通过Real-time PCR方法测定Raptor的基因表达,通过蛋白免疫印迹法测定Raptor蛋白水平,并通过茜素红染色检测成骨矿化情况,以测定成骨分化程度。通过Real-time PCR检测成骨分化指标的基因表达。结果:与对照组相比,Raptor过表达组的Raptor mRNA和蛋白水平明显增加;茜素红染色结果显示Raptor过表达组染色更深,说明成骨矿化程度更高;荧光定量PCR结果显示,Raptor过表达组的成骨分化标记基因以及成骨转录因子的表达量均高于对照组。与对照组相比,Raptor siRNA组的Raptor mRNA和蛋白水平明显降低;茜素红染色结果显示Raptor siRNA组染色更浅,说明成骨矿化程度更低;荧光定量PCR结果显示,Raptor siRNA组的成骨分化标记基因以及成骨转录因子的表达量均低于对照组。结论:mTORC1信号促进前成骨细胞MC3T3-E1向成骨细胞分化成熟。

BCYRN1调控miR-503通过Notch1信号通路对肺癌迁移和侵袭的影响

目的:探讨BCYRN1调控miR-503通过Notch1信号通路对肺癌迁移和侵袭的影响机制。方法:q PCR检测不同肺癌细胞株中BCYRN1和miR-503的表达情况;免疫荧光和q PCR检测慢病毒BCYRN1+siRNA转染肺癌细胞的转染效率;双荧光素酶报告基因检测BCYRN1与miR-503的相互作用;Transwell侵袭实验和划痕实验检测沉默BCYRN1后肺癌细胞侵袭和迁移能力的变化;Western blot检测沉默BCYRN1后Notch1信号通路蛋白的表达情况;裸鼠皮下成瘤检测沉默BCYRN1后肺癌细胞裸鼠体内成瘤能力的影响。结果:在肺癌细胞H1299中BCYRN1表达水平最高,miR-503的表达水平相对较高;免疫荧光及mRNA水平证明BCYRN1+siRNA慢病毒可以有效转染进入H1299细胞内;BCYRN19能与miR-503的3'-UTR特异性结合;沉默BCYRN1可以抑制肺癌H1299细胞的侵袭和迁移能力;沉默BCYRN1后Notch1通路蛋白表达情况相应下调;与NC组相比,BCYRN1-siRNA组荷瘤小鼠肿瘤体积和重量都明显减小。结论:BCYRN1可以靶向调节miR-503通过Notch1信号通路影响肺癌H1299细胞的侵袭和迁移能力。

长链非编码RNA基因CCAT2抑制TGF-β信号通路促进非小细胞肺癌细胞的增殖

目的通过体内体外实验探讨结肠癌相关转录本2(colon cancer-associated transcript 2,CCAT2)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖的影响及其调控机制。方法利用shRNA干扰NSCLC细胞(A549和H1299)CCAT2表达。实时定量PCR(quantitative real-time reverse transcription PCR,qRT-PCR)检测CCAT2表达。肿瘤成球实验和CCK-8实验检测细胞增殖。蛋白印记法检测细胞增殖标记蛋白-细胞增殖核抗原-67(antigen identified by monoclonal antibody,Ki-67)和增殖细胞核抗原(proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA),TGF-β信号通路相关蛋白转化生长因子(transforming growth factor beta,TGF-β),细胞信号转导分子Smad2(suppressor of mothers against decapentaplegic 2)和α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)的表达。结果 NSCLC细胞系(A549、H1299、H1650和H358)中CCAT2的表达显著高于正常肺脏细胞系BEAS-2B(P<0.01)。与对照组相比,转染CCAT2 shRNA后A549和H1299细胞中CCAT2的表达显著降低(P<0.01)。A549和H1299细胞中CCAT2 shRNA组细胞增殖倍数明显低于对照组(P<0.05)。与对照组相比,A549和H1299细胞中CCAT2 shRNA组细胞增殖标记蛋白Ki-67和PCNA表达显著降低(P<0.01),TGF-β信号通路相关蛋白TGF-β、Smad2和α-SMA表达显著升高(P<0.01)。与对照组相比,CCAT2 shRNA组肿瘤体积显著变小(P<0.01),肿瘤组织中TGF-β信号通路相关蛋白TGF-β、Smad2和α-SMA表达显著升高(P<0.01)。结论 CCAT2可通过抑制TGF-β信号通路促进NSCLC细胞增殖和肿瘤生长。

TSLP、INF⁃γ及IL⁃33诊断儿童咳嗽变异性哮喘的价值

目的观察血清胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、干扰素⁃γ(INF⁃γ)、白细胞介素⁃33(IL⁃33)诊断儿童咳嗽变异性哮喘(CVA)的价值。方法选取2020年6月至2020年12月北京京都儿童医院收治的50例儿童CVA患者为观察组,另选同期治疗的50例支气管炎患儿作为对照组,检测两组入院时的用力肺活量(FVC)、第一秒用力呼气量(FEV1)、最大呼气峰流量(PEF)与血清免疫球蛋白E(IgE)、TSLP、INF⁃γ、IL⁃33指标,并分析四项血清指标联合诊断儿童CVA的价值。结果观察组支气管激发试验阴性例数低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组FVC、FEV1、PEF水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组IgE、TSLP、IL⁃33水平低于对照组,INF⁃γ高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。FVC、FEV1、PEF:Ⅰ期>Ⅱ期>Ⅲ期>Ⅳ期,IgE、TSLP、IL⁃33:Ⅰ期<Ⅱ期<Ⅲ期<Ⅳ期,INF⁃γ:Ⅰ期>Ⅱ期>Ⅲ期>Ⅳ期,差异均有统计学意义(P<0.05)。IgE联合TSLP、INF⁃γ、IL⁃33诊断儿童CVA的AUC为0.940,大于IgE单独诊断(P<0.05)。结论血清IgE联合TSLP、INF⁃γ、IL⁃33可进一步优化儿童CVA诊断效能。

568株粪肠球菌和屎肠球菌的临床分布及耐药性分析

目的探讨粪肠球菌和屎肠球菌的临床分布特征及对常用抗菌药物耐药状况,为临床合理用药提供科学依据。方法回顾分析某院2015~2017年检出的568株粪肠球菌和屎肠球菌的耐药性,药敏试验采用MIC法结合K-B纸片扩散法,药敏结果按美国临床实验室标准化委员会(CLSI)推荐的标准判读,数据采用WHONET5.6软件统计处理。结果 3年来,从临床各类标本中共分离出568株粪肠球菌和屎肠球菌,其中粪肠球菌240株,屎肠球菌328株,均主要来源于尿液标本,其次是胆汁及胸腹腔积液和血液标本。屎肠球菌除对氯霉素耐药率(8.5%)相对较低外,对其他抗菌药物耐药率均接近或超过50%,耐药率明显高于粪肠球菌,未发现耐万古霉素、利奈唑胺、替考拉宁的肠球菌株。结论肠球菌耐药情况严重,临床应加强对其动态耐药性监测,根据药敏结果合理选用抗菌药物,以减缓耐药菌株产生和蔓延。