mTORC1信号促进前成骨细胞MC3T3-E1的分化成熟

目的:研究mTORC1信号对前成骨细胞MC3T3-E1向成骨细胞分化成熟的调控作用。方法:通过向MC3T3-E1转染pcDNA3.1-Raptor,对mTORC1信号相关蛋白Raptor进行过表达。向MC3T3-E1转染Raptor siRNA,对mTORC1信号蛋白Raptor进行基因沉默。通过Real-time PCR方法测定Raptor的基因表达,通过蛋白免疫印迹法测定Raptor蛋白水平,并通过茜素红染色检测成骨矿化情况,以测定成骨分化程度。通过Real-time PCR检测成骨分化指标的基因表达。结果:与对照组相比,Raptor过表达组的Raptor mRNA和蛋白水平明显增加;茜素红染色结果显示Raptor过表达组染色更深,说明成骨矿化程度更高;荧光定量PCR结果显示,Raptor过表达组的成骨分化标记基因以及成骨转录因子的表达量均高于对照组。与对照组相比,Raptor siRNA组的Raptor mRNA和蛋白水平明显降低;茜素红染色结果显示Raptor siRNA组染色更浅,说明成骨矿化程度更低;荧光定量PCR结果显示,Raptor siRNA组的成骨分化标记基因以及成骨转录因子的表达量均低于对照组。结论:mTORC1信号促进前成骨细胞MC3T3-E1向成骨细胞分化成熟。

BCYRN1调控miR-503通过Notch1信号通路对肺癌迁移和侵袭的影响

目的:探讨BCYRN1调控miR-503通过Notch1信号通路对肺癌迁移和侵袭的影响机制。方法:q PCR检测不同肺癌细胞株中BCYRN1和miR-503的表达情况;免疫荧光和q PCR检测慢病毒BCYRN1+siRNA转染肺癌细胞的转染效率;双荧光素酶报告基因检测BCYRN1与miR-503的相互作用;Transwell侵袭实验和划痕实验检测沉默BCYRN1后肺癌细胞侵袭和迁移能力的变化;Western blot检测沉默BCYRN1后Notch1信号通路蛋白的表达情况;裸鼠皮下成瘤检测沉默BCYRN1后肺癌细胞裸鼠体内成瘤能力的影响。结果:在肺癌细胞H1299中BCYRN1表达水平最高,miR-503的表达水平相对较高;免疫荧光及mRNA水平证明BCYRN1+siRNA慢病毒可以有效转染进入H1299细胞内;BCYRN19能与miR-503的3'-UTR特异性结合;沉默BCYRN1可以抑制肺癌H1299细胞的侵袭和迁移能力;沉默BCYRN1后Notch1通路蛋白表达情况相应下调;与NC组相比,BCYRN1-siRNA组荷瘤小鼠肿瘤体积和重量都明显减小。结论:BCYRN1可以靶向调节miR-503通过Notch1信号通路影响肺癌H1299细胞的侵袭和迁移能力。

长链非编码RNA基因CCAT2抑制TGF-β信号通路促进非小细胞肺癌细胞的增殖

目的通过体内体外实验探讨结肠癌相关转录本2(colon cancer-associated transcript 2,CCAT2)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖的影响及其调控机制。方法利用shRNA干扰NSCLC细胞(A549和H1299)CCAT2表达。实时定量PCR(quantitative real-time reverse transcription PCR,qRT-PCR)检测CCAT2表达。肿瘤成球实验和CCK-8实验检测细胞增殖。蛋白印记法检测细胞增殖标记蛋白-细胞增殖核抗原-67(antigen identified by monoclonal antibody,Ki-67)和增殖细胞核抗原(proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA),TGF-β信号通路相关蛋白转化生长因子(transforming growth factor beta,TGF-β),细胞信号转导分子Smad2(suppressor of mothers against decapentaplegic 2)和α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)的表达。结果 NSCLC细胞系(A549、H1299、H1650和H358)中CCAT2的表达显著高于正常肺脏细胞系BEAS-2B(P<0.01)。与对照组相比,转染CCAT2 shRNA后A549和H1299细胞中CCAT2的表达显著降低(P<0.01)。A549和H1299细胞中CCAT2 shRNA组细胞增殖倍数明显低于对照组(P<0.05)。与对照组相比,A549和H1299细胞中CCAT2 shRNA组细胞增殖标记蛋白Ki-67和PCNA表达显著降低(P<0.01),TGF-β信号通路相关蛋白TGF-β、Smad2和α-SMA表达显著升高(P<0.01)。与对照组相比,CCAT2 shRNA组肿瘤体积显著变小(P<0.01),肿瘤组织中TGF-β信号通路相关蛋白TGF-β、Smad2和α-SMA表达显著升高(P<0.01)。结论 CCAT2可通过抑制TGF-β信号通路促进NSCLC细胞增殖和肿瘤生长。