大黄素通过调控TLR4/NF-κB通路对脂多糖诱导血管内皮细胞氧化损伤的保护作用研究

目的研究大黄素对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用及机制。方法运用CCK-8细胞活力检测法筛选LPS体外诱导HUVEC细胞氧化损伤模型浓度及大黄素给药浓度。取HUVEC细胞,分为对照组、模型组(1μg/L LPS)、吡咯烷二硫代氨基甲酸铵(PDTC,阳性药,10μmol/L)组和大黄素低、高剂量(40、80μmol/L)组,置于37℃、5%CO2培养箱中培养24 h。ELISA法测定各组细胞上清液中一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;采用Western Blotting法检测各组细胞中Toll样受体(TLR4)、核因子κB(NF-κB p65)、TNF-α蛋白的表达。结果LPS浓度为1μg/L,作用24、48 h,HUVEC细胞存活率分别为64.8%、51.2%;40、80μmol/L大黄素作用24、48 h对HUVEC细胞存活率无显著影响,选择1μg/L作为LPS造模浓度,40、80μmol/L作用24 h作为大黄素给药条件。与对照组比较,模型组HUVEC细胞增殖活力显著下降,NO、MDA、ROS、TNF-α含量显著升高,TLR4、NF-κB p65、TNF-α蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,40、80μmol/L大黄素给药后HUVEC细胞生存率显著升高,NO、MDA、ROS、TNF-α含量显著降低,TLR4、NF-κB p65、TNF-α蛋白表达显著降低(P<0.05、0.01)。结论大黄素对LPS诱导的HUVEC细胞氧化损伤具有显著保护作用,其作用机制可能与调控TLR4/NF-κB通路、抑制炎症有关。