基于IL-33/ST2 信号通路探讨蛋白酶抑制剂硼替佐米治疗类风湿关节炎的作用机制

目的:基于白细胞介素33(IL-33)/基质裂解素2(ST2)信号通路探讨蛋白酶抑制剂硼替佐米治疗类风湿关节炎(RA)的作用机制。方法:将40只Wistar大鼠随机分为4组:对照组、模型组和硼替佐米低、高剂量组,每组各10只。除对照组外,其余组大鼠构建RA模型。硼替佐米低、高剂量组分别腹腔注射0.2 mg/kg和0.5 mg/kg硼替佐米,对照组和模型组腹腔注射等量生理盐水,每天1次,连续给药21 d。观察各组大鼠一般情况,计算足跖肿胀度,并进行炎症评分;HE染色观察各组大鼠踝关节组织病理变化;全自动生化分析仪检测血红蛋白含量、血小板(PLT)总数、血清肌酐(SCr)水平和血尿素氮(BUN)水平;ELISA法检测各组大鼠血清中IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-33和ST2水平;Western blot法检测各组大鼠踝关节组织中IL-33和ST2蛋白表达水平。结果:在造模后7、14和21 d,与对照组相比,模型组大鼠足跖肿胀度显著升高(P<0.05);与模型组相比,硼替佐米低、高剂量组大鼠足跖肿胀度依次降低(P<0.05)。给药结束后,与对照组相比,模型组滑膜细胞增多,排列紊乱,关节腔中存在大量炎性渗出物,大鼠炎症评分、血PLT总数、SCr水平和BUN水平显著升高,血清中IL-6、TNF-α、IL-33和ST2水平及踝关节组织中IL-33和ST2蛋白表达水平亦显著升高(P<0.05);与模型组相比,硼替佐米低、高剂量组大鼠关节腔炎性渗出物减少,炎症评分、血PLT总数、SCr水平和BUN水平依次降低,血清中IL-6、TNF-α、IL-33和ST2水平及踝关节组织中IL-33和ST2蛋白表达水平亦依次降低(P<0.05)。结论:硼替佐米可能通过调控IL-33/ST2信号通路,减轻RA大鼠关节炎症和肿胀。

siRNA慢病毒载体介导DKK-1基因沉默对骨髓间充质干细胞分化影响的实验研究

背景:激素性股骨头坏死(SONFH)发病机制尚不完全明确,可能与骨髓间充质干细胞(BMSC)的异常分化密切相关。目的:研究si RNA慢病毒载体介导的DKK-1基因沉默,通过调控Wnt/β-catenin信号通路对超生理剂量糖皮质激素作用下大鼠BMSC分化的影响,探索治疗SONFH的新途径。方法:提取、培养SD大鼠BMSC,并构建DKK-1基因慢病毒干扰载体。大鼠第3代BMSC分4组:对照组(A组)、激素组(B组)、激素+无序序列慢病毒载体组(C组)、激素+DKK-1基因慢病毒干扰载体组(D组)。A组用基础培养基培养,B组加入浓度为1×10^(-6)mol/L的地塞米松,C、D组除加入地塞米松外,各自加入相应的慢病毒载体转染BMSC。14 d后提取各组细胞RNA及蛋白,对DKK-1、成脂相关基因PPAR-γ2和成骨相关基因RUNX2进行Real-time PCR及Western-blot检测,并对各组进行油红O、茜素红染色,观察各组BMSC分化情况,对结果进行统计学分析。结果:Real-time PCR及Western-blot检测结果示B、C组与A、D组相比,成骨相关基因RUNX2的表达明显较低(P<0.05),而DKK-1及成脂相关基因PPAR-γ2的表达明显较高(P<0.05)。油红O染色结果显示B、C组呈阳性,A、D组呈阴性;茜素红染色结果显示A、D组呈阳性,B、C组呈阴性。结论:DKK-1基因沉默通过特异性抑制DKK-1过表达而重新激活Wnt/β-catenin信号通路,减少成脂基因PPAR-γ2的表达、增加成骨基因RUNX2的表达,抑制BMSC成脂分化,促进BMSC成骨分化。

硼替佐米调节miR-223/NLRP3轴对脂多糖诱导的人单核细胞炎症反应的影响

目的:探讨硼替佐米(BTZ)调节微小RNA-233(miR-223)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)轴对脂多糖(LPS)诱导的人单核细胞炎症反应的影响。方法:从类风湿性关节炎(RA)患者外周血中分离、纯化单核细胞。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测单核细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,并根据IL-6、IL-1β和TNF-α水平筛选LPS的最佳诱导时间和BTZ的最佳处理浓度。实验分为对照组、LPS诱导组和BTZ组。RT-qPCR法测定各组单核细胞中miR-223水平;Western blot法测定单核细胞中NLRP3、caspase-1、细胞因子信号抑制物1(SOCS1)和含SH2结构域的肌醇磷酸酶1(SHIP-1)水平。结果:成功从RA患者外周血中分离、纯化出单核细胞,其呈类球形,分布均匀;经LPS诱导24 h后,细胞多呈梭形、聚集状。根据IL-6、IL-1β和TNF-α水平筛选出LPS的最佳诱导时间为24 h,BTZ的最佳处理浓度为50 nmol/L。与对照组相比,LPS诱导组miR-223、SOCS1和SHIP-1水平显著降低(P<0.05),NLRP3和caspase-1水平显著升高(P<0.05);与LPS诱导组相比,BTZ组miR-223、SOCS1和SHIP-1水平显著升高(P<0.05),NLRP3和caspase-1水平显著降低(P<0.05)。结论:BTZ可能通过阻断miR-223/NLRP3轴活化,减少LPS诱导的人单核细胞炎症因子的分泌。

硼替佐米调节NF-κB途径对IL-1β诱导的ATDC5细胞炎症性损伤的影响研究

目的探究硼替佐米(Bor)对白介素-1β(IL-1β)诱导的ATDC5细胞炎症性损伤及核因子κB(NF-κB)的影响。方法0、5、15、25、35、45、55 nmol/L Bor处理ATDC5细胞48 h,CCK-8实验筛选无细胞毒性浓度,0、1.0、5.0、12.5、25.0 nmol/L Bor分别与10μg/mL IL-1β共培养ATDC5细胞48 h,CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;酶联免疫吸附(ELISA)检测上清液中IL-1β表达情况;蛋白免疫印迹检测细胞中NF-κB、B细胞淋巴瘤/白血病-2原癌基因(BcL-2)、BcL-2相关X蛋白(BAX)蛋白水平。结果0、5、15、25 nmol/L Bor组差异无统计学意义(P>0.05)。与0 nmol/L Bor组相比,35、45、55 nmol/L Bor组细胞存活率降低(P<0.05)。Bor浓度≤25 nmol/L对该细胞无毒。与0 nmol/L Bor组相比,IL-1β组细胞存活率、细胞中BcL-2蛋白水平降低(P<0.05),凋亡率、上清液中IL-1β水平、细胞中NF-κB、BAX蛋白水平升高(P<0.05)。随着Bor剂量的增加,细胞存活率、细胞中BcL-2蛋白水平逐渐升高(P<0.05),细胞凋亡率、上清液中IL-1β、细胞中NF-κB、BAX蛋白水平逐渐降低(P<0.05),呈剂量依赖效应。结论Bor可抑制细胞凋亡及炎症因子水平从而减弱IL-1β诱导的ATDC5细胞炎症性损伤,可能是通过抑制NF-κB途径实现的。