基因芯片诊断常见角膜致病真菌的临床应用

目的采用基因芯片技术对真菌性角膜病常见致病菌种进行临床快速检测。方法针对我国临床常见的角膜致病真菌,制备寡核苷酸探针芯片,以通用引物对170例临床采集样本进行PCR扩增,将扩增产物与寡核苷酸芯片杂交,观测相应区域的荧光显色情况,与KOH涂片法和真菌培养法鉴定结果进行统计学比较。结果170例临床角膜刮片标本,KOH涂片法检测阳性113例,阳性率为66.5%;真菌培养法阳性153例,阳性率为90.0%;芯片检测阳性147例,阳性率为86.5%,经χ2检验,芯片检测法与KOH涂片法阳性率差异有统计学意义(χ2=18.896,P=0.000),芯片检测法与真菌培养法阳性率差异无统计学意义(χ2=1.020,P=0.4);芯片法与培养法检测结果的一致性比较高度符合(Kappa值=0.80)。结论寡核苷酸探针芯片检测系统与传统的实验室检测手段比较,具有较好的特异性和灵敏度,缩短了检测时间,可对真菌性角膜病的病原菌进行快速诊断。

目视化常见角膜致病真菌基因芯片的构建

目的制备目视化常见角膜致病真菌基因芯片。方法将6属12种角膜致病真菌设计合成特异性寡核苷酸探针加尾后，固定于带正电荷尼龙膜的相应区域，用生物素标记的通用引物对12株标准菌株和82株临床分离株进行PCR扩增，将扩增产物与固定有寡核苷酸探针的尼龙膜进行反向斑点杂交，观测相应区域的斑点显色情况。结果12种真菌均产生了530～630 bp的PCR扩增产物，得到了具有各自特征的杂交后生物素-亲和素斑点显色图谱，可直接从该图谱上判断不同菌种。对82株临床分离株的检测敏感率为84．1％，未出现非特异性交叉反应。结论利用PCR结合反向斑点杂交技术制备目视化基因芯片，能够在3～4h完成对我国临床上常见的12种角膜致病真菌的菌种鉴定，特异性及敏感性较高。

固相杂交技术检测真菌性角膜病常见致病菌的初步研究

目的探讨快速、准确检测真菌性角膜病常见致病菌的方法。方法将临床上常见的角膜致病真菌6属12种经氨基化修饰的特异性寡核苷酸探针固定在醛基化的载玻片上。用一对荧光标记通用引物对上述真菌的DNA基因片断进行扩增，将带有荧光标记的扩增产物与载玻片上排列的探针进行杂交，置于荧光显微镜下观察其显色情况。结果12种真菌都产生了530～630bp的PCR扩增产物，在相同的条件下对其进行杂交检测,得到了具有各自特征的杂交后荧光显色图谱，通过荧光信号可直接对不同菌种进行区分判断。结论采用固相杂交技术能够在3～4h完成对临床上常见的12种角膜致病真菌的菌种检测。