筋骨痛消丸对骨关节炎大鼠关节软骨和巨噬细胞炎症模型中TGF-β_(1)表达的影响

目的:观察筋骨痛消丸对骨关节炎(OA)大鼠关节软骨和巨噬细胞炎症模型中组织生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))表达的影响。方法:采用木瓜蛋白酶关节腔注射法,建立SD大鼠骨关节炎模型,60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、塞来昔布组及筋骨痛消丸低、中、高剂量治疗组。连续灌胃给药4周,并于4周末处死大鼠,免疫组化检查各组大鼠关节软骨TGF-β_(1)的表达情况。利用LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型,并采用筋骨痛消丸进行干预,分别在mRNA及蛋白水平上观察TGF-β_(1)的表达。结果:与对照组相比,OA模型组大鼠TGF-β_(1)表达明显提高(P<0.05);与模型组相比,筋骨痛消丸高剂量组TGF-β_(1)表达明显降低(P<0.05)。在巨噬细胞炎症模型中,与对照组相比,模型组在mRNA及蛋白水平TGF-β_(1)均明显提高(P<0.05);与模型组相比,筋骨痛消丸低、中、高剂量组呈现剂量依赖地降低TGF-β_(1)的mRNA及蛋白表达。结论:筋骨痛消丸能够降低OA大鼠模型关节软骨及巨噬细胞炎症模型中TGF-β_(1)的表达,为进一步探讨其对OA的治疗作用机制提供了依据。

一测多评法与外标法测定养血止疼丸中3种丹参酮类成分

目的:采用一测多评法测定养血止疼丸中丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA的含量,验证一测多评法(QAMS)的适用性。方法:以丹参酮ⅡA为内参物,建立其与丹参酮Ⅰ、隐丹参酮的相对校正因子,考察不同仪器、不同色谱柱对相对校正因子的影响。分别用外标法测定丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA的含量,后者与计算值进行比较。结果:10批养血止疼丸中丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA的含量可以用一测多评法进行测定,隐丹参酮、丹参酮Ⅰ含量的计算值与实测值间无显著差异。结论:一测多评法可用于养血止疼丸中丹参酮类成分的含量测定。

筋骨痛消丸HPLC指纹图谱的建立及其中7个成分的含量测定

目的:建立筋骨痛消丸的指纹图谱,并测定其中7个成分的含量。方法:采用高效液相色谱法(HPLC),以Cosmosil 5C18-MS-Ⅱ为色谱柱,以乙腈-0.02%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为230 nm,柱温为25℃,进样量为10μL。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》建立10批筋骨痛消丸的HPLC指纹图谱并进行相似度评价,通过与混合对照品比对指认共有峰;采用同一HPLC法测定所指认共有峰对应成分的含量。结果:10批筋骨痛消丸样品中共确定共有峰20个,与对照指纹图谱的相似度均不低于0.980。通过与混合对照品比对,指认化学成分7个,分别为马钱苷酸、龙胆苦苷、芍药苷、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA。上述7个成分检测质量浓度的线性范围分别为4.509~45.090、15.090~150.900、14.985~149.850、14.982~149.820、2.967~29.670、1.944~19.440、3.094~30.940μg/mL(r均大于0.999),检测限分别为0.0601、0.1610、0.3996、0.1598、0.0316、0.0518、0.0825μg/mL,定量限分别为0.2004、0.5030、0.9990、0.3995、0.0791、0.2592、0.4126μg/mL;精密度、稳定性(24 h)、重复性试验的RSD均小于3.0%(n=6);平均加样回收率为98.81%~100.28%,RSD为0.20%~1.21%(n=6)。10批样品中上述成分的含量分别为0.4410~0.9694、3.2834~4.7334、1.9477~3.6749、1.3366~2.2709、0.2932~0.3721、0.1902~0.2939、0.3528~0.5188 mg/g。结论:本研究成功建立了筋骨痛消丸的HPLC指纹图谱和含量测定方法,可用于其质量控制。

筋骨痛消丸质量标准的提高

目的:修订并提高筋骨痛消丸的质量标准。方法:增加了甘草的薄层鉴别,改进了香附、桂枝、白芍、川牛膝和秦艽的TLC鉴别,并用HPLC法同时测定了隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的含量。色谱条件:采用COSMOSIL 5C18-MS-Ⅱ(250 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱,以乙腈-0.02%磷酸溶液为流动相梯度洗脱,流速为1 ml·min^(-1),检测波长为270 nm,柱温为20℃,进样量为10μl。结果:薄层色谱图斑点清晰,阴性无干扰;隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA在2~20μg·ml^(-1)范围内,与峰面积呈良好的线性关系,回收率分别为97.32%,100.22%,102.08%,RSD分别为3.05%,2.22%,1.55%(n=9)。结论:该质量标准可更好地控制产品质量。